丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒(丙氨酸底物法)

PAGE丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒（丙氨酸底物法）標準化操作規(guī)程1目的規(guī)范實驗室操作，保證檢驗工作順利有效進行特制定此規(guī)程。2授權(quán)操作人經(jīng)培訓且考核通過的實驗室檢驗人員。3適用范圍：本試劑適用于體外定量檢測人血清或血漿中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）的活力。4檢驗方法本試劑反應原理采用國際臨床化學聯(lián)合會（IFCC）推薦的方法。5檢驗原理在丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的作用下，L-丙氨酸與α-酮戊二酸反應，生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸被試劑中的乳酸脫氫酶（LDH）還原為L-乳酸，同時NADH被氧化為NAD＋，使340nm處的光吸收值下降，通過監(jiān)測340nm處光吸收值下降的速率，可以測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活力。樣品中內(nèi)源性丙酮酸的干擾可由試劑中LDH在反應延遲時間內(nèi)消除，不會干擾測定。ALTL-丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+L-谷氨酸LDH丙酮酸+NADHL-乳酸+NAD+6檢驗標本要求6.1樣本為血清。6.2不得使用溶血或被污染的樣本。6.3樣本在2℃~8℃條件下可保存7天、室溫條件下可保存1天。7試劑及配套品7.1試劑來源長春迪瑞醫(yī)療科技股份有限公司丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒7.2試劑組成 試劑盒組成主要組成成份濃度/范圍試劑1（R1）Tris緩沖液80mmol/L丙氨酸600mmol/L乳酸脫氫酶≥1820U/L試劑2（R2）Tris緩沖液80mmol/L還原型輔酶I≥0.75mmol/La-酮戊二酸36mmol/L7.3試劑的穩(wěn)定性與貯存：7.3.1試劑在2℃~8℃條件下，干燥、避光、密封貯存，有效期為18個月。7.3.2試劑開封后在2℃~8℃條件下可穩(wěn)定30天，試劑不可冷凍。7.3.3反應液在2℃~8℃可穩(wěn)定30天。7.4試劑的變質(zhì)指示：若試劑混濁，或在340nm處試劑空白吸光度值低于1.000A時，不能使用。8實驗儀器及性能指標8.1實驗儀器迪瑞CS系列全自動生化分析儀8.2試劑性能指標8.2.1空白吸光度：A≥1.000。8.2.2空白吸光度變化率：︱△A︱/min≤0.002/min。8.2.3分析靈敏度：測試1U/L被測物時，吸光度變化率（△A/min）＜-0.0001。8.2.4線性范圍：4U/L～1000U/L；線性相關(guān)系數(shù)r≥0.9900；[4，200]U/L范圍內(nèi)，線性絕對偏差應不超過±40U/L；（200，1000]范圍內(nèi)，線性相對偏差不超過±15％。8.2.5準確度：相對偏差應在±15.0%范圍內(nèi)。8.2.6測量精密度：重復性：CV≤5.0%。批間差：R≤6.0%。9校準程序9.1校準品來源長春迪瑞醫(yī)療科技股份有限公司生產(chǎn)的臨床化學校準血清9.2校準品的組成：人血清9.3校準品的存貯：未復溶的校準血清在避光條件下，2～8℃可穩(wěn)定至標簽失效期。復溶后校準血清在避光條件下，2～8℃可穩(wěn)定7天；15～25℃可穩(wěn)定1天；-20℃可穩(wěn)定30天。9.4校準品使用注意事項9.4.1若該復溶血清受細菌污染，將會降低許多成分的穩(wěn)定性。9.4.2不同批號的校準血清不能交叉使用，因為批號于批號之間的賦值不同。9.5校準程序建議使用試劑盒配套的校準品，按儀器使用說明進行校準。當試劑批號更換或質(zhì)控失控時，需要重新校準。10質(zhì)量控制10.1質(zhì)控品來源長春迪瑞醫(yī)療科技股份有限公司生產(chǎn)的臨床化學質(zhì)控血清(水平I和水平II)10.2質(zhì)控品組成：人血清10.3質(zhì)控品存貯未復溶的校準血清在避光條件下，2～8℃可穩(wěn)定至標簽失效期。