家和順家脾胃水提物抗炎抗炎作用研究

家和順家脾胃水提物抗炎抗炎作用研究

世家獨(dú)裁菜msativi是指十字花科和獨(dú)立煎劑科的獨(dú)立煎劑。m，干燥成熟的種子。這是尼泊爾的傳統(tǒng)藥物之一。維爾維斯的藥物被稱為saurontertiz。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道本品有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、解毒、理肺殺蟲、廣譜抗菌、利尿助陽、促進(jìn)傷口愈合等作用?？尚兴[、鎮(zhèn)咳平喘、健脾胃,用于治療氣管炎、消化不良、腹瀉及傷口不愈等疾病,但其具體的有效成分及藥效作用很少見報(bào)道。前期僅探討了家獨(dú)行菜子水浸液的抗實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍、促進(jìn)潰瘍愈合、抑制小腸運(yùn)動(dòng)及鎮(zhèn)痛作用。本文對(duì)家獨(dú)行菜子各組份進(jìn)行初步的分離,探討其水提物的鎮(zhèn)咳、抗炎作用,并觀察其水提物、醇提物的抑菌作用,以期為家獨(dú)行菜子的進(jìn)一步研究提供依據(jù)。1材料和機(jī)器1.1藥物供試,供試藥物動(dòng)物:ICR小鼠60只(清潔級(jí)),♀♂兼用,體重(20±2)g,由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。受試藥物:家獨(dú)行菜子(SemenLepidiμmSativi)原植物藥用種子部分,購(gòu)于維吾爾藥材市場(chǎng)。實(shí)驗(yàn)病菌:枯草芽孢桿菌(P63501)、大腸桿菌(P44102)、金黃色葡萄球菌(P26003)、銅綠假單孢菌(P10104),購(gòu)于新疆醫(yī)科大學(xué)菌種保存中心。1.2混懸液的配制聯(lián)邦止咳露:深圳致君制藥有限公司,批號(hào)070913。阿司匹林腸溶片:新疆華康藥業(yè)有限責(zé)任公司,批號(hào):070107,用1%阿拉伯膠配成混懸液,濃度為5mg·ml-1。頭孢曲松鈉鈉:悅康藥業(yè)集團(tuán)有限公司,批號(hào)0705061。用注射用水配制成2μg·ml-1,1μg·ml-1。其他常用試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。1.3循環(huán)水式反滲透水系統(tǒng)shb-iiiRE-52B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);SHB-III循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司);HFsafe-1200生物安全柜(上海申力科學(xué)儀器有限公司);常規(guī)手術(shù)用具等。2方法2.1工作原理法取原生藥250g粉碎,依次加入以下溶劑:①石油醚:向原生藥中加入石油醚500ml,超聲提取30min,濾出濾液,濾渣再加入石油醚500ml重復(fù)提取,合并兩次濾液,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中(45℃,50r/min)濃縮,得成分Ⅰ(體積比為100∶7)。②乙醚:將①中濾渣加入乙醚500ml,超聲提取30min,取濾液,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中(30℃,50r/min)濃縮,得成分Ⅱ(體積比為100∶3)。③氯仿:將②中濾渣加入氯仿500ml,超聲提取30min,取濾液,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中(50℃,50r/min)濃縮,得成分Ⅲ(體積比為50∶27)。④丙酮:將③中濾渣加入丙酮500ml,超聲提取30min,取濾液,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中(45℃,50r/min)濃縮,得成分Ⅳ(體積比為100∶1)。