長(zhǎng)期毒性作用及其試驗(yàn)方法要點(diǎn)課件

2023/10/71

第十五章長(zhǎng)期毒性作用及其試驗(yàn)方法

long-termtoxicityimpact

andtestmethod

2023/8/41第十五章long-termtox2023/10/72

第一節(jié)基本概念和目的第二節(jié)試驗(yàn)設(shè)計(jì)原則及方法2023/8/42第一節(jié)基本概念和目的2023/10/73

第一節(jié)基本概

念

和

目的2023/8/43第一節(jié)基本概念和目的2023/10/74

長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)是指試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)多日接觸較大劑量的藥物所引起的中毒效應(yīng)，為觀察這種中毒效應(yīng)而設(shè)計(jì)的毒理學(xué)試驗(yàn)稱(chēng)之為長(zhǎng)期(慢性)毒性試驗(yàn)。一、定義

急性毒性試驗(yàn)是為觀察和評(píng)價(jià)急性毒性的有害作用或中毒反應(yīng)而設(shè)計(jì)的一種毒理學(xué)試驗(yàn)。研究藥物一次或24小時(shí)內(nèi)多次給予受試藥物后，一定時(shí)間內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。2023/8/44長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)是指試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)多日接2023/10/755/20123給

藥

的

期

限

不

同長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)與急性毒性試驗(yàn)的根本差別2023/8/455/20123給藥的期限不同長(zhǎng)2023/10/766/20123給

藥

的

期

限

不

同給

藥

的

劑

量

范

圍

不

同長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)與急性毒性試驗(yàn)的根本差別2023/8/466/20123給藥的期限不同給2023/10/77

蓄積作用(accumulationaction)

當(dāng)較長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)、反復(fù)給藥時(shí)，如果給藥的時(shí)間間隔和劑量超過(guò)機(jī)體消除藥物的能力，就會(huì)出現(xiàn)藥物進(jìn)入機(jī)體的速度

(或總量)

超過(guò)排除的速度(或總量)

的現(xiàn)象，此時(shí)藥物就有可能在體內(nèi)逐漸增加并貯存起來(lái)，即蓄積作用。

2023/8/47蓄積作用(accumul2023/10/78

蓄積作用的表現(xiàn)形式作用量積蓄功能性蓄積2023/8/48蓄積作用的表現(xiàn)形式作用量積2023/10/799/20123給

藥

的

期

限

不

同給

藥

的

劑

量

范

圍

不

同觀

察

的

毒

效

應(yīng)

不

同長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)與急性毒性試驗(yàn)的根本差別2023/8/499/20123給藥的期限不同給2023/10/710二、目的與意義2023/8/410二、目的與意義2023/10/7111預(yù)測(cè)受試物可能引起的臨床不良反應(yīng)2判斷受試物反復(fù)給藥的毒性靶器官或組織提示臨床試驗(yàn)中需重點(diǎn)監(jiān)測(cè)的指標(biāo)43推測(cè)臨床試驗(yàn)的起始劑量和重復(fù)用藥的安全劑量范圍為臨床試驗(yàn)中的解毒或解救措施提供參考5長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的目的2023/8/4111預(yù)測(cè)受試物可能引起的臨床不良反應(yīng)2判斷2023/10/712

了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物能耐受的最大劑量，找出完全無(wú)毒的安全界量，這個(gè)界量是判斷一個(gè)待選新藥是否有進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研究的價(jià)值以及能否過(guò)渡到臨床試用的重要依據(jù)，同時(shí)，也可為其它毒性實(shí)驗(yàn)和臨床初始劑量的選擇提供依據(jù)。因此長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)是臨床前安全性評(píng)價(jià)的主要內(nèi)容，它與急性毒性試驗(yàn)、生殖毒性以及致癌性等毒理學(xué)研究有著密切的聯(lián)系，是新藥報(bào)批臨床時(shí)重點(diǎn)審評(píng)項(xiàng)目之一，是藥物從藥學(xué)研究進(jìn)入臨床試驗(yàn)的重要環(huán)節(jié)。長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的意義2023/8/412了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物能耐受的最大2023/10/713第二節(jié)試驗(yàn)

