靈芝三萜類化合物對(duì)AD模型大鼠腦組織保護(hù)作用的研究

靈芝三萜類化合物對(duì)AD模型大鼠腦組織保護(hù)作用的研究【摘要】目的：觀察靈芝三萜類化合物對(duì)AD模型大鼠海馬組織形態(tài)的影響。方法：70只大鼠隨機(jī)分為生理鹽水組，假手術(shù)組，模型組，溶媒組，GLT低、中、高劑量組；除生理鹽水組和假手術(shù)組外，其余各組大鼠單側(cè)海馬內(nèi)一次性注射Aβ25-35制作AD大鼠模型，術(shù)后生理鹽水組、假手術(shù)組、模型組大鼠分別灌胃生理鹽水，溶媒組灌胃食用油，GLT各組分別灌胃低、中、高劑量的GLT20d，然后采用透射電鏡觀察海馬神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果：GLT能明顯改善模型大鼠腦組織海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的退行性變化。結(jié)論：GLT能改善大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的退行性變化。

【關(guān)鍵詞】靈芝屬；阿爾茨海默病；海馬；丙二醛；顯微鏡檢查，電子，掃錨透射；大鼠，Sprague-Dawley

［Abstract］Objective:ToobservetheprotectiveeffectsoftriterpenoidsfromGanodermalucidum(GLT)onthemodalityofhippocampustissueofAlzheimerdisease(AD)modelrats．Methods:ADratsinducedbyinjectionofAβ25-35intoonesideofhippocampusweretreatedwithGLTorallyfor20daysandthenultrastructuralchangesofneuronswereobservedundertransmissionelectronmicroscope．Results：ThemodalityofhippocampusCA1regionneuronsofGLTtreatedADratswasdistinctlyimprovedwhencomparedwiththatofthemodelratsthatdidnotreceiveGLTtreatment．Conclusion:GLTcanimproverecessivelychangedneuronsinhippocampusCA1region．

［Keywords］Gardenia;Alzheimerdisease;hippocampus;malondialdehyde;microscopy,electron，scaningtransmission;rats,sprague-dawley

阿爾茨海默病(Alzheimerdisease,AD)是一種漸進(jìn)性神經(jīng)退行性疾病，其病理改變?yōu)榇竽X皮質(zhì)萎縮,皮質(zhì)神經(jīng)元減少,大腦皮質(zhì)和海馬中可見(jiàn)大量神經(jīng)元纖維纏結(jié)(NFT)和老年斑(SP)，即脂褐素。AD臨床表現(xiàn)為近期記憶力降低,繼而表現(xiàn)持續(xù)性智能衰退、運(yùn)動(dòng)障礙等。據(jù)研究發(fā)現(xiàn)腦內(nèi)膽堿能傳遞功能紊亂、自由基損傷、β-淀粉樣蛋白沉積、神經(jīng)元凋亡等因素可能在AD的發(fā)病機(jī)制中起關(guān)鍵性作用。Aβ沉積是AD發(fā)病過(guò)程中的關(guān)鍵性因素之一已基本得到了公認(rèn)。GLT存在于赤芝子實(shí)體和孢子粉中，有抗氧化、抗衰老等藥理作用[1]，本實(shí)驗(yàn)采用形態(tài)學(xué)方法，探討GLT對(duì)Aβ25-35所致AD大鼠的防治作用及機(jī)制，為臨床治療AD提供依據(jù)。

1材料和方法

1．1實(shí)驗(yàn)材料

SD大鼠，雄性，體重g由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK2002-50001。Aβ25-35購(gòu)自Sigma公司；DYT2E腦立體定位儀購(gòu)自天津醫(yī)療器械研究所。靈芝三萜類化合物用食用油配制成相應(yīng)濃度，常溫保存。健腦膠囊是青島國(guó)風(fēng)藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品。

1．2方法

70只大鼠隨機(jī)分為7組，生理鹽水組(生理鹽水10ml/kg)、假手術(shù)組(生理鹽水10ml/kg)、模型組(生理鹽水10ml/kg)、GLT低、中、高劑量組。參考Sharma等的方法，大鼠經(jīng)10％水合氯醛(g/kg)腹腔注射麻醉后固定于大鼠腦立體定位儀上，側(cè)腦室注射進(jìn)針坐標(biāo)為：前囟后，中線左側(cè)2mm，自顱骨表面深3mm。除假手術(shù)組和生理鹽水組外，其余各組動(dòng)物均微量注射2μlAβ25-35緩慢注入，留針5min；生理鹽水組注入等體積無(wú)菌生理鹽水，假手術(shù)組鉆開(kāi)顱骨后即縫合傷口。各組動(dòng)物術(shù)后常規(guī)注射阿奇霉素連續(xù)3d。術(shù)后次日按上述劑量灌胃給藥，每日1次,連續(xù)20d。

