實(shí)驗(yàn)2 細(xì)菌的染色和形態(tài)觀察

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌的染色和形態(tài)觀察微生物學(xué)教研室郭棵棵（驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)）上節(jié)課實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察顯微鏡油鏡頭的使用與保護(hù)示教：細(xì)菌的基本形態(tài)與特殊結(jié)構(gòu)的觀察操作：?jiǎn)稳旧?、革蘭染色材料：葡萄球菌、大腸桿菌肉湯培養(yǎng)物1支/6人載玻片2張/人

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容了解：

1.顯微鏡油鏡鏡頭的使用與保護(hù)

2.細(xì)菌的基本形態(tài)與特殊結(jié)構(gòu)的觀察

3.常用的細(xì)菌染色方法掌握：

1.細(xì)菌單染色和革蘭染色的方法和意義

2.細(xì)菌染色標(biāo)本的制備技術(shù)教學(xué)目標(biāo)菌落大??；

形狀（圓形或不規(guī)則）；硬度（粘稠或易碎）；透明度（半透明、不透明或透明）；邊緣（整齊、不整齊）；

顏色（色素）；表面（光澤、粗糙、平滑、凸起、凹下、干燥、濕潤(rùn)等）；菌落與培養(yǎng)基的關(guān)系（粘連、溶血與否）。細(xì)菌的分離接種1）固體瓊脂平板培養(yǎng)基上細(xì)菌生長(zhǎng)狀態(tài)的觀察：上次結(jié)果觀察觀察平板上可有不同的菌落長(zhǎng)出。α-溶血β-溶血γ-溶血2）半固體瓊脂培養(yǎng)基上細(xì)菌生長(zhǎng)狀態(tài)的觀察：

清晰（無(wú)動(dòng)力）向四周擴(kuò)散（有動(dòng)力）注意在穿刺線上細(xì)菌生長(zhǎng)的狀態(tài)3）觀察細(xì)菌在肉湯培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀態(tài)：

有無(wú)菌膜、菌膜厚度，混濁度，有無(wú)沉淀、沉淀的性質(zhì)是絮狀、粘液狀或顆粒狀?？諝庵屑?xì)菌的檢查——菌落計(jì)數(shù)的方法每100cm2培養(yǎng)基在空氣中暴露5分鐘，其表面接受自然沉降的細(xì)菌數(shù)約相當(dāng)于10升空氣中所含的細(xì)菌量。每塊平板的菌落數(shù)=4塊平板的菌落總數(shù)/4100cm2面積培養(yǎng)基上的菌落數(shù)=（每塊平板的菌落數(shù)/πr2）x100每m3空氣中活菌數(shù)=（100cm2培養(yǎng)基上菌落平均數(shù)/30）x1000正常人體皮膚及隨身物品的細(xì)菌檢查呼吸道細(xì)菌的檢查—

咳碟試驗(yàn)結(jié)果：通常除用碘液消毒的手指外，其余手指或雜物接觸的培養(yǎng)基表面都有數(shù)量不等的菌落長(zhǎng)出。觀察菌落直徑大小，形狀，透明度，硬度，表面，邊緣，顏色，菌落與培養(yǎng)基關(guān)系等。觀察培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)并進(jìn)行計(jì)數(shù)分析。1.顯微鏡直立放穩(wěn)，打開(kāi)顯微鏡光源2.低倍鏡查找標(biāo)本視野，加香柏油一滴于標(biāo)本的待檢部位，換用油鏡觀察。3.從側(cè)面注視油鏡頭，小心將鏡頭浸入鏡油中，輕柔調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)節(jié)器進(jìn)行觀察。4.觀察標(biāo)本時(shí)，雙眼同時(shí)睜開(kāi)。5.油鏡用畢，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)將鏡筒提起，取下標(biāo)本，用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦凈，然后再用擦鏡紙擦去二甲苯。

顯微鏡油鏡的使用與保護(hù)示教：細(xì)菌的基本形態(tài)與特殊結(jié)構(gòu)觀察1、細(xì)菌基本形態(tài)的觀察2、細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)的觀察芽胞、莢膜、鞭毛、菌毛3、特殊染色結(jié)果觀察抗酸染色

細(xì)菌是無(wú)色半透明的微小生物，肉眼看不到，必須借助于顯微鏡才能夠觀察。然而，未經(jīng)染色的細(xì)菌標(biāo)本，在普通光學(xué)顯微鏡下只能粗略地看見(jiàn)其形態(tài)和大小，只有經(jīng)過(guò)染色后才能觀察清楚。染色后鏡檢，不但可以識(shí)別細(xì)菌的各種不同結(jié)構(gòu)，還可以輔助鑒別細(xì)菌。細(xì)菌的染色1、細(xì)菌蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，等電點(diǎn)較低，在pI2-5之間。故在近于中性的環(huán)境中，細(xì)菌多帶負(fù)電荷，易與帶正電荷的堿性染料結(jié)合。

2、細(xì)菌胞質(zhì)中含有大量呈酸性的RNA，也與堿性染料有親和性。細(xì)菌染色多采用堿性染料如美藍(lán)、堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫等，原因在于：?jiǎn)稳荆河靡环N染料進(jìn)行染色復(fù)染：兩種或兩種以上染料進(jìn)行染色。革蘭染色、抗酸染色、莢膜染色等細(xì)菌的染色方法單染和復(fù)染1涂片：在玻片上滴一滴生理鹽水，然后刮取少許菌苔在鹽水中乳磨使之乳化，涂成直徑約為0.5cm-1cm的菌膜。2干燥：最好在室溫中自然干燥，也可在遠(yuǎn)離火焰上方微微烘干。但切勿靠火焰以免烤焦標(biāo)本。3固定：火焰固定。固定的作用：殺死細(xì)菌；使細(xì)菌與玻片粘附牢固；使細(xì)菌蛋白凝固后保持其固有的外形；改變對(duì)染料的通透性。單染染色步驟（一）簡(jiǎn)單染色4染色：滴加結(jié)晶紫、稀釋復(fù)紅或堿性美蘭液1～2滴，使染液蓋滿菌膜,1～2分鐘后，用細(xì)小流水洗去多余的染液，在空氣中自然干燥或用吸水紙輕輕吸干。（切忌拖、拉）5鏡檢觀察結(jié)果：用結(jié)晶紫染色的葡萄球菌、大腸桿菌或變形桿菌成紫色；復(fù)紅染色者均為紅色；堿性美蘭染色者均為藍(lán)色。單染色法過(guò)程

1、涂片：先在玻片上放一滴生理鹽水，然后刮取菌苔在鹽水中乳化，涂成直徑約為0.5cm的膜。

2、干燥：在遠(yuǎn)離火焰上方微微烘干。

3、固定：火焰固定。

4、染色：滴加結(jié)晶紫、稀釋復(fù)紅或堿性美蘭液染色1～2分鐘后，用細(xì)小流水洗去多余的染液。

5、鏡檢丹麥的細(xì)菌學(xué)家C.Gram1884年發(fā)明革蘭染色法（二）復(fù)染革蘭染色法革蘭染色的原理：

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