復溶后校準血清在避光條件下，2～8℃可穩(wěn)定7天；15～25℃可穩(wěn)定1天；-20℃可穩(wěn)定30天。10.4質(zhì)控品使用注意事項若該復溶血清受細菌污染，將會降低許多成分的穩(wěn)定性。10.5質(zhì)量控制建議使用迪瑞公司質(zhì)控品，進行質(zhì)量控制。實驗室應自行建立質(zhì)控區(qū)間和限值，若質(zhì)控值失控，應采取糾正措施。11操作程序11.1試劑配制11.1試劑準備：試劑R1和試劑R2為液體試劑，可直接使用。11.2項目參數(shù)：測定溫度37℃R1:用量240μL主波長340nm樣本用量15μL副波長405nmR2:用量60μL吸光度范圍0-2A延遲時間60s比色杯光徑1.0cm測定時間60～120s測定模式速率法反應方向負反應11.3樣本測試操作步驟記錄吸光度變化△記錄吸光度變化△A/min60s～120s300s樣本用量:15μL試劑R1用量:240μL加試劑R2:60μL主波長:340nm副波長:405nm60s11.4計算方法：使用校準品的計算方法：樣本管吸光度變化△A/min樣本濃度（U/L）=×校準品濃度（U/L）校準管吸光度變化△A/min不使用校準品的計算方法（340nm）：樣本濃度（U/L）=△A/min×K因數(shù)=△A/min×3376建議使用校準品進行檢測，不使用校準品進行檢測時所得結(jié)果的可靠性不如使用校準品的結(jié)果。11.5注意事項：11.5.1本品僅用于體外診斷。11.5.2避免測試過程中添加試劑，避免操作時日光直射。11.5.3試劑和樣本用量可根據(jù)不同儀器的要求按比例改變。11.5.4試劑1與試劑2按4:1比例混合，可作為單試劑使用。11.5.5若試劑混濁，或在340nm處試劑空白吸光度值低于1.000A時，不能使用。11.5.6單位換算：U/L×16.67×10-3=μkat/L12結(jié)果判斷12.1當樣本濃度超出本試劑線性范圍時，應將樣本用0.9%NaCl或蒸餾水按1：9稀釋后再測試，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)10或降低樣本體積。12.2丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶含量的檢測只是臨床醫(yī)師對患者進行診斷的指標之一，臨床醫(yī)師還要根據(jù)患者的體癥、病史以及其它的診斷項目、診斷手段進行綜合判斷。13參考區(qū)間反應溫度37℃時，健康成年人參考值為：男性：5-40U/L女性：5-35U/L注：本參考值范圍僅供參考，建議各實驗室建立自己的參考值范圍。14臨床意義ALT活性增高肝膽疾病傳染性肝炎、中毒性肝炎、脂肪肝和膽管炎等。心血管疾病心肌梗死、心肌炎、心力衰竭時肝淤血和腦出血等。藥物和毒物氯丙嗪、異菸肼、奎寧、水楊酸制劑及乙醇，鉛、汞、四氯化碳或有機磷等引起ALT活性增高。ALT活性降低磷酸吡多醛缺乏癥。15復檢操作程序按儀器使用說明書進行復查操作。16方法局限性16.1.檢驗結(jié)果的準確性依賴于儀器的校正和測定溫度、時間的控制。。16.2.當樣本中黃疸＞1368μmol/L、血紅蛋白＞10g/L、抗壞血酸＞5.7mmol/L、甘油三酯＞15.8mmol/L時可能會影響檢測結(jié)果。16.3.由于紅細胞中ALT約為血清中的3～5倍，溶血將造成ALT測定結(jié)果假性增高，因此溶血標本不能用于測定ALT。17注意事項樣本、廢液等有潛在生物傳染性，操作者應遵守實驗室安全操作規(guī)定，并按當?shù)蒯t(yī)療廢棄物、感染性廢棄物、產(chǎn)業(yè)廢棄物等規(guī)定處理廢液。18個人防護18.1請把標本當作可能感染HIV、HBV、HCV等的危險物質(zhì)處置。為了避免或減少相關(guān)的傳染風險，請使用一次性手套。18.2若誤入眼內(nèi)或口中、或接觸到皮膚時，請迅速用水充分沖洗，必要時請接受醫(yī)生治療。19當檢測系統(tǒng)不能工作時，所采取的補救措施當儀器發(fā)生故障時，迅速聯(lián)系儀器廠家進行維修。20參考文獻20.1YoungDS.EffectsofDrugsonClinicalLaboratoryTests.ThirdEdition.1990,3:6～12.20.2Walln?ferH，ESchmidt,FWSchmidt,eds.SynopsisderLeberkrankheiten,GeorgThiemeVerlag,Stuttgart,1974.20.3