1．3大鼠海馬CAI區(qū)錐體細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取大鼠，切開(kāi)皮膚，鈍性分離，找到雙側(cè)的頸總動(dòng)脈，一側(cè)插管，一側(cè)結(jié)扎，并剪開(kāi)一側(cè)的頸外靜脈以利于回流，先灌注生理鹽水，再灌注戊二醛固定液，固定1h后取腦。取海馬CA1區(qū)組織1mm3，1％鋨酸后固定，環(huán)氧樹(shù)脂包埋，超薄切片，醋酸鈾、枸櫞酸鉛染色，H-600型透射電鏡觀察、攝片。對(duì)切片海馬CA1區(qū)隨機(jī)選取若干銅網(wǎng)觀察，每只銅網(wǎng)在海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞區(qū)域攝片。

2結(jié)果

透射電鏡下，模型組及溶媒組海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞核膜局部腫脹內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，核周質(zhì)線粒體腫脹，大部分嵴消失，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)顆粒消失，可見(jiàn)脂褐素，有NFT，顆粒空泡變性，核染色質(zhì)邊聚。生理鹽水組和假手術(shù)組錐體細(xì)胞胞漿內(nèi)可見(jiàn)豐富的線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及高爾基體等細(xì)胞器。GLT組錐體細(xì)胞線粒體輕度腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張，細(xì)胞核輕度固縮，核膜清晰。胞質(zhì)內(nèi)見(jiàn)較多的線粒體、核糖體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，少量NFT，細(xì)胞器尚屬正常。

3討論

AD是中樞神經(jīng)系統(tǒng)一種常見(jiàn)的進(jìn)行性神經(jīng)退行性疾病，其臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性記憶力減退，認(rèn)知能力下降等，其主要病理改變是神經(jīng)細(xì)胞之間存在大量的SP以及神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)存在大量的NFT。海馬內(nèi)注入Aβ25-35造成AD模型大鼠，其學(xué)習(xí)記憶變化及病理變化貼近AD。本實(shí)驗(yàn)依此為基礎(chǔ)，進(jìn)一步研究靈芝三萜類化合物對(duì)AD的防治作用。靈芝是我國(guó)傳統(tǒng)的延年益壽中藥，中醫(yī)理論認(rèn)為，靈芝具有“益精氣，補(bǔ)五臟，滋補(bǔ)強(qiáng)壯，扶正固本”的作用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，靈芝提取物靈芝三萜類化合物有抗氧化、延緩衰老、清除自由基等藥理作用，因而使用GLT對(duì)阿爾茨海默病的治療能改善大鼠海馬錐體細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化，減少脂褐素堆積，發(fā)揮其保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的抗氧化作用[6,7]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)大鼠單側(cè)側(cè)腦室注射Aβ25-35，大鼠活動(dòng)量及食量同時(shí)減少，皮毛無(wú)光澤，水迷宮訓(xùn)練學(xué)習(xí)記憶能力下降,說(shuō)明AD模型成功。電鏡結(jié)果顯示，Aβ在大腦內(nèi)能引起海馬錐體細(xì)胞的退行性改變及早期凋亡現(xiàn)象，如細(xì)胞水腫，細(xì)胞核中異染色質(zhì)呈邊集現(xiàn)象，核膜斷裂，核間隙增寬，細(xì)胞器破壞，結(jié)構(gòu)顯示不清，髓鞘水腫排列紊亂，顆?？张葑冃约癗FT。氧自由基對(duì)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的損害必然導(dǎo)致神經(jīng)元功能降低，可以表現(xiàn)為胞核和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)損害，導(dǎo)致蛋白合成機(jī)能下降；線粒體受損導(dǎo)致能量代謝障礙；大量增多的脂褐素堆積干擾細(xì)胞器幾何空間，使得神經(jīng)元有序性破壞，從而致使神經(jīng)元衰老死亡。使用GLT后，AD大鼠海馬錐體細(xì)胞NFT、顆?？张葑冃暂^前明顯改善，細(xì)胞水腫減輕，線粒體、高爾基體、核糖體較模型組明顯增多，這正好與GLT能改善AD神經(jīng)元結(jié)構(gòu)的退變相吻合。表明GLT對(duì)海馬錐體細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)退變有明顯的改善作用。

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