植物生理與分子生物學：離子通道與植物細胞信號轉(zhuǎn)導

離子通道與植物細胞信號轉(zhuǎn)導

離子物質(zhì)的吸收和體內(nèi)轉(zhuǎn)運Mg2+K+Cl-Fe3+Zn2+NO3-EnergyPO43-CO2O2礦質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)：氮(NH4+和NO3-)、磷、鉀、鐵、鎂、銅、鋅、鈣、等無機離子有機離子：蘋果酸、草酸和氨基酸等有機

離子1.磷是生物膜系統(tǒng)的重要成分MaathuisF.,CurrOpinPlantBiol20092.N被稱為生命元素3.K＋為植物細胞中濃度最大的陽離子離子通道/轉(zhuǎn)運體是離子吸收、體內(nèi)運輸和信號傳遞等的主要途徑研究離子轉(zhuǎn)運蛋白的最終目的是理解離子營養(yǎng)和信號的作用。從這個角度講，研究離子通道更像是一種手段和途徑。我課題組的主要研究方向植物細胞的極性生長和方向調(diào)控機理氣孔運動的分子機理離子營養(yǎng)的體內(nèi)長途轉(zhuǎn)運有機和無機離子的重要作用電生理技術(shù)是研究離子通道的重要手段植物細胞離子通道 1)基本知識 2)研究進展今天的講解內(nèi)容

通過直接檢測跨膜電流信號對跨膜離子通道進行鑒定、特性分析、并研究其生理功能和活性調(diào)控機制的技術(shù)?？梢杂糜谌斯ぶp層、細胞質(zhì)膜和細胞器膜通道的功能研究。其原理是離子通道的開放導致帶電離子/電荷的跨膜流動，產(chǎn)生電流信號。主要包括膜片鉗和電壓鉗兩種常用技術(shù)。電生理技術(shù)（electrophysiology）是研究離子通道/轉(zhuǎn)運體的關(guān)鍵技術(shù)電生理技術(shù)的起源和發(fā)展1786年，LuigiGalvani首次在生物體發(fā)現(xiàn)電現(xiàn)象。因此被認為是電生理學的創(chuàng)始人CarloMatteucci發(fā)現(xiàn)生物組織可以產(chǎn)生電流，并導致靜息電位的發(fā)現(xiàn)。1887年，SidneyRinger建立Ringersolution配方。灌流蛙心的溶液必須含有Na+、K+和Ca2+等離子，并以一定比例混合可以維持蛙心較長時間的跳動。1888年，WaltherNernst建立NernstEquation。5.1902年，JuliusBemstein提出靜息電位K+學說，即現(xiàn)代膜假說的基礎(chǔ)。6.1976年，Neher和Sakmann創(chuàng)立膜片鉗技術(shù)，并首次報道膜片鉗技術(shù)記錄到的細胞膜離子通道電流。7.1980年，Neher偶然發(fā)現(xiàn)向電極內(nèi)施加負壓能使封接電阻驟然增大到GΩ水平，背景噪音大幅下降，通道電流更加清晰。從此創(chuàng)立Gigaseal的鉗制標準。電生理技術(shù)的起源和發(fā)展8.1981年，Hamil等建立gigaseal基礎(chǔ)上的四種膜片鉗記錄方式，一直沿用至今。9.八十年代逐漸成熟，并開始出現(xiàn)商售的專業(yè)設(shè)備，推動了對一些重要科學問題的研究。1983年，AxonInstrumentInc成立，開始商售電生理設(shè)備。10.NeherandSakmann,1991,NobelPrizeinPhysiologyandMedicineDevelopment。膜片鉗技術(shù)的起源和發(fā)展電生理技術(shù)的基本原理（理論基礎(chǔ)）I=V/R

