代謝組學(xué)與中醫(yī)證候研究

代謝組學(xué)與中醫(yī)證候研究

作為中醫(yī)學(xué)的一種獨(dú)特的辨證論治模式，其精髓是中醫(yī)辨證論治的本質(zhì)，是中醫(yī)理、法律和法規(guī)的橋梁和關(guān)鍵。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展,傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)向現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)的轉(zhuǎn)化已成為中醫(yī)學(xué)術(shù)發(fā)展不可逆轉(zhuǎn)的潮流,其中證候研究又一直是中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究最主要的攻關(guān)對(duì)象。近50年來(lái),許多學(xué)者借助現(xiàn)代科技,用臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)五臟證、陰陽(yáng)證、寒熱證、血瘀證等的本質(zhì)進(jìn)行了不同層次與多角度的探討,也取得了一些可喜的成績(jī),但總體而言,盡管結(jié)果指標(biāo)找到不少,但真正能用于中醫(yī)臨床的卻少之又少,既沒(méi)有找到證的特異性指標(biāo),也沒(méi)能促進(jìn)中醫(yī)理論的根本創(chuàng)新與發(fā)展。證候研究到底路在何方,近些年來(lái)興起的代謝組學(xué)技術(shù)以其全新的理念與方法似乎使人們看到了一絲新的曙光。1現(xiàn)代辯證法與證據(jù)本質(zhì)的研究1.1證候及證候要素證的傳統(tǒng)含義雖然是基本清楚的,但隨著證本質(zhì)研究的深入,證的概念也不斷被賦予新的內(nèi)涵。普通高等教育“十五”國(guó)家級(jí)規(guī)劃教材《中醫(yī)辨證學(xué)》把“證”定義為“是機(jī)體在疾病發(fā)展過(guò)程中某一階段的病理概括,它包括了病因,病變部位、性質(zhì)以及邪正關(guān)系,反映出疾病發(fā)展過(guò)程中某一階段的病理變化本質(zhì)”。沈自尹則把“證”定義為“一種綜合性功能態(tài),有具體的功能網(wǎng)絡(luò)和調(diào)控中心”。宋劍南認(rèn)為,證候是通過(guò)四診手段獲取的機(jī)體在某一時(shí)空條件下對(duì)各種內(nèi)外因素(包括機(jī)體生理功能及生物、化學(xué)、環(huán)境、精神、氣候等各種致病因子)的整體性反應(yīng)而呈現(xiàn)的生理、病理信息的綜合判斷結(jié)果的表述。證候也可簡(jiǎn)稱(chēng)反應(yīng)態(tài),具有整體性、時(shí)空性、傳變性和個(gè)體差異性等特點(diǎn)。王永炎等從證候要素的視角解釋道:“任何一種證候都是由若干證候要素和證候要素靶位組成,其中證候要素是對(duì)證候病因病機(jī)的表述,證候要素靶位是關(guān)于證候要素發(fā)生部位的厘定?！比我蛔C候要素或證候要素靶位都具有不同于其他證候要素或證候要素靶位的特異性癥狀、體征及其組合?？梢?jiàn),隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)科技的發(fā)展,人們對(duì)證內(nèi)涵的認(rèn)識(shí)也是不斷變化與深化的。1.2方證和證候的一致性研究自從20世紀(jì)60年代初開(kāi)展腎本質(zhì)研究以來(lái),證本質(zhì)研究大體經(jīng)歷過(guò)幾個(gè)發(fā)展的高峰時(shí)期,如20世紀(jì)70年代后期的證候動(dòng)物模型研究,80年代中期的證候微觀指標(biāo)客觀化研究,以及21世紀(jì)初的病-證-方的物質(zhì)基礎(chǔ)縱深研究?？