設(shè)

計(jì)

原

則

及

方

法2023/8/413第二節(jié)試驗(yàn)設(shè)計(jì)原則及方法2023/10/714一、一般原則和要求基本原則全面、嚴(yán)謹(jǐn)、合理整體性隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)2023/8/414一、一般原則和要求基本原則全面、嚴(yán)謹(jǐn)、合2023/10/715一、一般原則和要求基本原則整體性長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)不能與藥效學(xué)、藥代動(dòng)力性和其他毒理學(xué)研究割裂，試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)充分考慮其他藥理毒理研究的試驗(yàn)設(shè)計(jì)和研究結(jié)果。長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的結(jié)果應(yīng)該力求與其他藥理毒理試驗(yàn)結(jié)果互為印證、說(shuō)明和補(bǔ)充。2023/8/415一、一般原則和要求基本原則整體性長(zhǎng)期毒性2023/10/716一、一般原則和要求總體原則選用兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物三個(gè)劑量給藥途徑應(yīng)與臨床擬用途徑相同2023/8/416一、一般原則和要求總體原則選用兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)2023/10/717一、一般原則和要求總體原則

至少在兩種動(dòng)物體上進(jìn)行，兼顧雌雄性別。選用兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物2023/8/417一、一般原則和要求總體原則至少在2023/10/718一、一般原則和要求總體原則三個(gè)劑量劑量至少分為高、中、低三個(gè)檔次。高劑量組應(yīng)能充分反映藥物的毒性，低劑量組不出現(xiàn)毒性反應(yīng)。同時(shí)設(shè)一溶劑(或賦形劑)對(duì)照組或已知藥物毒性對(duì)照組。2023/8/418一、一般原則和要求總體原則三個(gè)劑量劑量至2023/10/719一、一般原則和要求總體原則給藥途徑應(yīng)與臨床擬用途徑相同

口服給藥大鼠一般常用灌胃，灌胃的容量為每天1~2ml/100g，也可將受試藥物混在飼料或水中給予，但要保證每只動(dòng)物按規(guī)定劑量在一定時(shí)間內(nèi)服入，靜脈注射大鼠時(shí)可采用腹腔代替，各劑量組采用等容量不等濃度給藥。特殊情況另作說(shuō)明。2023/8/419一、一般原則和要求總體原則給藥途徑應(yīng)與臨2023/10/720理想動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)受試物的生物轉(zhuǎn)化與人體相近；對(duì)受試物敏感；已有大量歷史對(duì)照數(shù)據(jù)。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2023/8/420理想動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)受試物的生物轉(zhuǎn)化與人體2023/10/721☆我國(guó)藥政部門(mén)規(guī)定的基本原則是選用兩種動(dòng)物,一種為嚙齒類(lèi)，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類(lèi)，首選狗。1.種類(lèi)及品系二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2023/8/421☆我國(guó)藥政部門(mén)規(guī)定的基本原則是選用兩種動(dòng)2023/10/722☆我國(guó)藥政部門(mén)規(guī)定的基本原則是選用兩種動(dòng)物,一種為嚙齒類(lèi)，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類(lèi)，首選狗。1.種類(lèi)及品系二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Wistar大鼠SD大鼠

近親繁殖鼠？雜交鼠？2023/8/422☆我國(guó)藥政部門(mén)規(guī)定的基本原則是選用兩種動(dòng)2023/10/723☆我國(guó)藥政部門(mén)規(guī)定的基本原則是選用兩種動(dòng)物,一種為嚙齒類(lèi)，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類(lèi)，首選狗。1.種類(lèi)及品系二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

