行一步走程的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

行一步走程的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

距離遠(yuǎn)處是卡ppa的一部分。etchamp.干燥的根。別名扣鈕子(廣東乳源)、獨(dú)虎龍、黑皮蛇等,產(chǎn)于廣東、廣西、江西(大余)等地。性平,味苦、澀,有毒;功能活血散瘀,解痙止痛。用于治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛,筋骨不舒,咽喉腫痛,腹痛。本實(shí)驗(yàn)對(duì)獨(dú)行千里有效部位(DXQL)抗炎鎮(zhèn)痛方面進(jìn)行藥效學(xué)研究,以期為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。1大、小、小的適應(yīng)證及試劑獨(dú)行千里藥材購(gòu)自清平藥市,經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室童家贇講師鑒定為山柑科(Capparaceae)植物獨(dú)行千里CapparisacutifoliaSweet[C.membranaceaGardn.etChamp.]的干燥根。獨(dú)行千里有效部位自制:獨(dú)行千里根莖干燥后粉碎,分別加入12、10、10倍量75%~80%乙醇回流提取3次,時(shí)間分別為2、1.5、1.5h,合并提取液,減壓濃縮至浸膏,以1%~2%稀酸水酸化后,酸水液以氨水調(diào)PH至9,氯仿萃取,減壓回收氯仿所得稠膏,采用酸性染料比色法進(jìn)行含量測(cè)定,生物堿含量為63.7%,即得獨(dú)行千里氯仿部位。阿司匹林腸溶片(拜耳醫(yī)藥保健有限公司,規(guī)格100mg/片,批號(hào)116966);正清風(fēng)痛寧片(湖北正清制藥集團(tuán)股份有限公司,規(guī)格20mg/片,批號(hào)0906119),各藥臨用前以0.5%羧甲基纖維素(CMC)配成相應(yīng)濃度的混懸液(阿司匹林片除去腸衣后配制);弗氏完全佐劑(FAC),美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品(098K8729)。大鼠白介素1(IL-1)、腫瘤壞死因子(TNF-α)Elisa試劑盒,上海森雄科技實(shí)業(yè)公司產(chǎn)品;丙二醛(MDA)試劑盒,廣州市齊云生物技術(shù)有限公司提供;冰醋酸、二甲苯、伊文思蘭等試劑均為分析純。1.2儀器、試藥與儀器SPF級(jí)昆明小鼠(由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測(cè)所提供),雌雄兼用,體重18~22g,合格證號(hào)SCXK(粵)2008-0015。SPF級(jí)SD大鼠(由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測(cè)所提供),雄性,體重180~220g,合格證號(hào)SCXK粵)2008-0020。AT-858自動(dòng)酶標(biāo)儀(上海安泰分析儀器有限公司);UV2300型紫外可見(jiàn)光光度計(jì)(上海天美科學(xué)儀器有限公司);BP-211D電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司);6mm打孔器;ACS-1EAS型電子天平(精度0.5g,北京市菲姆斯科技開(kāi)發(fā)公司產(chǎn)品)。2方法2.1.1灌胃給藥、給藥SD大鼠50只,適應(yīng)性飼養(yǎng)3天,按體重隨機(jī)分為5組:模型組、正清風(fēng)痛寧片組(40mg/kg)、獨(dú)行千里有效部位小劑量組(折算成藥材量40g·kg-1)、中劑量組(80g·kg-1)、大劑量組(120g·kg-1),按1mL/100g體重灌胃給藥,模型組給予生理鹽水,各組給藥容積相等。連續(xù)給藥2天后。第3天用游標(biāo)卡尺在測(cè)量正常足厚度之后,每只大鼠右后足趾皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑0.1mL,并在6h、18h、24h、3、5天分別測(cè)量致炎后足腫脹度,并在10、14、18、22、26天分別測(cè)定左后足趾(非致炎足)的厚度。2.1.2水腫度測(cè)定雄性SD大鼠50只,按體重隨機(jī)分成5組。各組分別灌胃受試藥物或等體積生理鹽水,每日1次,連續(xù)7天。末次給藥30min后,于右后足皮下注射1%角叉菜膠生理鹽水溶液0.1mL,分別在致炎前和致炎后1、2、3、4h測(cè)量足爪容積,以致炎前后足爪容積的差值表示腫脹度。測(cè)量后處死動(dòng)物,截取右后足,稱(chēng)重,冰浴條件下剪碎、勻漿,按所購(gòu)試劑盒的操作步驟測(cè)定IL-1、TNF-α和MDA含量。2.1.3小鼠骨髓od值的測(cè)定小鼠50只,雌雄各半,隨機(jī)分成5組。各組分別灌胃受試藥物或等體積生理鹽水,每日1次,連續(xù)7天。末次給藥30min后,尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液0.2mL,隨后立刻腹腔注射0.6%醋酸0.2mL,20min后脫頸椎處死小鼠,剖開(kāi)腹腔用適量生理鹽水反復(fù)沖洗,并收集洗出液,濾紙濾過(guò),并調(diào)整容積至6mL,在3000r·min-1離心15min,取上清液于722型光柵分光光度計(jì)中在590nm處波長(zhǎng)測(cè)OD值。比較各組的差異。