組織胚胎學(xué)緒論(2008)-課件

組織胚胎學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院zhujunquan@695225織胚胎學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院1

第一篇：組織學(xué)組織：上皮、結(jié)締、肌肉、神經(jīng)。器管：循環(huán)、呼吸、消化、排泄、生殖、內(nèi)分泌、感覺(jué)。

第二篇：胚胎學(xué)普通胚胎學(xué)。軟體動(dòng)物、甲殼動(dòng)物、魚類的發(fā)生。

第一篇：組織學(xué)2緒論1組織學(xué)研究對(duì)象：細(xì)胞、組織與器官研究?jī)?nèi)容：有機(jī)體的基本組織、構(gòu)成組織細(xì)胞的形態(tài)和構(gòu)造；各種組織構(gòu)成的器官的組織形式和聯(lián)系；細(xì)胞、組織與器官之間的相關(guān)性及對(duì)環(huán)境變化的反應(yīng)等。定義：研究機(jī)體細(xì)微結(jié)構(gòu)及其機(jī)能的科學(xué)。一、基本內(nèi)容緒論1組織學(xué)一、基本內(nèi)容3細(xì)胞（cell－C）組織（tissue）器官（organ）系統(tǒng)（system）細(xì)胞（cell－C）組織（tissue）器官（organ）系4細(xì)胞膜細(xì)胞核細(xì)胞質(zhì)卵細(xì)胞細(xì)胞膜卵細(xì)胞5組織胚胎學(xué)緒論(2008)_課件6組織胚胎學(xué)緒論(2008)_課件7組織胚胎學(xué)緒論(2008)_課件8細(xì)胞組織器官系統(tǒng)｝｝組織學(xué)各論組織學(xué)總論胚胎學(xué)細(xì)胞｝｝組織學(xué)各論組織學(xué)總論胚胎學(xué)92胚胎學(xué)◆研究?jī)?nèi)容狹義：胚胎發(fā)育。廣義：胚前發(fā)育+胚胎發(fā)育+胚后發(fā)育?！舳x研究機(jī)體發(fā)生及發(fā)育規(guī)律的科學(xué)。

胚前期：精卵發(fā)生-----受精作用胚胎期：受精作用-----孵化、產(chǎn)出胚后期：孵化、產(chǎn)出-----衰老、死亡2胚胎學(xué)胚前期：精卵發(fā)生-----受精作用103組織胚胎學(xué)的分科◆按研究對(duì)象分植物、動(dòng)物、人體組織（胚胎）學(xué)?！舭囱芯糠椒ǚ直容^組織學(xué)實(shí)驗(yàn)組織學(xué)病理組織學(xué)敘述胚胎學(xué)比較胚胎學(xué)生態(tài)胚胎學(xué)化學(xué)胚胎學(xué)分子胚胎學(xué)免疫胚胎學(xué)3組織胚胎學(xué)的分科111一般研究方法活體觀察切片技術(shù)（普通光學(xué)顯微技術(shù)）2特殊顯微鏡的應(yīng)用暗視野、相差顯、熒光顯微鏡電子顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡3其他新技術(shù)的應(yīng)用二、組織學(xué)研究方法1一般研究方法二、組織學(xué)研究方法12顯微鏡下直接觀察活體染色血液注入、三胚層染色細(xì)胞與組織培養(yǎng)細(xì)胞系的培養(yǎng)顯微電影（攝影）活體觀察顯微鏡下直接觀察活體觀察13A取材與固定：切成3mm3的小塊，入固定劑中。

使蛋白迅速被固定，防止組織自溶，盡量保持組織結(jié)構(gòu)，硬化組織。B脫水與包埋：乙醇梯度脫水、二甲苯透明、石蠟滲透、包埋。C切片與染色：將組織塊切成5-14微米的薄片，貼在載玻片上，展片、脫蠟、染色。組織切片——光學(xué)顯微鏡術(shù)A取材與固定：切成3mm3的小塊，入固定劑中。

使蛋14

嗜堿性：蘇木精為堿性染料，能將細(xì)胞核、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核蛋白體等嗜堿性結(jié)構(gòu)染成藍(lán)紫色。