⑤95%乙醇:將④中濾渣加入95%乙醇500ml,超聲提取30min,取濾液,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中(60℃,50r/min)濃縮,得成分Ⅴ(體積比為25∶1)。⑥甲醇:將⑤中濾渣加入甲醇500ml,超聲提取30min,取濾液,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中(55℃,50r/min)濃縮,得成分Ⅵ(體積比為50∶3)。⑦蒸餾水:將⑥中濾渣加入蒸餾水1000ml,超聲提取30min,取濾液,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中(78℃,50r/min)濃縮,得成分Ⅶ(體積比為100∶7)。2.2給藥及大鼠一般情況ICR小鼠30只,♀♂各半,隨機(jī)分成3組:NS組[0.2ml·(10g)-1]、聯(lián)邦止咳露組[0.2ml·(10g)-1]及家獨(dú)行菜子水提物組[0.1ml·(10g)-1]。每組10只,每日定時(shí)ig給藥,連續(xù)7d。于末次給藥1h后將小鼠置于1L玻璃鐘罩內(nèi)噴氨霧,觀察記錄各組小鼠咳嗽潛伏期(從放入罩內(nèi)到第一次咳嗽的時(shí)間)以及1min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。結(jié)果見表1。2.3膨脹度測(cè)定和小鼠右耳片水腫抑制率測(cè)定ICR小鼠30只,♀♂各半,隨機(jī)分成3組:NS組[0.2ml·(10g)-1]、阿斯匹林組[0.4ml·(10g)-1]及家獨(dú)行菜子水提物組[0.1ml·(10g)-1]。每組10只,每日定時(shí)ig給藥,連續(xù)7d。各組小鼠于末次給藥1h后用乙醚麻醉,在右耳的前后兩面涂布二甲苯作致炎劑(0.05ml/只)。4h后,將小鼠處死,剪下雙耳用6mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片,稱重,小鼠右耳片重量減去左耳片重即為腫脹度并計(jì)算腫脹抑制率。結(jié)果見表2。腫脹抑制率(%)=(NS組平均腫脹率-用藥組平均腫脹率)/NS組平均腫脹率×100%。2.4家：時(shí)間-殺菌曲線取無菌裝有LB液體培養(yǎng)基(8ml)的試管若干支,分為4組:即枯草芽孢桿菌組、大腸桿菌組、金黃色葡萄球菌組、銅綠假單孢菌組。每組中加入對(duì)應(yīng)的實(shí)驗(yàn)病菌(100μl),每種實(shí)驗(yàn)病菌組再分5組,分別加入家獨(dú)行菜子水提物(1ml/管)、乙醇提物(1ml/管)、甲醇提物(1ml/管)、頭孢曲松(1ml/管,2μg·ml-1)及無菌水(對(duì)照組,1ml/管),每個(gè)加藥試管設(shè)3個(gè)平行對(duì)照。將各組菌液置于37.8℃振蕩培養(yǎng)(250r·min-1),分別于0,4,8,12,16,20h在波長(zhǎng)600nm下測(cè)量各組菌液的吸光值(A)值。制作家獨(dú)行菜子水提物和醇提物對(duì)4種實(shí)驗(yàn)菌的時(shí)間-殺菌曲線(KCs)。結(jié)果見圖1～4。2.5抗抑菌劑的制備藥敏試紙的制備:將6mm的藥敏紙片,分別浸于家獨(dú)行菜子水提物、甲醇提物、乙醇提物、頭孢曲松(2μg·ml-1)、頭孢曲松(1μg·ml-1)溶液中浸泡24h,干燥備用。平板法接種4種實(shí)驗(yàn)菌,將上述5種藥敏試紙貼于各實(shí)驗(yàn)菌瓊脂表面,置于37.8℃孵育16h后檢測(cè)各平板的抑菌圈大小,觀察其抑菌效果。結(jié)果見表3。2.6統(tǒng)計(jì)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。3結(jié)果3.1聯(lián)邦躁露組與ns組輸注后數(shù)減少的比較表1鎮(zhèn)咳結(jié)果見表1。