動(dòng)物細(xì)胞工程(知識(shí)梳理)

第三節(jié)動(dòng)物細(xì)胞工程選修3第二章細(xì)胞工程主要內(nèi)容動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)

動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)

動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體制備

4123動(dòng)物細(xì)胞工程常用技術(shù)手段包括一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)學(xué)習(xí)目標(biāo)：1、簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程、條件及應(yīng)用2、對(duì)比說出動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)原理、條件、結(jié)果、培養(yǎng)目的請(qǐng)自主完成導(dǎo)學(xué)案課前預(yù)習(xí)部分一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)1．概念：（1）材料：取自動(dòng)物

或

動(dòng)物的器官或組織。（2）場(chǎng)所：在

模擬動(dòng)物

。（3）目的：使動(dòng)物細(xì)胞或組織繼續(xù)

、

并維持原有的

和

。一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)2．過程：（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：

取動(dòng)物組織塊剪碎，用

處理，形成分散的

，此稱細(xì)胞懸液，然后接種到

中培養(yǎng)，待細(xì)胞分裂形成一層細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到新培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)。（2）動(dòng)物組織培養(yǎng)：

剪取動(dòng)物組織塊，用

沖洗，將組織塊移入

，使組織塊

在培養(yǎng)瓶的瓶壁上，稱貼壁培養(yǎng)。一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)3．培養(yǎng)的條件：（1）環(huán)境條件：包括

、

、

和

等。①溫度：哺乳動(dòng)物多以

℃為宜；②PH值：多數(shù)細(xì)胞生存的最適pH為

；

③氣體：細(xì)胞培養(yǎng)所需氣體主要有

和

，

是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的

；

④營(yíng)養(yǎng)成分：有

等。一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)（2）培養(yǎng)基：

①天然培養(yǎng)基：取自

、

和

等；其特點(diǎn)是

、

。

②合成培養(yǎng)基：人工配制，仍需加入

；其特點(diǎn)是成分

、便于實(shí)驗(yàn)條件的控制。一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)4．培養(yǎng)類型：（1）原代培養(yǎng)：

①概念：從機(jī)體取出組織或細(xì)胞的

，一般培養(yǎng)10代左右；

②特點(diǎn)：細(xì)胞的

未發(fā)生很大改變；

③應(yīng)用：藥物測(cè)試、

等試驗(yàn)。（2）傳代培養(yǎng)：由于

的限制和

的消耗，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖減緩，需要將原代細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞

，轉(zhuǎn)移到

中繼續(xù)培養(yǎng)，一般可繼續(xù)培養(yǎng)

代左右。一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)5．技術(shù)的應(yīng)用：用于

、

和

等領(lǐng)域。補(bǔ)充概念：細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官（取材）細(xì)胞懸液10代細(xì)胞50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無限傳代單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液（分解細(xì)胞間的蛋白）原代培養(yǎng)胰蛋白酶或膠原蛋白酶剪碎過程：細(xì)胞株細(xì)胞系動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量蛋白質(zhì)遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)補(bǔ)充概念：細(xì)胞貼壁：在培養(yǎng)瓶中，懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象叫做接觸抑制。細(xì)胞貼壁過程那么什么是接觸抑制？接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止，數(shù)量不再增加。50代以后失去接觸抑制接觸抑制部分細(xì)胞突變，獲得不死性，向癌細(xì)胞方向發(fā)展，糖蛋白減少。一、動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)探究》》1、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，為什么選擇胚胎期或幼齡動(dòng)物的器官和組織？

2、為什么要用胰蛋白酶對(duì)取出的動(dòng)物組織進(jìn)行處理？胃蛋白酶不行嗎？3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)相同嗎？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較二、細(xì)胞核移植與動(dòng)物體細(xì)胞克隆1．克?。褐高z傳上完全相同的

、

或來自同一祖先的生物個(gè)體的

。2．動(dòng)物體細(xì)胞克?。簩⒐w體細(xì)胞的

與受體去核卵細(xì)胞的

進(jìn)行人工組合，借助于卵細(xì)胞的發(fā)育能力，經(jīng)過培養(yǎng)發(fā)育成

進(jìn)而形成新個(gè)體的技術(shù)，其關(guān)鍵是

技術(shù)，利用的是動(dòng)物細(xì)胞核的

性。3．細(xì)胞核移植：利用

技術(shù)等將某種動(dòng)物細(xì)胞的

移入同種或者異種動(dòng)物的

的技術(shù)。二、細(xì)胞核移植與動(dòng)物體細(xì)胞克隆4．大致過程如下：（動(dòng)物克?。┒?、細(xì)胞核移植與動(dòng)物體細(xì)胞克隆卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植融合后的卵細(xì)胞二、細(xì)胞核移植與動(dòng)物體細(xì)胞克隆5．克隆技術(shù)應(yīng)用：

在克服動(dòng)物

雜交繁殖障礙、創(chuàng)造

等方面具有重要意義和潛在經(jīng)濟(jì)價(jià)值；在醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域，人的核移植胚胎干細(xì)胞經(jīng)過誘導(dǎo)分化形成相應(yīng)的組織、器官，可用于組織器官的

（治療性克隆）；此外，還能利用克隆技術(shù)保護(hù)和挽救

。

但是目前克隆技術(shù)并不成熟，仍存在某些問題，有待進(jìn)一步完善。二、細(xì)胞核移植與動(dòng)物體細(xì)胞克隆討論》》1、動(dòng)物核移植技術(shù)選擇的受體細(xì)胞為什么是卵細(xì)胞？2、你認(rèn)為用體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動(dòng)物，是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？3、閱讀課本56頁(yè)積極思維，從社會(huì)倫理道德方面思考生殖性克隆會(huì)引發(fā)哪些社會(huì)問題？4、分析圖2-12的技術(shù)路線，找出生殖性克隆與治療性克隆的區(qū)別，以及應(yīng)該阻斷哪一步來阻止生殖性克??？5、討論克隆技術(shù)的應(yīng)用和前景。三、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體（一）動(dòng)物細(xì)胞融合1．概念：是指

或

結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。2．誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法：

物理法：

、

常見的誘導(dǎo)因素有化學(xué)法：

、

生物法：

等。3．應(yīng)用：制造

。三、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體（二）單克隆抗體1．制備過程：（1）能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是：

；

能夠無線增殖的細(xì)胞：

；（2）利用

融合，檢驗(yàn)和