嗜酸性：伊紅為酸性染料，細(xì)胞質(zhì)、線粒體、膠原纖維等嗜酸性結(jié)構(gòu)被染成紅色。

中性：對(duì)堿性和酸性染料都缺乏親和力。

H-E染色嗜堿性：蘇木精為堿性染料，H-E染色15甲苯胺藍(lán)染色堿性染料，可將細(xì)胞內(nèi)、外的某些物質(zhì)染成紫紅色。異染性：顯色與染料不同的特性稱為異染性。甲苯胺藍(lán)染色堿性染料，可將16其分辨率為0.2μm，放大倍數(shù)約為1000倍。普通光學(xué)顯微鏡觀察其分辨率為0.2μm，放大倍數(shù)普通光學(xué)顯微鏡觀察17用熒光素染色或者標(biāo)記的細(xì)胞或結(jié)構(gòu)。熒光標(biāo)記物：用熒光素標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的某些成分，使其發(fā)出不同的熒光。如溴化乙錠與口丫啶橙可與DNA結(jié)合。以熒光素標(biāo)記抗體，可檢測(cè)抗原的存在和分布。熒光顯微鏡觀察用熒光素染色或者標(biāo)記的細(xì)胞或結(jié)構(gòu)。熒光顯微鏡觀察18用于觀察組織培養(yǎng)中活細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。能將活細(xì)胞不同厚度以及細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)對(duì)光產(chǎn)生的不同折射作用轉(zhuǎn)換為光密度差異（明暗差），易于分辨細(xì)胞結(jié)構(gòu)。細(xì)胞培養(yǎng)室內(nèi)常用的是倒置相差顯微鏡，其光源和聚光器在載物臺(tái)的上方，物鏡在載物臺(tái)的下方，這樣便于觀察貼附于培養(yǎng)皿底壁的活細(xì)胞。相差顯微鏡觀察用于觀察組織培養(yǎng)中活細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。相差顯微鏡觀察19

用于觀察因反差或者分辨率不足的微小顆粒。有一個(gè)暗視野集光器，使光線不能進(jìn)入物鏡，故稱暗視野。標(biāo)本內(nèi)的小顆粒產(chǎn)生的衍射光或者散射光進(jìn)入物鏡。

暗視野顯微鏡觀察用于觀察因反差或者分辨率不足的微小顆粒。暗視野20

以激光為光源，光束經(jīng)聚焦后落在樣品的不同深度，并作移動(dòng)掃描，通過(guò)電信號(hào)彩色顯像，經(jīng)圖像分析系統(tǒng)對(duì)圖像做二維及三維處理。能對(duì)細(xì)胞內(nèi)被熒光標(biāo)記的結(jié)構(gòu)做微量分析，對(duì)細(xì)胞內(nèi)的鈣離子以及pH值進(jìn)行動(dòng)態(tài)分析，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的受體移動(dòng)、膜電位變化、酶活性和物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)；對(duì)細(xì)胞及其染色體進(jìn)行切割、分離、篩選和克隆。激光共聚焦掃描顯微鏡（CLSM）以激光為光源，光束經(jīng)聚焦后落在樣品的激光共聚21將電子束在樣品上進(jìn)行掃描，產(chǎn)生的兩次電子，用特定的探測(cè)器收集放大，形成電子信號(hào)傳到顯像管，在熒光屏上顯示圖像。特點(diǎn)：視場(chǎng)大，景深長(zhǎng)，圖像真實(shí)，富有立體感。掃描電鏡觀察將電子束在樣品上進(jìn)行掃描，產(chǎn)生的兩次電子，用特定的探測(cè)器收集22河蟹胚胎附著掃描電鏡圖河蟹胚胎附著掃描電鏡圖23組織胚胎學(xué)緒論(2008)_課件24柱狀細(xì)胞表面（掃描電鏡）柱狀25組織胚胎學(xué)緒論(2008)_課件26以電子束代替光線，以電磁透鏡代替光學(xué)透鏡。電子束經(jīng)電磁場(chǎng)強(qiáng)度放大，射到標(biāo)本上，最后在熒光屏上顯像細(xì)胞內(nèi)的超微結(jié)構(gòu)。電鏡下所見(jiàn)的超微結(jié)構(gòu)染色深的，稱為電子密度高，反之為電子密度低。透射電鏡觀察以電子束代替光線，以電磁透鏡代替光學(xué)透透射電鏡觀察27透射電鏡樣品制作透射28組織胚胎學(xué)緒論(2008)_課件29組織胚胎學(xué)緒論(2008)_課件30電子束投射到密度大吸附重金屬多的結(jié)構(gòu)時(shí),電子被散射的多,因此,射落到熒光屏上的電子少而呈暗像,電鏡照片呈黑或深灰色,稱為電子密度高。反之稱為電子密度低。電子束投射到密度大吸附重金屬多的結(jié)構(gòu)時(shí),電子31組織胚胎學(xué)緒論(2008)_課件32青蛤精子超微結(jié)構(gòu)青蛤33將人體或動(dòng)物的活細(xì)胞、活組織在體外培養(yǎng)，稱細(xì)胞或組織培養(yǎng)，細(xì)胞在體外生存，必須具備適宜的條件，包括營(yíng)養(yǎng)、O2和CO2的比例、滲透壓、pH值、溫度和濕度。利用體外培養(yǎng)細(xì)胞，可人為的給以各種不同的條件，研究不同條件對(duì)細(xì)胞的分裂、分化、結(jié)構(gòu)和功能等的影響，并可用顯微攝影等技術(shù)記錄細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化。組織或細(xì)胞培養(yǎng)將人體或動(dòng)物的活細(xì)胞、活組織在體外培養(yǎng)，稱細(xì)胞或組織培養(yǎng)，細(xì)34培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)35細(xì)胞化學(xué)與組織化學(xué)顯示細(xì)胞微細(xì)結(jié)構(gòu)的化學(xué)成分（糖、脂、核酸、酶）和活性?；驹恚涸诮M織切片和細(xì)胞樣品上滴加一定的試劑，該試劑與組織內(nèi)的某些成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，在局部形成有色沉淀物，通過(guò)顯微鏡觀察而對(duì)組織細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)成分進(jìn)行定位、定性和定量，作與功能相關(guān)分析的研究。細(xì)胞化學(xué)與組織化學(xué)顯示細(xì)胞微細(xì)結(jié)構(gòu)的化學(xué)成分（糖、脂、核酸、36過(guò)碘酸-希夫反應(yīng)簡(jiǎn)稱PAS反應(yīng)（periodacidSchiffreaction），顯示細(xì)胞內(nèi)糖原或多糖。原理：過(guò)碘酸的氧化作用先使糖分子的乙二醇基變?yōu)橐叶┗?，乙二醛基與Schiff試劑（無(wú)色亞硫酸品紅復(fù)合物）結(jié)合，形成紫紅色反應(yīng)產(chǎn)物。顏色反應(yīng)的深淺取決于組織內(nèi)多糖的乙二醇分子的多寡。