一類(lèi)新藥：Beagle犬二類(lèi)新藥：雜種狗

2023/8/423☆我國(guó)藥政部門(mén)規(guī)定的基本原則是選用兩種動(dòng)2023/10/724☆我國(guó)藥政部門(mén)規(guī)定的基本原則是選用兩種動(dòng)物,一種為嚙齒類(lèi)，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類(lèi)，首選狗。1.種類(lèi)及品系二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

☆在吸入給藥時(shí)，猴是首先推薦的動(dòng)物，因?yàn)樗诤粑到y(tǒng)的解剖學(xué)和生理學(xué)方面比其它動(dòng)物更接近人類(lèi)。☆如研究計(jì)劃生育用藥，應(yīng)選擇猴或其他大動(dòng)物。2023/8/424☆我國(guó)藥政部門(mén)規(guī)定的基本原則是選用兩種動(dòng)長(zhǎng)期毒性作用及其試驗(yàn)方法要點(diǎn)課件長(zhǎng)期毒性作用及其試驗(yàn)方法要點(diǎn)課件2023/10/727

Beagle犬：原產(chǎn)英國(guó)，純種小獵兔犬

Beagle犬的特點(diǎn)：體型小,毛短,性情溫和,親人,抗病力強(qiáng)

缺點(diǎn)：價(jià)格昂貴2023/8/427Beagle犬：原產(chǎn)英國(guó)，純種小獵兔犬2023/10/7282.起始月(周)齡一般選擇較年輕的或正處于生長(zhǎng)發(fā)育階段的動(dòng)物。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2023/8/4282.起始月(周)齡一般選擇較年輕的或正2023/10/7292.起始月(周)齡一般選擇較年輕的或正處于生長(zhǎng)發(fā)育階段的動(dòng)物。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的給藥期限較長(zhǎng)；13原因：年齡較大的動(dòng)物反應(yīng)性降低,存在許多發(fā)性疾病干擾試驗(yàn)結(jié)果。處于生長(zhǎng)發(fā)育階段的動(dòng)物對(duì)藥物的毒性反應(yīng)較敏感；232023/8/4292.起始月(周)齡一般選擇較年輕的或正2023/10/730嚙齒類(lèi)動(dòng)物最好在斷奶后不久即開(kāi)始給藥

大鼠起始周齡要求在

6~8周齡；

如果試驗(yàn)周期超過(guò)3個(gè)月以上，則將起始周齡降至

5~6周齡。狗的起始月齡為6月齡，一般不超過(guò)12月齡；如選用雜種狗，起始年齡可稍大些，但也不能超過(guò)5年。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2.起始月(周)齡2023/8/430嚙齒類(lèi)動(dòng)物最好在斷奶后不久即開(kāi)始給藥二、2023/10/731起始體重應(yīng)在體重均值±

20%的范圍內(nèi)。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2.起始月(周)齡2023/8/431二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物2.起始月(周)齡2023/10/7323.性別及數(shù)量

（1）性別二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

☆一般來(lái)講是兼用兩種性別的動(dòng)物，每個(gè)劑量組中雌雄性別的動(dòng)物數(shù)必須一致。2023/8/4323.性別及數(shù)量（1）性別二、實(shí)驗(yàn)2023/10/733

在特殊情況下如藥物對(duì)雄性（或雌性）生殖細(xì)胞的毒效應(yīng)已確知，或者急性試驗(yàn)已證明藥物對(duì)雌雄兩性動(dòng)物的毒性有明顯差別時(shí)，就應(yīng)主要選用敏感性別的動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

3.性別及數(shù)量

（1）性別2023/8/433在特殊情況下如藥物對(duì)雄性（或雌性2023/10/734超過(guò)90天的試驗(yàn)嚙齒類(lèi)動(dòng)物每組至少40只（雌雄各20只）；非嚙齒類(lèi)每組8~10只（雌雄各4~5只）。90天以?xún)?nèi)的試驗(yàn)嚙齒類(lèi)動(dòng)物每組至少20只（雌雄各10只）；非嚙齒類(lèi)每組4~6只（雌雄各2~3只）；二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