生物膜本身是電絕緣的，不允許帶電離子自由通過離子通道是離子過膜的唯一途徑閉合電路的簡單組成電容電阻電池/PC電阻+-+-Whole-cellConfigurationSaltBridge－+BathSolutionProtoplastPipetteSolution高阻封接ReferenceelectrodeGlasspipette0mVVibrationIsolationTable/防震臺FaradayCage/屏蔽網(wǎng)InvertedMicroscope/倒置顯微鏡Micromanipulator/顯微操作器Amplifier/信號放大器Interface

betweenAmplifierandPC/接口PCSoftware(pClamp11.0)Pipettepullerandpolisher電生理設(shè)備的基本構(gòu)成膜片鉗實驗設(shè)備膜片鉗技術(shù)的四種記錄方式全細胞（whole-cellconfiguration）單通道（single-channelconfigurations）

1)細胞帖附式（cell-attached）

2)內(nèi)翻外方式（inside-out）

3)外翻外方式（outside-out）HamilOPetal.1981.PflugersArch391:85-100Inside-outCell-attachedConfigurationWhole-cellConfigurationProtoplastProtoplastOutside-outProtoplast

幾種膜片鉗鉗制方式示意圖BathSolution電生理實驗電流信號的記錄原理C…...……………....………..............O..…...….…..…….....…-180mV-160mVWhole-cellConfiguration常用的實驗結(jié)果表示方式和幾個重要概念I(lǐng)/Vgraph（全細胞和單通道）OpenProbabiliby(開放幾率)Conductance(電導)CurrentAmplitude(電流幅度)Currentdirection(電流方向)原始電信號記錄和電流方向內(nèi)向外向0Fanetal.2008PNAS,105:8476-8481全細胞電流的I-V曲線單通道的電流幅度、IV曲線和電導ZhangWetal.2007PlantPhysiol143:1140-1151單通道開放幾率的計算方法開放幾率是指各個通道處于開放狀態(tài)的時間總和占記錄總時間的比例，如0.2(20%)。具體分析方法是繪制點數(shù)-電流幅度關(guān)系曲線，用積分的方法計算代表通道開放狀態(tài)的峰面積占全部面積的比率。OpenProbabilityZhangWetal.2007PlantPhysiol143:1140-1151Conductance

電導：由通道本身的特性決定，與具體實驗設(shè)計無關(guān)。在概念上，生物學中的電導類似于物理學中的電導率。全細胞電流分析主要看單位質(zhì)膜面積的電流幅度大小。為此，細胞的電容一般要考慮進去。

2.單通道的電流信號的分析，一般是電導和開放幾率結(jié)合使用。ChannelActivity通道被激活:離子通道活性的變化是通過改變開放頻率來實現(xiàn)的，不是簡單的完全關(guān)閉和完全開放。開放頻率的改變表現(xiàn)為開放幾率的改變。全細胞電流是離子通道行為的群體表現(xiàn)。通道活性的改變表現(xiàn)為全細胞電流幅度的增大或減小。電流方向與離子流動方向Fanetal.2008PNAS,105:8476-8481Cl-外流全細胞方式K+內(nèi)流思考題：敲除一個基因后，導致某種細胞全細胞內(nèi)向K+電流減小的可能原因有哪些？破壞了單亞基通道蛋白的合成；破壞了多亞基通道蛋白的正確組成；突變基因編碼的是通道上游調(diào)控因子，激活因子，或負調(diào)控因子的激活因子；？有機和無機離子的重要作用電生理技術(shù)是研究離子通道的重要手段植物細胞離子通道 1)基本知識 2)研究進展內(nèi)容離子通道的概念

Ionchannelsarepore-formingproteinsthathelpestablishandcontrolthesmallvoltagegradientacrosstheplasmamembraneofalllivingcells(seecellpotential)byallowingtheflowofionsdowntheirelectrochemicalgradient.Theyarepresentinthemembranesthatsurroundallbiologicalcells.Thestudyofionchannelsinvolvesmanyscientifictechniquessuchasvoltageclampelectrophysiology(inparticularpatchclamp),immunohistochemistry,andRT-PCR.