v觀近半個(gè)世紀(jì)的證候研究成果,現(xiàn)有的大多數(shù)動(dòng)物證候模型與人類(lèi)證候的一致性尚存在諸多爭(zhēng)議,試圖以單個(gè)或幾個(gè)微觀指標(biāo)來(lái)取代證候宏觀診斷的設(shè)想已被認(rèn)為幾無(wú)可能,而方證相應(yīng)(互證)雖然符合中醫(yī)臨床實(shí)踐,但中醫(yī)浩如煙海的方劑及其臨床使用的靈活性又使得這種研究思路與辨證論治的初衷漸行漸遠(yuǎn)。當(dāng)然,在這些研究中,腎虛證、血瘀證等證本質(zhì)的研究獨(dú)樹(shù)一幟,在中醫(yī)現(xiàn)代化研究中具有里程碑意義,為其他證候的研究起到了示范性作用。2證候研究的技術(shù)價(jià)值從人們對(duì)證候內(nèi)涵認(rèn)識(shí)的不斷變化我們可以看出,證候雖然在宏觀上有明確的專(zhuān)業(yè)表述,但在微觀本質(zhì)上則是隨人類(lèi)對(duì)自身生理病理的洞察而不斷深入的。近年來(lái)人們借鑒還原論的方法,分別從生化、生理、超微結(jié)構(gòu)、神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)以及基因及其表達(dá)、調(diào)控等方面探討了證的實(shí)質(zhì),雖然多數(shù)研究都反映了不同證候特定的部分生理生化指標(biāo)或者基因表達(dá)產(chǎn)物等的改變,但這遠(yuǎn)未揭示出證的本質(zhì)。對(duì)于中醫(yī)藥這一復(fù)雜性科學(xué),證候研究最終還是要圍繞其核心理論即整體觀、恒動(dòng)觀等來(lái)展開(kāi)的,而不是簡(jiǎn)單地使用還原論的方法,這就需要有新的科技手段作為支撐。近期興起的以綜合、集成、整體研究為特點(diǎn)的系統(tǒng)生物學(xué)研究方法,無(wú)疑為這一問(wèn)題的解決提供了契機(jī)。系統(tǒng)生物學(xué)的理念與中醫(yī)學(xué)的整體觀、系統(tǒng)觀和辨證論治思維非常吻合,也與中醫(yī)重視從人與自然,人與社會(huì)和人體內(nèi)在的普遍聯(lián)系及動(dòng)態(tài)變化去分析、認(rèn)識(shí)、把握疾病發(fā)生、發(fā)展、變化的客觀規(guī)律的認(rèn)識(shí)相一致。同時(shí),要進(jìn)行證本質(zhì)的研究,科學(xué)規(guī)范的證候診斷是其不可逾越的前提,血瘀證和腎虛證研究的成果也充分證實(shí)了這一點(diǎn)。由于證候是在四診基礎(chǔ)上對(duì)疾病內(nèi)在規(guī)律的抽象概括,傳統(tǒng)上主要依賴(lài)醫(yī)生的主觀經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行判定,所以在診斷上存在很大的差異性和模糊性,難以達(dá)成共識(shí)。因此,制定證候的統(tǒng)一、客觀乃至量化的宏觀診斷標(biāo)準(zhǔn)是進(jìn)行證本質(zhì)研究的重要前提之一。當(dāng)前,研究者多采用流行病學(xué)的方法,通過(guò)望、聞、問(wèn)、切,將四診所獲得的信息進(jìn)行整理,研究其中一些普遍性的規(guī)律以建立相應(yīng)的診斷標(biāo)準(zhǔn)。但是,由于受四診的主觀性、抽樣的差異性以及統(tǒng)計(jì)分析的復(fù)雜性等因素的影響,使得多數(shù)證候的診斷標(biāo)準(zhǔn)或其研究方法尚難以獲得業(yè)內(nèi)的認(rèn)可。因此,證候宏觀研究一方面要注重引入模糊數(shù)學(xué)、拓?fù)鋵W(xué)等先進(jìn)科學(xué)手段,提高其研究水平,另一方面可以嘗試從寒熱證候、虛實(shí)證候等一些簡(jiǎn)單、相反的基本證候入手,由淺入深地逐步推進(jìn)。