3.性別及數(shù)量

（2）數(shù)量2023/8/434超過(guò)90天的試驗(yàn)90天以?xún)?nèi)2023/10/735超過(guò)90天的試驗(yàn)嚙齒類(lèi)動(dòng)物每組至少40只（雌雄各20只）；非嚙齒類(lèi)每組8-10只（雌雄各4~5只）。90天以?xún)?nèi)的試驗(yàn)嚙齒類(lèi)動(dòng)物每組至少20只（雌雄各10只）；非嚙齒類(lèi)每組4~6只（雌雄各2~3只）；二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

3.性別及數(shù)量

（2）數(shù)量《指導(dǎo)原則》：一般大鼠為雌、雄各30只，

Beagle犬或猴各3~6只。2023/8/435超過(guò)90天的試驗(yàn)90天以?xún)?nèi)2023/10/7364.飼養(yǎng)管理

嚴(yán)格控制環(huán)境條件，避免不必要的干擾因素是非常重要的。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2023/8/4364.飼養(yǎng)管理嚴(yán)格控制環(huán)境條件，2023/10/737酮癥酸中毒室內(nèi)溫度飼料或飼料配方濕度光照通風(fēng)條件飲水質(zhì)量環(huán)境因素4.飼養(yǎng)管理二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2023/8/437酮癥酸中毒室內(nèi)溫度飼料或飼料配方濕2023/10/738酮癥酸中毒室內(nèi)溫度飼料或飼料配方濕度光照通風(fēng)條件飲水質(zhì)量環(huán)境因素4.飼養(yǎng)管理二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

嚙齒類(lèi)動(dòng)物適宜溫度為18~27℃。相對(duì)濕度為40%~70%。光照宜持續(xù)12小時(shí)明亮，12小時(shí)黑暗。通風(fēng)條件良好。所用飼料應(yīng)符合動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。雌雄動(dòng)物應(yīng)分開(kāi)飼養(yǎng)，每籠不宜超過(guò)5只2023/8/438酮癥酸中毒室內(nèi)溫度飼料或飼料配方濕2023/10/739酮癥酸中毒室內(nèi)溫度飼料或飼料配方濕度光照通風(fēng)條件飲水質(zhì)量環(huán)境因素4.飼養(yǎng)管理二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

犬單籠飼養(yǎng)，定量喂食。

Beagle狗實(shí)驗(yàn)前至少馴養(yǎng)1~2周;

雜種狗應(yīng)先檢疫，驅(qū)蟲(chóng)。2023/8/439酮癥酸中毒室內(nèi)溫度飼料或飼料配方濕2023/10/740三、給藥期限

按我國(guó)藥政管理部門(mén)的要求，長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的給藥期限一般為臨床療程的3~4倍時(shí)間。創(chuàng)新藥品試驗(yàn)周期應(yīng)不少于90天，超過(guò)180天的新藥可以在試驗(yàn)開(kāi)始90天后，同時(shí)進(jìn)行I期臨床試驗(yàn)。2023/8/440三、給藥期限按我國(guó)藥政管理部門(mén)的2023/10/741我國(guó)藥政部門(mén)關(guān)于一般藥物重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)期限的規(guī)定

臨床擬用

毒性試驗(yàn)期限

給藥時(shí)間

嚙齒類(lèi)動(dòng)物

非嚙齒類(lèi)動(dòng)物﹤5天

2周

2周﹤2周

1月

1月

2-4周

3月

3月

1-3月

6月

6月

﹥3月

6月

9月

每天給藥最好固定時(shí)間。2023/8/441我國(guó)藥政部門(mén)關(guān)于一般藥物重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)2023/10/742四、劑量水平的選擇

三個(gè)劑量組是必不可少的：一個(gè)是足以引起明顯的毒性反應(yīng)的高劑量，但死亡率應(yīng)控制在20%以?xún)?nèi)；第二個(gè)是不引起毒性作用的低劑量(一般為動(dòng)物有效劑量或臨床治療量的2~3倍)；為表明毒性作用的量—效關(guān)系，在上述兩個(gè)劑量之間插入一個(gè)(或多個(gè))中間劑量。中劑量按計(jì)算