離子通道是一類跨膜蛋白，他們在細胞質(zhì)膜和內(nèi)膜上形成親水性孔道使帶電荷的離子能夠穿過生物膜，是動植物細胞的上的基本興奮單元。它們介導有機和無機的離子跨膜運動，產(chǎn)生和傳導電信號，以及參與細胞信號轉(zhuǎn)導和各種生理過程，具有重要的生理功能。離子通道的概念離子通道的基本特性1.離子通道的亞細胞定位：細胞質(zhì)膜和內(nèi)膜系統(tǒng),如液泡膜，線粒體膜等等

IonchannelsareIntegralMembraneProtein(IMP)

，whichisaproteinmoleculethatispermanentlyattachedtothebiologicalmembrane.Suchproteinscanbeseparatedfromthebiologicalmembranesonlyusingdetergents,nonpolarsolvents,orsometimesdenaturingagents.

VahisaluT.,etal.Nature2008離子通道蛋白的亞細胞定位IsayenkovS.,etal.PlantCell2011通道蛋白在質(zhì)膜上的定位通道蛋白在液泡膜上的定位離子通道的基本特性2.對離子的選擇性（ionselectivity）多數(shù)離子通道只允許一種或幾種離子的通過，即對離子具有一定的選擇性。離子通道的名稱通常以其優(yōu)先通過的離子命名，如Ca2+通道、K+通道、Na+通道。離子通道的選擇性具有相對性：比如多數(shù)Ca2+通道允許Ca2+和與Ca2+同族的其它二價陽離子通過，包括Ba2+、Mg2+、Mn2+和Sr2+等,但通透能力大小不一。離子通道對離子的選擇性FanLMetal.2001JExpBot.52:1603-1614離子通道的基本特性3.離子通道的方向性：多數(shù)離子通道具有一定的方向性，如植物氣孔保衛(wèi)細胞質(zhì)膜K+通道有內(nèi)向K+通道和外向K+通道，它們分別由不同的基因編碼，介導K+的內(nèi)流和外流。離子通道的方向性ArabidopsisguardcellKinArabidopsisguardcellKoutFanetal.2008PNAS,105:8476-8481WardandSchroeder,PlantCell1994離子通道與離子轉(zhuǎn)運體的關(guān)系離子通過通道是流過，是一個非?？焖俚倪^程。離子通過轉(zhuǎn)運子跨膜運動是被運輸過去，相對是一個慢速的過程。離子通道像允許水流過的管道，transporter類似于坐船從河的一側(cè)到另一側(cè)去。通道不直接消耗能源物質(zhì)，而多數(shù)transporter需要直接或間接消耗ATP。有些transporter兼具離子通道的功能。離子通道的分類4.離子通道的門控特性：根據(jù)離子通道門控特性的不同，可以將離子通道分為三類。1）受體門控的離子通道（ligand-gated），如神經(jīng)細胞上受神經(jīng)遞質(zhì)激活的Ca2+通道，普遍存在于動植物細胞受cNMP門控的通道等。（CNGC和GLR）2）電壓門控的離子通道（voltage-gated），如植物細胞膜普遍存在的電壓依賴性K+通道，通過施加超極化電壓或去極化電壓就可以將其激活，介導K+流動，產(chǎn)生K+電流。3）張力激活的離子通道（stretch-activated）。離子通道的分類方式有多種根據(jù)其門控特性劃分：受體門控型、電壓依賴型、第二信使依賴型和張力激活型。根據(jù)其亞細胞定位劃分：質(zhì)膜離子通道和內(nèi)膜離子通道根據(jù)其離子的選擇性劃分：陽離子通道（K+，Na+和Ca2+），陰離子通道（Cl-和有機陰離子通道）和水通道等。電壓門控的擬南芥氣孔保衛(wèi)細胞K+通道FanLMetal.JEB2001StretchActivatedIonChannelsinATGuardCellsZhangWetal.2007PlantPhysiol143:1140-1151Store-operatedCa2+Channel,CRACM1VigM.etal.Science2006CNGCGLRAnnexinShakerfamilyCLCSLAC1/SLAHsALMTNRTABCtransporters=channels?植物中的離子通道家族陽離子通道陰離子通道/轉(zhuǎn)運體TalkeINetal.TrendsinPlantSciences2008CyclicNucleotideGated(Ion)Channels(CNGCs)Jonathanetal.,2006CNGchannelsinvolveinphotoandolfactorysensingasCa2+channelsinneuronsJonathanetal.,2006Barryetal,2008StructureandregulationofCNGchannelsinmammaliancellsCNGchannelsofphotoreceptorsandolfactorysensoryneuronsGroupIGroupIIGroupIIIGroupIVAGroupIVBArabidopsisCNGCs(CyclicNucleotide–GatedChannels)BalaguéC,etal.,PlantCell.2003.Zelmanetal.,2012StructureofArabidopsisCNGCs因為CaM和CNBD都在C端，其活性調(diào)控機制可能與動物細胞的CNGC有很大的不同。KaplanB.etal.,FEBSLetters.2007擬南芥CNGCs家族CNGCs具有保守的離子選擇性核心序列—GYGD，是一個離子選擇性的filter！/ArabidopsisCNGCs在各種組織均有表達AtCNGC1andAtCNGC2areK+channelsLengetal.2002K+(CNGC1)currentsinoocytesK+(CNGC1)currentsinHEK293Ca2+inhibitsK+(CNGC2)currentsinoocytesExpressionpatternsofAtCNGC2-promoter::GUSfusionsintransgenicArabidopsisthalianaplants.AnalysisofAtCNGC2geneexpressionasafunctionofthephaseoftheArabidopsiscell-suspensioncultureSAG12isamarkergeneforsenescenceApplicationofSNPReversestheLackofHRofdnd1PlantstoInfectionwithAvirulentPathogenLPS(aelicitorofplantimmunityresponse)ActivationofNOGenerationinWTanddnd1GC.cAMP-gatedCa2+channelcurrentsinguardcellprotoplastsPlantCell,2007rdd1-1(arepressorofdnd1)repressesthecngc2-mediateddelayinfloraltransitionrdd1suppressesthecngc4-mediatedautoimmunephenotypesCNGC2,