3代謝組學(xué)理論代謝組學(xué)作為系統(tǒng)生物學(xué)的組成部分,是繼基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)之后新近發(fā)展起來(lái)的一門(mén)學(xué)科,是一門(mén)“在新陳代謝的動(dòng)態(tài)進(jìn)程中,系統(tǒng)研究代謝產(chǎn)物的變化規(guī)律,揭示機(jī)體生命活動(dòng)代謝本質(zhì)”的科學(xué)。它強(qiáng)調(diào)把人體作為一個(gè)完整的系統(tǒng)來(lái)研究,通過(guò)測(cè)定人體各種體液內(nèi)代謝物的組成變化來(lái)認(rèn)識(shí)和反映人體代謝網(wǎng)絡(luò)在疾病和藥物影響下的代謝模式。具體而言,代謝組學(xué)的研究過(guò)程包括前期的樣本制備,中期的代謝產(chǎn)物分離、檢測(cè)與鑒定,以及后期的數(shù)據(jù)分析與模型建立3個(gè)部分。其樣本主要為尿液、血漿或血清、唾液以及細(xì)胞和組織的提取液等。代謝物的檢測(cè)、分析與鑒定是代謝組學(xué)的核心,目前主要的技術(shù)手段包括核磁共振(nuclearmagneticresonance,NMR)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(liquidchromatography-massspectrometry,LC-MS)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(gaschromatography-massspectrometry,GC-MS)等。NMR具有無(wú)損傷性,不會(huì)破壞樣品的結(jié)構(gòu)和性質(zhì),樣品前處理簡(jiǎn)單,可在接近生理?xiàng)l件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn);NMR沒(méi)有偏向性,對(duì)所有化合物的靈敏度是一樣的,譜峰位置和強(qiáng)度可定性和定量,可在一定的溫度和緩沖液的范圍內(nèi)選擇實(shí)驗(yàn)條件;可以進(jìn)行實(shí)時(shí)和動(dòng)態(tài)的檢測(cè);可設(shè)計(jì)多種編輯手段,實(shí)驗(yàn)方法靈活多樣。盡管NMR對(duì)樣本制備要求少,但其靈敏度較低,檢測(cè)到的物質(zhì)少,且結(jié)構(gòu)定性難是其存在的缺陷。質(zhì)譜(massspectrometry,MS)技術(shù)是將離子化的原子、分子或是分子碎片,按質(zhì)量或是質(zhì)荷比(M/Z)大小順序排列成的圖譜,并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行各種無(wú)機(jī)物、有機(jī)物的定性或定量分析。其中GC-MS定量重現(xiàn)性好,是最成熟的技術(shù),分辨率和靈敏度高于NMR,具有成熟的商業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)庫(kù),然而其只能檢測(cè)有揮發(fā)性的物質(zhì)和可衍生的親水性物質(zhì)。LC-MS靈敏度和選擇性比NMR高,也避免了GC-MS繁雜的樣品前處理,然而其基質(zhì)抑制影響定量準(zhǔn)確性,穩(wěn)定性沒(méi)有GC-MS高。因此,NMR技術(shù)與MS技術(shù)各有其優(yōu)缺點(diǎn),需要在研究中靈活選用。4從生物活性的角度學(xué)代謝組學(xué)技術(shù)作為系統(tǒng)生物學(xué)研究中相對(duì)成熟和極為重要的手段,在進(jìn)入國(guó)內(nèi)后不久即被迅速用于中醫(yī)證本質(zhì)的研究。