2023/8/442四、劑量水平的選擇三個(gè)劑2023/10/743

在選擇合適的劑量時(shí)還應(yīng)考慮到：

①藥物在體內(nèi)的生物蓄積作用。對(duì)于高蓄積性藥物應(yīng)適當(dāng)減少其劑量，否則在長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各劑量均有可能出現(xiàn)毒性作用；②藥物是否有可能被特殊的酶所“解毒”或“活化增毒”，而這些酶又是否易被藥物本身所誘導(dǎo)或抑制。③藥物在消化道中的穩(wěn)定性。與胃腸道內(nèi)容物有親和性的藥物，則應(yīng)酌情增加劑量。

2023/8/443在選擇合適的劑量時(shí)還應(yīng)考可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）

根據(jù)急性毒性的LD50值決定三個(gè)劑量。一般在大鼠3個(gè)月長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)中，高、中、低三個(gè)劑量可分別采用約LD50的1/10、1/50和1/100劑量，狗各劑量組可采用大鼠相應(yīng)各組的一半劑量?？晒﹨⒖嫉木唧w方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期蓄積試驗(yàn)過(guò)渡法

根據(jù)急性毒性試驗(yàn)所提供的相關(guān)信息，如毒性的量—效關(guān)系，毒性出現(xiàn)的劑量范圍及敏感動(dòng)物等，先過(guò)渡到7天至21天的短期蓄積性試驗(yàn)，再將獲得的參數(shù)外推于長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)。可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期急性毒性試驗(yàn)蓄積毒性試驗(yàn)和/或7天短期重復(fù)給藥試驗(yàn)90天重復(fù)給藥試驗(yàn)180天或更長(zhǎng)期重復(fù)給藥試驗(yàn)急性毒性試驗(yàn)蓄積毒性試驗(yàn)90天重復(fù)給藥試驗(yàn)180天或更長(zhǎng)期重可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期蓄積試驗(yàn)過(guò)渡法（3）藥代動(dòng)力學(xué)法

根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)最大有效安全濃度（MCD）大鼠3個(gè)月長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)時(shí)，低、中、高三個(gè)劑量可分別采用大鼠的1.0、3.3~6.6和10~20MCD;狗一般可采用大鼠一半左右的劑量?？晒﹨⒖嫉木唧w方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期蓄積試驗(yàn)過(guò)渡法（3）藥代動(dòng)力學(xué)法（MBS法）根據(jù)大鼠急性毒性試驗(yàn)的最大耐受量(MTD)大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的三個(gè)劑量分別為1、1/3及1/10MTD；狗和猴可采用大鼠一半左右的劑量。（4）最大耐受量法（MTD法）可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期蓄積試驗(yàn)過(guò)渡法（3）藥代動(dòng)力學(xué)法（MBS法）

根據(jù)臨床擬用劑量（3個(gè)月長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)）大鼠低、中、高三個(gè)劑量可分別采用50~100倍、25~50倍和

10~20倍臨床劑量狗可分別采用30~50倍、15~25倍和5~10倍臨床劑量猴可采用與狗相近的劑量或略低于狗的劑量進(jìn)行試驗(yàn)（4）最大耐受量法（MTD法）（5）臨床擬用劑量法（ACD法）可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期蓄積試驗(yàn)過(guò)渡法（3）藥代動(dòng)力學(xué)法（MBS法）

根據(jù)人和動(dòng)物的等效劑量比值，再按一定倍數(shù)擴(kuò)大。（4）最大耐受量法（MTD法）（5）臨床擬用劑量法（ACD法）（6）等效劑量法可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期2023/10/751不同動(dòng)物的劑量折算系數(shù)

動(dòng)物種屬

小鼠

大鼠

豚鼠

兔

貓

猴

狗

人標(biāo)準(zhǔn)K(劑量折算系數(shù))