CNGC6和CNGC16的突變產(chǎn)生與溫度感知有關(guān)的表型DeletionofCNGCbCausesaHyper-ThermosensitiveMossPhenotype.GaoFetal.,2012Rootcellscngc6Tunc-OzdemirMetal.,2012CNGC16CNGC3參與種子萌發(fā)過程

HeterologousexpressionofCNGC3inyeastG-19,whichlackscationextrusionsystems.EV=emptyvectorYeastCNGC9

cngc9-2plantsshowalteredshootandrootmorphologieswhengrownunderCaCl2stress.Rootlengthofcngc9-2plantsgerminatedongrowthmediacontaining150mMmannitol.TransientexpressionrevealsAtCNGC10-GFPtraffickingtotheplasmamembraneofArabidopsisleafprotoplastsusingconfocallaserscanningmicroscopyExpressionofAtCNGC10-GFPinHEK293cellsandpatchclampassaysTheSeverityofthePhenotypeConferredbycpr22IsDeterminedbytheRatiobetweenATCNGC11/12andATCNGC12.Thecpr22MutantDevelopsaNormalHRafterInfectionwithanAvirulentPathogen.CNGC19CNGC20CNGC20expressioninrootsandshootsCNGC19expressioninvasculartissuesCNGC是候選的氣孔保衛(wèi)細胞質(zhì)膜Ca2+通道Allenetal.,Nature2001胞質(zhì)Ca2+震蕩控制氣孔關(guān)閉運動胞質(zhì)Ca2+震蕩調(diào)控CO2誘導的氣孔運動Youngetal.,PNAS2006Allenetal.,PlantCell2002ABA激活的氣孔保衛(wèi)細胞Ca2+電流

cngc5-1cngc6-1突變體缺失cGMP誘導的保衛(wèi)細胞內(nèi)向Ca2+電流WTcngc5-1cngc6-1Wangetal.,PlantPhysiol2013MutationsofCNGC1+20,CNGC2,GCA2andABI1-1donotaffecttheactivationofICabyBr-cGMPgca2abi1-1Col-WTcngc1+20cngc2Ler-WTWangetal.,PlantPhysiol2013花粉管準確向胚囊方向生長，直至到達胚囊；人為去除或破壞胚囊，花粉管以隨機的方式生長，失去其方向性。胚囊的引導作用Hülskamp等，1995胚囊可能產(chǎn)生某種引導信號，引導花粉管的定向生長。花粉管頂端胞質(zhì)自由Ca2+梯度的形成、維持、及其振蕩機制是研究花粉管生長機制的關(guān)鍵Ca2+梯度與花粉管生長均具有振蕩特點