羅和古等基于代謝組學(xué)的理念,提出“證是機(jī)體對(duì)體內(nèi)外各種環(huán)境變化和致病因素作出反應(yīng)的一種功能狀態(tài),其外候表現(xiàn)為一組有相互關(guān)聯(lián)的癥狀和體征群,其本質(zhì)是機(jī)體失衡而致的代謝或其網(wǎng)路的改變”。當(dāng)前,人們主要從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床觀察兩方面來(lái)進(jìn)行中醫(yī)證候的相關(guān)研究。4.1基于動(dòng)物模型相關(guān)測(cè)試的研究4.1.1不同分析方法對(duì)離子型肝郁證的影響徐舒等采用慢性束縛的方法造成肝郁證大鼠模型,運(yùn)用1H-NMR技術(shù)對(duì)模型組和對(duì)照大鼠血清進(jìn)行代謝組學(xué)分析。研究發(fā)現(xiàn),模型組血清中葡萄糖和肌酸的含量明顯偏高,而3-羥基丁酸、谷氨酰胺、磷脂酰膽堿、磷酸膽堿和不飽和脂肪酸的含量明顯偏低,從而得出結(jié)論,這些差異小分子物質(zhì)構(gòu)成“肝郁證”的代謝標(biāo)志物群,有助于闡釋肝郁證的本質(zhì)。王偉明等則采用夾尾法制備肝氣郁結(jié)證大鼠模型,對(duì)其尿液進(jìn)行NMR檢測(cè)后發(fā)現(xiàn),模型組大鼠尿液與對(duì)照組相比,馬尿酸、α-酮戊二酸、檸檬酸、異檸檬酸和烏頭酸的含量減少,肌酸酐、丙酮、乙酸、肌酸、煙酸和5-羥基吲哚-3-乙酸含量則明顯增加。陳斌等也采用夾尾法建立肝氣郁結(jié)證大鼠模型,并在造模成功后給予柴胡疏肝散干預(yù)。通過(guò)NMR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),模型組大鼠尿液馬尿酸、α-酮戊二酸、檸檬酸、異檸檬酸和烏頭酸含量減少,肌酸酐、丙酮、乙酸、肌酸、煙酸和5-羥基吲哚-3-乙酸的含量顯著升高;而在給予柴胡疏肝散灌胃干預(yù)后,治療組大鼠尿液的肌酸、丙酮和肌酸酐含量明顯減少,N-氧化三甲胺、氧化三甲胺與?；撬岷棵黠@增加,提示柴胡疏肝散能夠部分調(diào)控肝氣郁結(jié)證異常的代謝產(chǎn)物,促使代謝表型向正常范圍回歸,對(duì)肝氣郁結(jié)證大鼠代謝紊亂有一定的恢復(fù)作用。4.1.2大鼠血漿成分變化簡(jiǎn)維雄等用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支的方法制作了大鼠心血瘀阻模型,運(yùn)用GC-MS進(jìn)行血漿代謝組學(xué)研究,同時(shí)檢測(cè)各組血液流變學(xué)指標(biāo)。大鼠血漿樣品散點(diǎn)圖顯示,模型組與空白對(duì)照組、養(yǎng)心通脈方組、假手術(shù)組完全分離;因子載荷圖表明,乳酸、丙氨酸、纈氨酸、琥珀酸、蘋(píng)果酸、硬脂酸、花生四烯酸含量明顯增高,果糖含量明顯降低;采用養(yǎng)心通脈方干預(yù)后其代謝物含量、血液流變學(xué)指標(biāo)均有不同程度的回調(diào)。認(rèn)為發(fā)生改變的上述8種代謝物與反映“血瘀”病理的血液流變學(xué)指標(biāo)改變具有一致性,有可能作為心血瘀阻證的代謝性生物標(biāo)志物。4.1.3腎髓質(zhì)毒性通過(guò)-酮戊二酸、惡意化合物含量的變化李林等依據(jù)中醫(yī)“勞則氣耗”的理論,采用睡眠剝奪法制作大鼠氣虛血瘀模型,利用NMR進(jìn)行尿液代謝組學(xué)研究。結(jié)果顯示,模型組大鼠尿液的肌氨酸酐含量增加最為明顯,可能預(yù)示著腎小管損傷和腎毒性的存在,提示氣虛證可能與腎功能異常有著密切關(guān)系;同時(shí),氧化三甲胺、檸檬酸、α-酮戊二酸、琥珀酸的含量變化可能預(yù)示著腎髓質(zhì)毒性的存在。這與中醫(yī)論述“勞則氣耗”所致的氣虛血瘀證表現(xiàn)出的全身機(jī)能減退癥狀以及循環(huán)系統(tǒng)改變有一定的吻合之處。