1

7

12.3

27.5

29.7

64

124

388體重K(kg體重劑量折算系數(shù))

1

0.71

0.62

0.37

0.30

0.32

0.21

0.11任何R(動(dòng)物體型系數(shù))

0.059

0.09

0.099

0.093

0.082

0.111

0.104

0.1體重W(標(biāo)準(zhǔn)體重kg)

0.02

0.2

0.4

1.5

2

4

12

70注：有些資料記載的動(dòng)物體型系數(shù)（R）為此表中R值的1000倍，如小鼠R為59，大鼠R為90，這不影響藥物劑量的折算。2023/8/451不同動(dòng)物的劑量折算系數(shù)動(dòng)物種2023/10/752對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)體重的動(dòng)物：

每只用量（mg/只）DB＝DA·KBKA千克體重劑量（mg/kg）dB＝dB·KBKAKA，KB，RA，RB

值由上表查找2023/8/452對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)體重的動(dòng)物：每只用量（mg/只2023/10/753對(duì)于任何體重的動(dòng)物：

每只用量（mg/只）DB＝DA·RB·(WB)2/3RAWA千克體重劑量（mg/kg）dB＝dA·RB·(WB)2/3RAWA式中DB、dB

分別是欲計(jì)算的B種動(dòng)物的每只劑量及公斤體重劑量，DA、dA

分別是已知A種動(dòng)物的每只劑量及公斤體重劑量，WA、WB

是已知?jiǎng)游矬w重，RA、RB

是體型系數(shù)，可由上表查得。2023/8/453對(duì)于任何體重的動(dòng)物：每只用量（mg/只可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期蓄積試驗(yàn)過(guò)渡法（3）藥代動(dòng)力學(xué)法（MBS法）（4）最大耐受量法（MTD法）（5）臨床擬用劑量法（ACD法）（6）等效劑量法可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期2023/10/755五、限度試驗(yàn)

我國(guó)藥政部門(mén)規(guī)定，如小鼠急性毒性的口服給藥劑量大于5g/kg，注射給藥劑量大于2g/kg仍未產(chǎn)生毒性反應(yīng)和死亡，或僅個(gè)別動(dòng)物有毒性反應(yīng)時(shí)，可考慮只做一個(gè)高于臨床擬用劑量50倍(狗用30倍)的劑量組。2023/8/455五、限度試驗(yàn)我國(guó)藥政部門(mén)規(guī)定，如2023/10/756

經(jīng)濟(jì)合作與開(kāi)發(fā)組織(OECD)提出如果一種化合物以1000mg/kg的劑量，按規(guī)定期限連續(xù)給藥，不產(chǎn)生任何可觀察到的毒性反應(yīng)，而且根據(jù)結(jié)構(gòu)相關(guān)藥物的已有資料，估計(jì)不會(huì)產(chǎn)生毒性的話(huà)，就不需要再用三個(gè)劑量來(lái)進(jìn)行試驗(yàn)，除非預(yù)期臨床需要更高的劑量。

五、限度試驗(yàn)2023/8/456經(jīng)濟(jì)合作與開(kāi)發(fā)組織(OE2023/10/757六、給藥方法長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的給藥途徑一般應(yīng)盡量與預(yù)期臨床使用的途徑相一致。臨床用藥途徑為靜脈或肌注時(shí)，3個(gè)月及以上的試驗(yàn)，由于試驗(yàn)周期長(zhǎng)大鼠給藥有困難，可用腹腔或皮下注射代替。如采用灌胃給藥的方式可將供試藥物制成一種溶液或混懸液，但必須注意給藥容量不應(yīng)超過(guò)1~2ml/100g體重/天。2023/8/457六、給藥方法長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的給藥途徑一般應(yīng)2023/10/758六、給藥方法長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)一般均強(qiáng)調(diào)每天給藥，每周必須給藥7天。給藥期限長(zhǎng)（3個(gè)月或以上）的藥物每周至少應(yīng)給藥6天。2023/8/458六、給藥方法長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)一般均強(qiáng)調(diào)每天給2023/10/759七、觀察及測(cè)定指標(biāo)

