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微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌的染色和形態(tài)觀察微生物學(xué)教研室郭棵棵(驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn))上節(jié)課實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察顯微鏡油鏡頭的使用與保護(hù)示教:細(xì)菌的基本形態(tài)與特殊結(jié)構(gòu)的觀察操作:?jiǎn)稳旧?、革蘭染色材料:葡萄球菌、大腸桿菌肉湯培養(yǎng)物1支/6人載玻片2張/人
實(shí)驗(yàn)內(nèi)容了解:
1.顯微鏡油鏡鏡頭的使用與保護(hù)
2.細(xì)菌的基本形態(tài)與特殊結(jié)構(gòu)的觀察
3.常用的細(xì)菌染色方法掌握:
1.細(xì)菌單染色和革蘭染色的方法和意義
2.細(xì)菌染色標(biāo)本的制備技術(shù)教學(xué)目標(biāo)菌落大??;
形狀(圓形或不規(guī)則);硬度(粘稠或易碎);透明度(半透明、不透明或透明);邊緣(整齊、不整齊);
顏色(色素);表面(光澤、粗糙、平滑、凸起、凹下、干燥、濕潤(rùn)等);菌落與培養(yǎng)基的關(guān)系(粘連、溶血與否)。細(xì)菌的分離接種1)固體瓊脂平板培養(yǎng)基上細(xì)菌生長(zhǎng)狀態(tài)的觀察:上次結(jié)果觀察觀察平板上可有不同的菌落長(zhǎng)出。α-溶血β-溶血γ-溶血2)半固體瓊脂培養(yǎng)基上細(xì)菌生長(zhǎng)狀態(tài)的觀察:
清晰(無(wú)動(dòng)力)向四周擴(kuò)散(有動(dòng)力)注意在穿刺線上細(xì)菌生長(zhǎng)的狀態(tài)3)觀察細(xì)菌在肉湯培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀態(tài):
有無(wú)菌膜、菌膜厚度,混濁度,有無(wú)沉淀、沉淀的性質(zhì)是絮狀、粘液狀或顆粒狀??諝庵屑?xì)菌的檢查——菌落計(jì)數(shù)的方法每100cm2培養(yǎng)基在空氣中暴露5分鐘,其表面接受自然沉降的細(xì)菌數(shù)約相當(dāng)于10升空氣中所含的細(xì)菌量。每塊平板的菌落數(shù)=4塊平板的菌落總數(shù)/4100cm2面積培養(yǎng)基上的菌落數(shù)=(每塊平板的菌落數(shù)/πr2)x100每m3空氣中活菌數(shù)=(100cm2培養(yǎng)基上菌落平均數(shù)/30)x1000正常人體皮膚及隨身物品的細(xì)菌檢查呼吸道細(xì)菌的檢查—
咳碟試驗(yàn)結(jié)果:通常除用碘液消毒的手指外,其余手指或雜物接觸的培養(yǎng)基表面都有數(shù)量不等的菌落長(zhǎng)出。觀察菌落直徑大小,形狀,透明度,硬度,表面,邊緣,顏色,菌落與培養(yǎng)基關(guān)系等。觀察培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)并進(jìn)行計(jì)數(shù)分析。1.顯微鏡直立放穩(wěn),打開(kāi)顯微鏡光源2.低倍鏡查找標(biāo)本視野,加香柏油一滴于標(biāo)本的待檢部位,換用油鏡觀察。3.從側(cè)面注視油鏡頭,小心將鏡頭浸入鏡油中,輕柔調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)節(jié)器進(jìn)行觀察。4.觀察標(biāo)本時(shí),雙眼同時(shí)睜開(kāi)。5.油鏡用畢,轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)將鏡筒提起,取下標(biāo)本,用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦凈,然后再用擦鏡紙擦去二甲苯。
顯微鏡油鏡的使用與保護(hù)示教:細(xì)菌的基本形態(tài)與特殊結(jié)構(gòu)觀察1、細(xì)菌基本形態(tài)的觀察2、細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)的觀察芽胞、莢膜、鞭毛、菌毛3、特殊染色結(jié)果觀察抗酸染色
細(xì)菌是無(wú)色半透明的微小生物,肉眼看不到,必須借助于顯微鏡才能夠觀察。然而,未經(jīng)染色的細(xì)菌標(biāo)本,在普通光學(xué)顯微鏡下只能粗略地看見(jiàn)其形態(tài)和大小,只有經(jīng)過(guò)染色后才能觀察清楚。染色后鏡檢,不但可以識(shí)別細(xì)菌的各種不同結(jié)構(gòu),還可以輔助鑒別細(xì)菌。細(xì)菌的染色1、細(xì)菌蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì),等電點(diǎn)較低,在pI2-5之間。故在近于中性的環(huán)境中,細(xì)菌多帶負(fù)電荷,易與帶正電荷的堿性染料結(jié)合。
2、細(xì)菌胞質(zhì)中含有大量呈酸性的RNA,也與堿性染料有親和性。細(xì)菌染色多采用堿性染料如美藍(lán)、堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫等,原因在于:?jiǎn)稳荆河靡环N染料進(jìn)行染色復(fù)染:兩種或兩種以上染料進(jìn)行染色。革蘭染色、抗酸染色、莢膜染色等細(xì)菌的染色方法單染和復(fù)染1涂片:在玻片上滴一滴生理鹽水,然后刮取少許菌苔在鹽水中乳磨使之乳化,涂成直徑約為0.5cm-1cm的菌膜。2干燥:最好在室溫中自然干燥,也可在遠(yuǎn)離火焰上方微微烘干。但切勿靠火焰以免烤焦標(biāo)本。3固定:火焰固定。固定的作用:殺死細(xì)菌;使細(xì)菌與玻片粘附牢固;使細(xì)菌蛋白凝固后保持其固有的外形;改變對(duì)染料的通透性。單染染色步驟(一)簡(jiǎn)單染色4染色:滴加結(jié)晶紫、稀釋復(fù)紅或堿性美蘭液1~2滴,使染液蓋滿菌膜,1~2分鐘后,用細(xì)小流水洗去多余的染液,在空氣中自然干燥或用吸水紙輕輕吸干。(切忌拖、拉)5鏡檢觀察結(jié)果:用結(jié)晶紫染色的葡萄球菌、大腸桿菌或變形桿菌成紫色;復(fù)紅染色者均為紅色;堿性美蘭染色者均為藍(lán)色。單染色法過(guò)程
1、涂片:先在玻片上放一滴生理鹽水,然后刮取菌苔在鹽水中乳化,涂成直徑約為0.5cm的膜。
2、干燥:在遠(yuǎn)離火焰上方微微烘干。
3、固定:火焰固定。
4、染色:滴加結(jié)晶紫、稀釋復(fù)紅或堿性美蘭液染色1~2分鐘后,用細(xì)小流水洗去多余的染液。
5、鏡檢丹麥的細(xì)菌學(xué)家C.Gram1884年發(fā)明革蘭染色法(二)復(fù)染革蘭染色法革蘭染色的原理:
等電點(diǎn)學(xué)說(shuō)化學(xué)學(xué)說(shuō)
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