王勇等通過(guò)在左冠狀動(dòng)脈前降支放置Ameroid縮窄環(huán)制備冠心病慢性心肌缺血小型豬模型,并結(jié)合宏觀體征、冠狀動(dòng)脈造影和超聲心動(dòng)圖等方法確立了氣虛血瘀證,采用GC-MS和模式識(shí)別技術(shù),分析冠心病心肌缺血?dú)馓撗鲎C模型與假手術(shù)組小型豬12周血漿的代謝物及相應(yīng)代謝物譜群的變化。結(jié)果顯示,在氣虛血瘀證早期,氨基酸、糖代謝與脂類(lèi)代謝紊亂,三者相互作用,引起能量代謝中三羧酸循環(huán)平衡被破壞,檸檬酸含量下降。這些病理改變可能進(jìn)一步加重冠心病氣虛血瘀證,其中檸檬酸、葡萄糖、硬脂酸、棕櫚酸、甘油、醋酸等化合物的濃度變化較大,這些代謝物的變化模式有望成為臨床診療冠心病氣虛血瘀證的參考指標(biāo),并為研究證候的客觀化提供新的思路。4.1.4不同分組細(xì)胞的代謝圖譜Chen等采用注射氫化可的松的方法制作大鼠腎陽(yáng)虛證模型,運(yùn)用GC-MS分析方法進(jìn)行尿液代謝組學(xué)研究。與正常組相比,模型組體內(nèi)代謝網(wǎng)絡(luò)在代謝圖上反映出不同于正常組的分布圖譜。而經(jīng)溫陽(yáng)中藥肉蓯蓉干預(yù)后的腎陽(yáng)虛對(duì)照組的代謝圖譜偏離模型組,回歸至正常范圍,呈現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)修復(fù)的結(jié)果,并接近于正常對(duì)照組。表明代謝組學(xué)通過(guò)研究體內(nèi)代謝網(wǎng)絡(luò)的相應(yīng)變化及代謝物的差異,有望在中醫(yī)證型研究上作為一種新的可“計(jì)量”的診斷或評(píng)價(jià)手段,對(duì)基于“辨證論治”的中藥藥效作用評(píng)價(jià)具有較大的應(yīng)用價(jià)值。4.1.5大鼠陰道代謝分類(lèi)結(jié)果盧江等以肺炎鏈球菌誘導(dǎo)肺熱證候模型,運(yùn)用超高壓液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)其尿液代謝組學(xué)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示,模型組大鼠尿液的代謝輪廓發(fā)生改變,并且在得分圖中代謝物組發(fā)生明顯偏移。隨著造模后所處時(shí)間段的不同,其代謝產(chǎn)物發(fā)生了一定的變化,分類(lèi)趨勢(shì)越加明顯,在造模后第5天達(dá)到最大值。所得出的代謝組學(xué)研究結(jié)果與肺熱證候的宏觀體征及病理生化指標(biāo)結(jié)果相符。4.2疾病的證據(jù)性質(zhì)研究4.2.1糖代謝明顯異于健康志愿者蔣海強(qiáng)等對(duì)17例Ⅱ級(jí)高血壓病肝陽(yáng)上亢證患者及8例健康志愿者的血清樣本進(jìn)行NMR分析發(fā)現(xiàn),肝陽(yáng)上亢證患者體內(nèi)部分氨基酸代謝和葡萄糖代謝明顯異于健康志愿者,這為理解高血壓病肝陽(yáng)上亢證的證候本質(zhì)及該類(lèi)病證的輔助診斷提供了依據(jù)。陸益紅等對(duì)32例健康人及33例原發(fā)性高血壓病患者(其中肝火亢盛17例、痰濕雍盛8例及陰虛陽(yáng)亢8例)的血清內(nèi)源性代謝物進(jìn)行GC-MS測(cè)定,健康人與高血壓病患者的血清代謝物譜具有明顯差異,進(jìn)一步采用Mahalanobis距離判別法不僅可清晰區(qū)分3種不同證型的高血壓,還能顯示高血壓的發(fā)展過(guò)程。4.2.2gc-tof/ms檢測(cè)簡(jiǎn)維雄等采用GC-MS技術(shù)對(duì)6例冠心病心血瘀阻證患者、16例非心血瘀阻證患者及10例健康志愿者血漿代謝產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn),花生四烯酸、硬脂酸、乳酸、尿素、檸檬酸、β-羥基丁酸、油酸、葡萄糖和丙氨酸為冠心病心血瘀阻證患者的血漿差異代謝產(chǎn)物,其不僅與脂質(zhì)代謝、糖代謝相關(guān),也與缺氧、劇痛引起的應(yīng)激相關(guān)。