試驗(yàn)前，嚙齒類(lèi)動(dòng)物至少應(yīng)進(jìn)行5天的適應(yīng)性觀察，非嚙齒類(lèi)動(dòng)物至少應(yīng)馴養(yǎng)觀察1~2周，應(yīng)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行一般觀察及血液生化學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)。

試驗(yàn)期間，至少應(yīng)每天或每?jī)商熳饕淮卧敿?xì)的觀察。

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，必須留1/3的動(dòng)物做恢復(fù)期的觀察試驗(yàn)，其觀察期時(shí)間一般不超過(guò)28天。2023/8/459七、觀察及測(cè)定指標(biāo)試驗(yàn)前，嚙齒類(lèi)動(dòng)物至2023/10/760（一）日常觀察

1.一般觀察內(nèi)容

包括對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被毛、皮膚、眼睛、粘膜、孔道(及其分泌物)、呼吸、循環(huán)、自主神經(jīng)系統(tǒng)、軀體和肢體活動(dòng)情況以及精神行為進(jìn)行仔細(xì)地觀察；對(duì)動(dòng)物糞便的量、色澤和內(nèi)含物，散失的食物，飲水瓶中殘余的水以及一切可以反映動(dòng)物生活情況變化的各種跡象，都必須加以注意。所有出現(xiàn)的癥狀都必須記錄在案。2023/8/460（一）日常觀察1.一般觀察內(nèi)容2023/10/7611.一般觀察內(nèi)容

如果發(fā)現(xiàn)動(dòng)物死亡，必須盡可能快地進(jìn)行尸體剖檢，以減少組織自溶。將組織置于10%的中性福爾馬林或其它適宜的固定液中。如果尸體剖檢不能立即進(jìn)行，則必須將動(dòng)物冷藏起來(lái)以延緩組織自溶。（一）日常觀察

2023/8/4611.一般觀察內(nèi)容如2023/10/7621.一般觀察內(nèi)容

對(duì)瀕死的動(dòng)物也應(yīng)立即處死作尸體剖檢。（一）日常觀察

尸體剖檢后行組織病理學(xué)檢查、評(píng)價(jià)。2023/8/4621.一般觀察內(nèi)容（一）日常觀察2023/10/7632.生長(zhǎng)率

（一）日常觀察

2023/8/4632.生長(zhǎng)率（一）日常觀察2023/10/7643.食耗食耗常用來(lái)評(píng)價(jià)給藥對(duì)食欲及食物利用率的影響食耗的計(jì)算將加入供食器具中飼料的重量減去剩余的飼料重量再除以給食天數(shù)

（一）日常觀察

2023/8/4643.食耗將加入供食器具中飼料的重量減去2023/10/7653.食耗食耗常用來(lái)評(píng)價(jià)給藥對(duì)食欲及食物利用率的影響食耗的計(jì)算將給藥組和對(duì)照組的食耗加以比較，有助于說(shuō)明藥物是否影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的食欲。

（一）日常觀察

2023/8/4653.食耗將給藥組和對(duì)照組的食耗加以比較2023/10/7663.食耗食耗常用來(lái)評(píng)價(jià)給藥對(duì)食欲及食物利用率的影響食耗的計(jì)算將給藥組和對(duì)照組的食耗加以比較，有助于說(shuō)明藥物是否影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的食欲。

（一）日常觀察

如對(duì)食欲有影響，則每日進(jìn)食量必然減少,體重增長(zhǎng)亦受影響,但此時(shí)食物利用率并不一定降低

如果不影響食欲,而體重增長(zhǎng)卻下降,表明藥物有可能影響食物的吸收或合成代謝,此時(shí)食物利用率就必然會(huì)有變化2023/8/4663.食耗將給藥組和對(duì)照組的食耗加以比較2023/10/767（二）測(cè)定指標(biāo)