——多糖過(guò)碘酸-希夫反應(yīng)簡(jiǎn)稱PAS反應(yīng)（periodacidSc37組織胚胎學(xué)緒論(2008)_課件38

酶組織化學(xué)：原理：利用酶及其相應(yīng)底物的水解、氧化等作用，然后再使底物的反應(yīng)產(chǎn)物與某種捕獲劑發(fā)生反應(yīng)，形成沉淀或有色的最終產(chǎn)物，從而可以檢測(cè)該酶在組織切片或細(xì)胞內(nèi)的分布以及活性強(qiáng)弱。即通過(guò)顯示酶的催化活性以表示酶的存在。如磷酸酶（堿性磷酸酶ALP、酸性磷酸酶ACP）?！该附M織化學(xué)：——酶39核酸組織化學(xué)顯示DNA的傳統(tǒng)方法是Feulgen反應(yīng)，切片先用稀鹽酸處理，使DNA分子中脫氧核糖與嘌呤之間的連接鍵打開，形成醛基。醛基與Schiff試劑作用(原理同PAS反應(yīng))，使細(xì)胞核DNA顯紫紅色。甲基綠-焦寧染色法：同時(shí)顯示DNA和RNA。兩種染料均呈堿性，甲基綠使細(xì)胞核內(nèi)的DNA呈綠色，焦寧使細(xì)胞質(zhì)和核仁內(nèi)的RNA呈紅色。——核酸核酸組織化學(xué)——核酸40是應(yīng)用抗原與抗體結(jié)合的免疫學(xué)原理，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)多肽、蛋白質(zhì)及膜表面抗原和受體等大分子物質(zhì)的存在與分布。特異性強(qiáng)，敏感度高，是發(fā)育生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等眾多領(lǐng)域的重要研究手段。如疾病的快速診斷等。免疫細(xì)胞化學(xué)是應(yīng)用抗原與抗體結(jié)合的免疫學(xué)原理，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)多肽、蛋白質(zhì)及膜41分離純化某種蛋白，作為抗原注入另一動(dòng)物體內(nèi)，后者即產(chǎn)生相應(yīng)的特異性抗體（免疫球蛋白）。從被免疫動(dòng)物血清中取出該抗體，再以熒光素、酶、鐵蛋白或膠體金標(biāo)記。再用這種標(biāo)記抗體處理組織切片或者細(xì)胞，標(biāo)記抗體即與細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的蛋白質(zhì)(抗原)發(fā)生特異結(jié)合。顯微鏡下通過(guò)觀察標(biāo)記物而獲知肽或蛋白質(zhì)的分布部位。常用熒光素：FITC（異硫氰酸熒光素）。分離純化某種蛋白，作為抗原注入另一動(dòng)物體內(nèi)，后者即產(chǎn)生相應(yīng)的42組織胚胎學(xué)緒論(2008)_課件43

