基因工程-4-受體

第四章基因工程的受體系統(tǒng)

1、大腸桿菌受體系統(tǒng)①基因復(fù)制原核細(xì)胞2、芽孢桿菌受體系統(tǒng)擴(kuò)增場所受體系統(tǒng)3、其他細(xì)菌受體系統(tǒng)②外源基因表達(dá)場所1、酵母菌受體系統(tǒng)真核細(xì)胞2、哺乳動物細(xì)胞受體系統(tǒng)受體系統(tǒng)3、植物細(xì)胞受體系統(tǒng)受體(宿主)Host:能支持質(zhì)粒,病毒進(jìn)行復(fù)制的生物體。受體系統(tǒng)一、E.coli受體系統(tǒng)大腸埃希氏菌(E.coli)通常稱為大腸桿菌，是Escherich在1885年發(fā)現(xiàn)的1、E.coli受體系統(tǒng)的特點(diǎn)

①

遺傳背景清楚—利于研究

②

繁殖快—易于獲得大量基因產(chǎn)物

③

含有質(zhì)?！诨蜣D(zhuǎn)移

④

表達(dá)非E.coli基因，其潛力幾乎是無限的2、E.coli受體系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)

①

遺傳背景清楚—利于研究

②

繁殖快—易于獲得大量基因產(chǎn)物

③

含有質(zhì)?！诨蜣D(zhuǎn)移

④

表達(dá)非E.coli基因，其潛力幾乎是無限的3、E.coli受體系統(tǒng)的缺點(diǎn)

①

高水平表達(dá)的基因產(chǎn)物易發(fā)生沉淀，凝聚，不易折疊，無生物活性②

基因產(chǎn)物純化工藝復(fù)雜（大海撈針）③

基因產(chǎn)物受污染（內(nèi)毒素）④

基因產(chǎn)物對受體菌有毒害作用⑤

基因產(chǎn)物易被水解⑥

從安全角度—并不理想⑦

缺乏基因產(chǎn)物表達(dá)后加工機(jī)制

基因型：endA1gyrA96(nalR)thi-1recA1relA1lacglnV44F‘[Tn10proAB+lacIqΔ(lacZ)M15]hsdR17(rK-mK+)。

特點(diǎn)：具有四環(huán)素抗性和萘啶酮酸抗性。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。

用途：分子克隆和質(zhì)粒提取。

Xl1-Blue菌株endA1=eliminationofnon-specificdigestionbyEndonucleaseIrecA1=ForreducedoccurrenceofunwantedrecombinationinclonedDNA

基因型：F–ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3[lacIlacUV5-T7gene1ind1sam7nin5])。

特點(diǎn)：該菌株用于以T7RNA聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達(dá)宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達(dá)受控于λ噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動子，該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達(dá)。

用途：蛋白質(zhì)表達(dá)。

BL21(DE3)菌株ompT=mutationinoutermembraneproteinproteaseVII,reducingproteolysisofexpressedproteins

基因型：F-ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3)pLysS(cmR)。

特點(diǎn)：該菌株帶有pLysS，具有氯霉素抗性。此質(zhì)粒還有表達(dá)T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能夠降低目的基

因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)。適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達(dá)。

用途：蛋白質(zhì)表達(dá)

BL21(DE3)ply菌株

基因型：F-endA1glnV44thi-1recA1relA1gyrA96deoRnupGΦ80dlacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169,hsdR17(rK-,λ–特點(diǎn)：一種常用于質(zhì)?？寺〉木辍Ｆ洇?0dlacZΔM15基因的表達(dá)產(chǎn)物與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。用途：分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。DH5α菌株

基因型：endA1glnV44thi-1relA1gyrA96recA1mcrB+Δ(lac-proAB)e14-[F‘traD36proAB+lacIqlacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。特點(diǎn)：部分抗性缺陷，適合重復(fù)基因表達(dá),可用于M13克隆序列測定和藍(lán)白斑篩選。用途：分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。JM109菌株

基因型：F-，mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)，φ80，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1，araΔ139Δ(ara-leu)7697，galU，galK，rps，(Strr)endA1，nupG

用途：高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增，能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳。

TOP10菌株第三節(jié)基因工程的受體系統(tǒng)

1、大腸桿菌受體系統(tǒng)原核細(xì)胞2、芽孢桿菌受體系統(tǒng)

受體系統(tǒng)3、其他細(xì)菌受體系統(tǒng)

1、酵母菌受體系統(tǒng)真核細(xì)胞2、哺乳動物細(xì)胞受體系統(tǒng)受體系統(tǒng)3、植物細(xì)胞受體系統(tǒng)受體系統(tǒng)二、枯草桿菌受體系統(tǒng)

芽抱桿菌是一類耐高溫、高壓及低pH值的有益微生物1、枯草桿菌（Bacillussubtilis）受體系統(tǒng)特點(diǎn)

①

最大優(yōu)點(diǎn)：外分泌

②

高水平表達(dá)，基因產(chǎn)物不發(fā)生沉淀

③