1.器官重量

涉及的主要器官有：

心臟、肝臟、腎臟、脾臟、肺、腦、

腎上腺、甲狀腺、睪丸、前列腺、子宮等。

目的：確定靶器官2023/8/467（二）測(cè)定指標(biāo)1.器官重量目的：確定2023/10/768２００５年ＳＦＤＡ組織編寫(xiě)

《藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則》規(guī)定長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)中需稱(chēng)重并計(jì)算臟器系數(shù)的器官：腦肝臟腎上腺脾臟附睪子宮心臟腎臟胸腺睪丸卵巢肺臟2023/8/468２００５年ＳＦＤＡ組織編寫(xiě)

2023/10/769２００５年ＳＦＤＡ組織編寫(xiě)

《藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則》規(guī)定長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)中需稱(chēng)重并計(jì)算臟器系數(shù)的器官：腦肝臟腎上腺脾臟附睪子宮心臟腎臟胸腺睪丸卵巢肺臟甲狀腺、前列腺2023/8/469２００５年ＳＦＤＡ組織編寫(xiě)

長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)中進(jìn)行病理組織學(xué)檢查的組織或器官：腦（大腦、小腦、腦干）垂體甲狀腺食管胃肝臟腎臟脾臟氣管主動(dòng)脈附睪卵巢前列腺坐骨神經(jīng)眼（眼科檢查發(fā)現(xiàn)異常時(shí)）＊給藥局部淋巴結(jié)脊髓胸腺甲狀旁腺唾液腺小腸和大腸膽囊＊腎上腺胰腺肺心臟睪丸子宮乳腺膀胱視神經(jīng)＊骨髓注：＊為嚙齒類(lèi)動(dòng)物可不進(jìn)行組織病理學(xué)檢查的組織或器官長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)中進(jìn)行病理組織學(xué)檢查的組織或器官：腦（大腦、小腦2023/10/7711.器官重量

器官重量降低，表示該器官萎縮或發(fā)育不良；

器官重量增加提示可能有充血、水腫、增生、肥大、酶誘導(dǎo)變化或新生物等。

將動(dòng)物處死后取出上述器官，除去附著的組織、除盡余血后立即稱(chēng)重（注意勿使組織干燥）。（二）測(cè)定指標(biāo)

2023/8/4711.器官重量器官重量降低，表2023/10/7722.血液學(xué)（二）測(cè)定指標(biāo)

常規(guī)的血液學(xué)參數(shù)骨髓涂片1.器官重量

2023/8/4722.血液學(xué)（二）測(cè)定指標(biāo)1.器官重2023/10/773２００５年ＳＦＤＡ組織編寫(xiě)

《藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則》規(guī)定血液學(xué)指標(biāo)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)紅細(xì)胞容積平均紅細(xì)胞血紅蛋白網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血小板計(jì)數(shù)血紅蛋白平均紅細(xì)胞容積平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi)凝血酶原時(shí)間紅細(xì)胞壓積2023/8/473２００５年ＳＦＤＡ組織編寫(xiě)

2023/10/774

血液學(xué)指標(biāo)觀察時(shí)間非嚙齒類(lèi)動(dòng)物一般于整個(gè)試驗(yàn)周期中每隔1.5~

2個(gè)月采血測(cè)定一次各項(xiàng)指標(biāo)。嚙齒類(lèi)動(dòng)物

試驗(yàn)周期為6個(gè)月時(shí)，可于試驗(yàn)中期、試驗(yàn)?zāi)?/p>

期以及恢復(fù)期分別剖殺部分動(dòng)物(約1/4、

2/4、1/4)，進(jìn)行各項(xiàng)檢查；

試驗(yàn)周期為3個(gè)月時(shí)，可于試驗(yàn)未期以及恢復(fù)

期分別剖殺部分動(dòng)物(約2/3、1/3)，取血檢查。（二）測(cè)定指標(biāo)

2023/8/474血液學(xué)指標(biāo)觀察時(shí)間2023/10/77