張紅栓等對(duì)10例冠心病心絞痛痰濁證患者和10例血瘀證患者的血漿樣本進(jìn)行NMR檢測(cè),發(fā)現(xiàn)兩組血漿樣本中與能量代謝相關(guān)的代謝物差異顯著。王廣基等采用氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜(gaschromatography-timeof-flight/massspectrometry,GC-TOF/MS)技術(shù)對(duì)29例冠心病痰阻心脈證患者、14例冠心病氣陰兩虛證患者及27例健康志愿者的血液樣本進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,兩證型患者的多個(gè)內(nèi)源性代謝物的含量存在明顯差異,顯示其與能量代謝、氨基酸代謝和核苷酸代謝異常相關(guān);同時(shí),利用偏最小二乘法判別分析(partialleastsquares-discriminantanalysis,PLS-DA)法建立的痰阻心脈證和氣陰兩虛證數(shù)學(xué)模型參數(shù)與臨床中醫(yī)癥狀分級(jí)量化指標(biāo)具有顯著的相關(guān)性,提示代謝組學(xué)所研究的體內(nèi)小分子化合物可能正是中醫(yī)分型的物質(zhì)基礎(chǔ)。華何與等對(duì)18例健康人和18例冠心病心絞痛血瘀證患者(其中氣滯血瘀證、心血瘀阻證和氣虛血瘀證各6例)的血漿樣本進(jìn)行NMR檢測(cè),發(fā)現(xiàn)心絞痛血瘀證患者血漿的檸檬酸、琥珀酸、葡萄糖、乙酰糖蛋白、低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白、3-羥基丁酸、谷氨酸、脯氨酸及亮氨酸含量較高,高密度脂蛋白、不飽和脂肪酸、蘇氨酸、組氨酸含量則較低;進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),氣虛血瘀證組與其他兩類(lèi)血瘀證組代謝譜差別較大,而氣滯血瘀證與心血瘀阻證兩組間差異不明顯,提示代謝組學(xué)方法對(duì)于研究冠心病心絞痛中醫(yī)證候具有重要價(jià)值。朱萱萱等對(duì)29例健康志愿者和90例不同證型冠心病患者(其中痰阻心脈型患者31例,氣陰兩虛型患者18例,氣虛血瘀型患者29例及氣滯血瘀型患者12例)的血清進(jìn)行GC-TOF/MS檢測(cè),結(jié)合PLS-DA法。結(jié)果表明,該方法不僅可有效區(qū)分疾病組和健康對(duì)照組,并能將男性患者中的氣虛血瘀型和痰阻心脈型,女性患者中的氣虛血瘀型、痰阻心脈型和氣陰兩虛型明顯區(qū)分開(kāi)來(lái),提示基于GC-TOF/MS和模式識(shí)別的代謝組學(xué)技術(shù)在揭示傳統(tǒng)中醫(yī)理論本質(zhì)上有著廣泛的應(yīng)用前景。4.2.3有極量代謝相關(guān)的感冒嚴(yán)興海等對(duì)39例腎虛痰瘀型哮喘患者和40例健康人的血漿進(jìn)行NMR檢測(cè),發(fā)現(xiàn)腎虛痰瘀型哮喘患者代謝產(chǎn)物標(biāo)志物的產(chǎn)生不僅與氣道炎癥、氣道超敏反應(yīng)和氣道重塑等哮喘病理生理變化密切相關(guān),還與哮喘發(fā)作狀態(tài)下機(jī)體的能量代謝改變有關(guān),提示腎虛痰瘀型哮喘患者可能存在長(zhǎng)期持續(xù)耗能與免疫功能紊亂的狀態(tài),而氣道炎癥持續(xù)刺激可能是導(dǎo)致這種狀態(tài)的主要原因。這為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)腎虛痰瘀型哮喘的微觀物質(zhì)基礎(chǔ)、評(píng)價(jià)中醫(yī)藥對(duì)腎虛痰瘀型哮喘的干預(yù)效果提供了初步的證據(jù)。