2.1.4對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響按2.1.3方法對(duì)小鼠隨機(jī)分組,給藥。末次給藥1h后,每只小鼠左耳涂布二甲苯0.1mL致炎,右耳不涂作為對(duì)照。1.5h后將小鼠脫頸椎處死,用直徑6mm打孔器分別在左、右耳同一部位打下圓耳片,秤重,以左、右耳片重量之差作為腫脹度,比較各組間差異。對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響按2.1.3方法對(duì)小鼠隨機(jī)分組,給藥。末次給藥30min后,各小鼠腹腔注射0.6%醋酸0.2mL,記錄注射醋酸后40min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)。3藥物的抗炎作用以足腫脹度為指標(biāo),采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行單因素方差分析。急發(fā)性和繼發(fā)性炎癥實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別見(jiàn)表1~2。從表1可知,24h內(nèi)為急性炎癥的發(fā)生期,與模型組相比,給藥組各個(gè)劑量和陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)其均有明顯抗炎作用。24h后為繼發(fā)性炎癥的形成期,各個(gè)給藥組對(duì)繼發(fā)性炎癥形成雖有一定的抑制作用,但不是特別明顯。3天后,給藥組和陽(yáng)性對(duì)照組的炎癥抑制作用較弱。由此可見(jiàn),獨(dú)行千里有效部位大、中、小劑量組,對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎急性炎癥,均有抑制作用。從表2可知:18天以?xún)?nèi)是繼發(fā)性炎癥的形成期,藥物對(duì)繼發(fā)性炎癥的形成有一定的抑制作用,作用相對(duì)緩和,無(wú)顯著性。18天后,繼發(fā)性炎癥形成,藥物的抗炎作用開(kāi)始顯效。與模型組相比,22天大、中劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組都有明顯的抗炎作用(P<0.05)。26天大劑量組有極顯著性差異(P<0.01),中劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組有顯著性差異(P<0.05)。3.2影響角豆菌引起的大鼠腳腫脹3.3影響小鼠腹腔毛細(xì)管的滲透性從表5可知,與模型組相比,獨(dú)行千里大、中劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組可明顯降低小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性(P<0.01)。3.4劑量對(duì)小鼠耳殼水腫的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6,獨(dú)行千里大、中、小劑量組與模型組相比,均呈不同程度的抑制小鼠耳殼腫脹作用,具有隨劑量增加而作用增強(qiáng)的趨勢(shì),大劑量組有極顯著性差異(P<0.01),中、小劑量組有顯著性差異(P<0.05)。與阿司匹林組比較,大劑量組有顯著性差異(P<0.05)。3.5影響醋酸大鼠扭轉(zhuǎn)的反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表7,與模型組比較,阿司匹林組、大劑量組均能顯著減少小鼠扭體次數(shù)(P<0.01或P<0.05)。4制備大鼠aa基因突變的大中藥的抗炎作用獨(dú)行千里藥材常用于治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛(RA),RA以關(guān)節(jié)組織慢性炎癥病變?yōu)橹饕憩F(xiàn),大鼠AA能較好地模擬人類(lèi)RA,是中醫(yī)藥治療RA的實(shí)驗(yàn)研究中被廣泛運(yùn)用的一種動(dòng)物模型。IL-1和TNF-α是重要的炎癥介質(zhì),低濃度時(shí)主要在炎癥的局部起作用,對(duì)中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞有激活、趨化作用。MDA是自由基引發(fā)的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的一種產(chǎn)物,可以激活環(huán)氧化酶(COX),一方面促進(jìn)花生四烯酸生成PG,導(dǎo)致細(xì)胞代謝紊亂誘發(fā)炎癥;另一方面可影響白三烯代謝誘發(fā)炎癥。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)獨(dú)行千里提取物對(duì)大鼠AA原發(fā)性病變有明顯的抑制作用,對(duì)繼發(fā)性病變也有顯著治療作用;抑制角叉菜膠致大鼠足腫脹;抑制毛細(xì)血管通透性增加、減少小鼠耳廓腫脹度;有明顯的鎮(zhèn)痛作用;與模型組相比,大中劑量組可降低IL-1含量(P<0.01),顯著降低TNF-α含量(P<0.05),降低MDA含量(P<0.01);提示其抗炎作用與降低炎癥組織中的炎癥因子IL-1、TNF-α和MDA含量有關(guān)。對(duì)獨(dú)行千里提取物酸化后加碘化汞鉀試液、碘化鉍鉀試液、硅鎢酸試液,均顯生物堿反應(yīng),提示其抗炎鎮(zhèn)痛作用的活性成分為生物堿類(lèi)成分,采用酸性染料比色法測(cè)定其含量為63.7%,在藥效學(xué)指引下對(duì)活性成分的篩選分離是進(jìn)一步研究的課