志賀氏菌檢測

志賀氏菌檢測技術(shù)

志賀氏菌是引起人類細菌性痢疾的病原菌，僅引起人類的腸道內(nèi)感染，對其他動物均無致病力，可隨患者的糞便污染外環(huán)境。細菌性痢疾至今仍然是我國城鄉(xiāng)最為常見的腸道傳染病,病人和帶菌者是本病的傳染源，尤以非典型病例、慢性患者和帶菌者在流行病學上的意義更為重要。主要內(nèi)容生物學性狀標本采集和運送分離培養(yǎng)初步鑒定血清凝集系統(tǒng)生化鑒定生物學性狀形態(tài)與染色為革蘭氏陰性桿菌，長約2-3μm,寬0.5-0.7μm。不形成芽胞，無莢膜，無鞭毛，有菌毛。培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧。營養(yǎng)要求不高，能在普通培養(yǎng)基上生長，最適溫度為37℃，最適pH為6.4-7.8。37℃培養(yǎng)18-24小時后菌落呈圓形、微凸、光滑濕潤、無色、半透明、邊緣整齊，直徑約2nm，宋內(nèi)氏菌菌落一般較大，較不透明，并常出現(xiàn)扁平的粗糙型菌落。在液體培養(yǎng)基中呈均勻渾濁生長，無菌膜形成。生化特性能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣（福氏6型和鮑氏13、14型的部分菌株會產(chǎn)生少量氣體）。大多不發(fā)酵乳糖，僅宋內(nèi)氏菌遲緩發(fā)酵乳糖。靛基質(zhì)產(chǎn)生不定，甲基紅陽性，氧化酶、VP試驗均陰性，不產(chǎn)生H2S和尿素酶。根據(jù)生化反應可進行初步分類。常以甘露醇和乳糖發(fā)酵特性來區(qū)分志賀菌的生化群常以甘露醇和乳糖發(fā)酵特性來區(qū)分志賀菌的生化群

A群：痢疾志賀菌，甘露醇、乳糖、棉子糖及鳥氨酸脫羧酶均陰性。B群：福氏志賀菌，棉子糖和甘露醇陽性（其中4、6型常見甘露醇陰性的變種），乳糖及鳥氨酸脫羧酶陰性。C群：鮑氏志賀菌，甘露醇陽性，乳糖、棉子糖及鳥氨酸脫羧酶（除13型）均陰性。D群：宋內(nèi)氏菌，甘露醇和乳糖（遲緩）陽性，鳥氨酸脫羧酶陽性。志賀菌屬抗原分類標本采集糞便標本應盡量在抗生素應用前采集，采集新鮮糞便標本中的膿血、黏液部分1g～5g（水樣便1ml～5ml）。肛拭子或采便管將標本立即保存于Cary-Blair運送培養(yǎng)基內(nèi)送檢

水標本直接增菌法:直接采集可疑水樣450ml，加入50ml10倍濃縮的GN增菌肉湯，37℃增菌6～8h。過濾集菌法：采集水樣500～1000ml用無菌濾膜（0.45～0.65μm）過濾，取下菌膜直接貼種于選擇性平板培養(yǎng)過夜或無菌條件下剪碎后放入9mlGN增菌肉湯，37℃增菌6～8h后轉(zhuǎn)種平板。吸附沉淀法食品固體：于廣口瓶或無菌塑料袋中，實驗室無菌稱取25g樣品，剪碎后加入225mlGN增菌肉湯中，37℃增菌6～8h。液體：采取食品50～100ml，實驗室無菌稱（量）取25g（ml）樣品加入225mlGN增菌肉湯中，37℃增菌6～8h。乳粉類應以無菌操作取25g放入裝有225ml滅菌鹽水的三角瓶中，搖勻，37℃增菌6～8h。血液:當懷疑為菌血癥時，靜脈采集5~10ml血液，按1:10比例加入血增菌培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)。其他標本:疑似痢疾爆發(fā)疫情病原學檢測時外環(huán)境樣本可采集患者的污染衣物、剩飯菜、可疑食品、抹布、污水、井水等，采集的標本應立即按1：10的比例接種GN增菌肉湯，置37℃增菌6～8h。媒介昆蟲如蒼蠅類，用消毒蠅拍拍打10~15只/份,裝入9mlGN增菌肉湯中，盡快送實驗室，置37℃增菌4～6h。標本運送現(xiàn)場采集的糞便標本若在2小時內(nèi)不能送達實驗室，應置冷藏包中送檢（內(nèi)置冰排，可保存1~3天）。水、食品等外環(huán)境標本若在2小時內(nèi)不能送達實驗室，應保存于帶有冰排的采樣箱內(nèi)送檢。分離培養(yǎng)直接分離采用接種環(huán)多點蘸取糞便標本中可疑部分或用采樣拭子直接涂種，接種于麥康凱（MAC）及海克頓（HE）腸道瓊脂平板各一塊。也可選XLD、SS、DHL或DCA，但應慎用SS瓊脂，其可抑制Ⅰ型志賀