4.2.4痰瘀證腫瘤患者代謝活性成分變化巴吐?tīng)枴べI(mǎi)買(mǎi)提明等通過(guò)對(duì)460例腫瘤患者(包括痰瘀證患者356例和非痰瘀證患者104例)和50名健康人的血漿進(jìn)行NMR檢測(cè),發(fā)現(xiàn)腫瘤患者血漿中多種氨基酸水平顯著下降,葡萄糖、糖蛋白、谷氨酰胺、鯊肌醇、乳酸、膽堿、肌酸水平也明顯下降,甲酸、丙酮、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸、β-羥丁酸、肉堿、丙二酸、不飽和脂肪酸、極低密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇含量則明顯升高。與非痰瘀證腫瘤患者比較,痰瘀證腫瘤患者血漿中亮氨酸、丙氨酸、瓜氨酸、酪氨酸、組氨酸、異亮氨酸、纈氨酸等多種氨基酸以及谷氨酰胺、肌醇、鯊肌醇、乳酸、肌酸等代謝物含量明顯偏低,而丙酮、乙酰乙酸、不飽和脂肪酸、極低密度脂蛋白、α葡萄糖、β葡萄糖、糖蛋白等代謝物含量則明顯升高,提示腫瘤患者體內(nèi)脂肪代謝加強(qiáng),多種氨基酸下降,細(xì)胞抗氧化能力下降,而痰瘀證腫瘤患者體內(nèi)的代謝紊亂程度可能比非痰瘀證腫瘤患者更為嚴(yán)重。趙曉山等采用病證結(jié)合的方法,以慢性胃炎和消化性潰瘍患者為觀察對(duì)象,應(yīng)用NMR儀對(duì)19例脾氣虛證患者、12例濕熱蘊(yùn)脾證患者及12例健康人的唾液進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn),脾氣虛證組患者唾液中谷氨酰胺、蔗糖、乳酸鹽、苯丙氨酸的含量相對(duì)較高,濕熱蘊(yùn)脾組患者唾液中乙酸、丙酸鹽、?；撬岬暮肯鄬?duì)較高。以上物質(zhì)可作為脾氣虛證、濕熱蘊(yùn)脾證的辨證參考指標(biāo),同時(shí)在一定程度上印證了中醫(yī)“脾在液為涎”理論的科學(xué)性。5中醫(yī)證候研究的模型構(gòu)建證是中醫(yī)整體觀和辨證論治觀的具體體現(xiàn),更是中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究中的關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題。但證候所具有的整體性、時(shí)空性、個(gè)體差異性等特點(diǎn),使得傳統(tǒng)以還原論為主的研究思維難以實(shí)現(xiàn)對(duì)證候研究的降維與整合,這也使證本質(zhì)研究成為中醫(yī)理論研究中的主要難點(diǎn)之一。作為系統(tǒng)生物學(xué)的代謝組學(xué),它能夠多層次、多靶點(diǎn)、動(dòng)態(tài)性地研究和表達(dá)集體的功能狀態(tài),可以通過(guò)代謝物的變化實(shí)時(shí)表達(dá)外源性擾動(dòng)帶來(lái)的功能變化,其整體性及動(dòng)態(tài)的功能性與中醫(yī)證候?qū)Σ±頎顟B(tài)的表達(dá)理念相吻合。因此,將代謝組學(xué)理念與方法引入中醫(yī)證本質(zhì)研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。當(dāng)前,代謝組學(xué)技術(shù)應(yīng)用于中醫(yī)證本質(zhì)的研究雖然已取得了一定成果,但仍存在諸多不足。如通過(guò)制備相應(yīng)證候的動(dòng)物模型來(lái)進(jìn)行證本質(zhì)研究,雖然動(dòng)物模型有一致性好、條件可控、觀察周期快、取材方便等諸多優(yōu)勢(shì),但目前多數(shù)中醫(yī)證候的動(dòng)物模型尚難以得到業(yè)內(nèi)公認(rèn)。例如,在動(dòng)物證候模型判定上,傳統(tǒng)中醫(yī)通過(guò)望、聞、問(wèn)、切來(lái)進(jìn)行診斷,其方法顯然難以復(fù)制于動(dòng)物;同時(shí),