辣根過(guò)氧化物酶（HRP），從辣根菜中提取。HRP的底物是3，3’-二氨基聯(lián)苯胺（DAB）和雙氧水（H2O2）。HRP使DAB氧化形成棕黃色產(chǎn)物，可在光鏡和電鏡下觀察。鐵蛋白或膠體金：免疫電鏡中常用。常用標(biāo)記物：常用標(biāo)記物：44一是直接法：將標(biāo)記抗體與樣品中的抗原直接結(jié)合。操作簡(jiǎn)單，敏感度不及間接法。二是間接法：將分離的抗體（一抗）再作為抗原免疫另一種動(dòng)物，制備該抗體的抗體（二抗），再以標(biāo)記物標(biāo)記二抗。先后以一抗和標(biāo)記二抗處理樣品，最終形成：“抗原”-“一抗”-“標(biāo)記二抗”復(fù)合物。標(biāo)記抗體與被檢測(cè)抗原的結(jié)合方式：一是直接法：將標(biāo)記抗體與樣品中的抗原直接結(jié)合。操作簡(jiǎn)單，敏感45X射線衍射技術(shù)：晶體激光技術(shù)超速離心技術(shù)：g=1.11X10-5(R)X(rmp)2顯微操作技術(shù)：移核胚胎轉(zhuǎn)移技術(shù)放射自顯影技術(shù)流式細(xì)胞術(shù)其他X射線衍射技術(shù)：晶體其他46◆水產(chǎn)動(dòng)物繁育生物學(xué)研究繁殖習(xí)性、性腺發(fā)育、配子發(fā)生、受精、胚胎與幼體發(fā)育?！羲a(chǎn)動(dòng)物生理學(xué)研究如魚類生長(zhǎng)、生殖、消化與吸收等生理機(jī)能相關(guān)的器官系統(tǒng)的組織結(jié)構(gòu)的研究?！艚M織病理學(xué)研究◆組織-細(xì)胞毒理學(xué)研究◆遺傳育種中的應(yīng)用研究（雜交、雌核發(fā)育、多倍體誘導(dǎo)、性別控制、核移植等）三、組織胚胎學(xué)的應(yīng)用◆水產(chǎn)動(dòng)物繁育生物學(xué)研究三、組織胚胎學(xué)的應(yīng)用47四、學(xué)習(xí)組織胚胎學(xué)注意的問(wèn)題

理論和實(shí)驗(yàn)密切聯(lián)系斷面和立體的關(guān)系結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系從靜態(tài)結(jié)構(gòu)了解動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)的變化四、學(xué)習(xí)組織胚胎學(xué)注意的問(wèn)題理論和實(shí)驗(yàn)密切聯(lián)系48在實(shí)驗(yàn)課中觀察、分析、比較，然后再記憶。切片中顯示的是組織和細(xì)胞的平面結(jié)構(gòu)，如要研究它的立體結(jié)構(gòu)，可制成連續(xù)切片，觀察記錄每一張切片中的結(jié)構(gòu)，然后進(jìn)行綜合分析，繪制模式圖，以表達(dá)整體結(jié)構(gòu)。同一細(xì)胞或某一種結(jié)構(gòu)或組織，由于切面的不同而有著形態(tài)的差異。因此，應(yīng)注意從平面的局部的圖象中，正確地理解立體與整體的結(jié)構(gòu)關(guān)系。理論和實(shí)驗(yàn)密切聯(lián)系斷面和立體的關(guān)系在實(shí)驗(yàn)課中觀察、分析、比較，然后再記憶。理論和實(shí)驗(yàn)密切聯(lián)系斷49顯微鏡下觀察的組織切片都是結(jié)構(gòu)斷面的形態(tài)。由于所切的部位不同，在一個(gè)細(xì)胞某斷面可見(jiàn)細(xì)胞核，在某斷面看不到細(xì)胞核。又如身體內(nèi)許多管狀的器官，由于所切方位不同，往往呈完全不同的形態(tài)。因此在觀察切片上的形態(tài)結(jié)構(gòu)時(shí)，要考慮斷面和立體的關(guān)系。

斷面和立體的關(guān)系顯微鏡下觀察的組織切片都是結(jié)構(gòu)斷面的形態(tài)。斷面和立體的關(guān)系50示單管不同橫切面模式圖示單管不同縱切面模式圖

示彎管不同切面模式圖

示單管不同橫切面模式圖示單管不同縱切面模式圖示彎管不同切51例如神經(jīng)細(xì)胞有細(xì)長(zhǎng)突起的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，以傳遞神經(jīng)沖動(dòng)；分泌蛋白質(zhì)的細(xì)胞，其細(xì)胞質(zhì)中含豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體和許多分泌顆粒等；紅細(xì)胞含豐富的血紅蛋白，則具有結(jié)合和攜帶氧的功能；巨噬細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)含較多的溶酶體。