家獨(dú)行菜子水提物組與NS組比較,咳嗽潛伏期延長(zhǎng)、每分鐘咳嗽次數(shù)減少(P<0.05);聯(lián)邦止咳露組與NS組比較,有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01);結(jié)果顯示家獨(dú)行菜子水提物具有鎮(zhèn)咳作用,可以延長(zhǎng)由氨水所致的小鼠潛伏期,減少小鼠每分鐘咳嗽次數(shù),但與聯(lián)邦止咳露相比,鎮(zhèn)咳效果還有一定差距。3.2降低水腫率抗炎作用結(jié)果見表2。家獨(dú)行菜子水提物組與NS組比較,能夠抑制小鼠鼠耳腫脹,降低腫脹率(P<0.05);阿斯匹林組與NS組比較,有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。結(jié)果顯示家獨(dú)行菜子水提物對(duì)二甲苯所致小鼠鼠耳腫脹具有抑制作用,具有抗炎功效,但與非甾體類解熱鎮(zhèn)痛藥阿司匹林相比,抑制效果還有一定的差距。3.3單個(gè)蔬菜中的水提取物時(shí)間和醇提取物時(shí)間的殺菌曲線kcs3.3.1家：菜子乙醇提物+乙醇提物對(duì)枯草芽孢桿菌的殺菌效果,家見圖1。與頭孢曲松和空白對(duì)照組相比,家獨(dú)行菜子乙醇提物對(duì)枯草芽孢桿菌的殺菌效果較好,甲醇提物殺菌效果次之,水提物的殺菌效果較差。3.3.2對(duì)幽門桿菌的抗菌曲線kc見圖2。與頭孢曲松和空白對(duì)照組相比,家獨(dú)行菜子甲醇提物對(duì)大腸桿菌的殺菌效果較好,乙醇醇提物殺菌效果次之,水提物的殺菌效果較差。3.3.3不同種類植物的殺菌效果見圖3。與頭孢曲松和空白對(duì)照組相比:家獨(dú)行菜子乙醇提物對(duì)金黃色葡萄球菌的殺菌效果較好,甲醇提物殺菌效果次之,水提物的殺菌效果最差。3.3.4單胞銅綠假菌的殺菌曲線kec見圖4。與頭孢曲松和空白對(duì)照組相比,家獨(dú)行菜子水提物、乙醇提物對(duì)銅綠假單胞菌的殺菌效果較好,甲醇提物的殺菌效果最差。3.4國(guó)內(nèi)獨(dú)特的蔬菜水提取物和醇提物的抗菌效果抑菌圈大小(見表3)。數(shù)據(jù)顯示,家獨(dú)行菜子水提物、乙醇提物和甲醇提物對(duì)4種實(shí)驗(yàn)菌均有抑制作用。但抑菌效果因菌因藥而異。4家：水提物對(duì)二甲苯所致小鼠呼吸術(shù)后并發(fā)癥的影響家獨(dú)行菜子的具體有效成分及藥效作用很少見報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)室前期僅僅做了家獨(dú)行菜子水浸液的有關(guān)抗實(shí)驗(yàn)性潰瘍、抑制小腸蠕動(dòng)和鎮(zhèn)痛的研究。本文進(jìn)一步用生藥的提取方法對(duì)家獨(dú)行菜子組份進(jìn)行了初步的分離,對(duì)其水提物和醇提物進(jìn)行了鎮(zhèn)咳、抗炎及抑菌的研究。鎮(zhèn)咳實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,家獨(dú)行菜子水提物在一定劑量下對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有明顯鎮(zhèn)咳作用,能夠明顯的延長(zhǎng)咳嗽的潛伏期,可減少每分鐘咳嗽次數(shù)。結(jié)果顯示,水提物有解除平滑肌痙攣,擴(kuò)張氣管平滑肌作用。抗炎實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明家獨(dú)行菜子水提物對(duì)二甲苯所致小鼠鼠耳腫脹具有明顯的抑制作用,能降低小鼠耳腫脹度,提示其對(duì)急性非特異性炎癥具有抑制作用。這可能與其存在具有局部鎮(zhèn)痛、消炎作用的苷類等有效成分有關(guān),其具體有效成分及作用機(jī)理有待進(jìn)一步深入研究。抑菌實(shí)驗(yàn)表明,家獨(dú)行菜子水提物、乙醇提物及甲醇提物對(duì)4種實(shí)驗(yàn)菌均有抑制作用,其KCs曲線和抑菌圈因菌而異,各有不同。本文僅就一種濃度進(jìn)行了抑菌實(shí)驗(yàn),但其最佳抑菌濃度還需進(jìn)一步進(jìn)行探