自由Ca2+梯度的存在為花粉管生長所必須破壞Ca2+梯度，花粉管生長隨之受抑直至停止

Ca2+梯度的出現(xiàn)是花粉管恢復生長的必要條件

Ca2+濃度的對稱性控制著花粉管生長的方向花粉管頂端Ca2+梯度Pierson

etal.,DevBiol1996;MesserliandRobinson,JCS1997H+(orCa2+)ATPADP+PiCa2+Ca2+Ca2+Ca2+Ca2+Ca2+HighCa2+LowCa2+IP3花粉管頂端可能存在Ca2+通道，介導胞外Ca2+內(nèi)流ROP1和微絲骨架參與花粉管生長調(diào)控，且與Ca2+密切相關(guān)頂端微絲Rop1OELatAFuetal.,JBC2001DuttaandRobinson,PlantPhysiol2004花粉質(zhì)膜超極化激活Ca2+電流WCSingle-channel花粉管質(zhì)膜超張力激活Ca2+電流Wangetal.,2004花粉粒/管質(zhì)膜Ca2+電流cAMP影響百子蓮花粉管生長方向Moutinho等，2001，CNGC18的突變導致雄性不育CNGC7-YFPCNGC8-YFPCNGC16-YFPCNGC18-YFPFrietschetal.,PNAS2007Changetal.,JIPB2007CNGC18isessentialforpollentubeinitiationFrietschSetal.,2007CNGC7，8，16和18參與花粉萌發(fā)和花粉管生長Thecngc7/8pollentransmissiondefectcanberescuedbyCNGC7and8transgenesMutantcngc7/8pollengrainsburstduringinvitrogerminationCNGC7定位在頂端側(cè)面質(zhì)膜上Tunc-OzdemirMetal.,2013CNGC18isaCa2+channelGaoetal.,2014C-terminalisimportantCarboxyl-terminaldeletionsoftheAtCNGC1codingsequenceaffecttheabilityofthechanneltocomplementgrowthinhibitionoftrk1,2atlowK+.CalmodulinRegulationTheC-terminusofCNGC20interactswithcalmodulinsbutnotcalmodulin-likeproteins.IQ(isoleucineglutamine)motifwithinCNGC20CPK32RegulatesCNGC18FRETAnalysisofCACPK32InteractionwithCNGC18CNGC家族的研究現(xiàn)狀通道離子選擇性表達部位生理功能CNGC1Ca2+根Ca2+

uptakeCNGC2/DND1Ca2+莖和葉Senescence,defenceCNGC3Na+，K+（非選擇性)根SeedgerminationCNGC4/DND2未知葉肉細胞DefenceresponsesCNGC10Ca2+，Mg2+，K+etal根CationuptakeCNGC11CNGC12Ca2+，Mg2+

等葉ProgrammedcelldeathCNGC18Ca2+花粉和花粉管花粉管形態(tài)建成和極性生長CNGC19CNGC20根莖葉耐鹽反應(yīng)總體來講，部分AtCNGCs被發(fā)現(xiàn)參與某些生物學過程，其突變產(chǎn)生某種表型。但是,簡單的對某些單/雙突變體進行分析，似乎有明顯的限制，導致對其功能的分析無法得到清晰的結(jié)論。絕大多數(shù)CNGC的離子通道特性，特別是離子選擇性并沒有得到細致準確的鑒定（因為技術(shù)限制）。過去的“多數(shù)CNGCs是K+通道”的推測可能并不正確。絕大多數(shù)CNGC具體在哪一種細胞中有功能，具體機理等等，其實還是相當?shù)哪：Ｋ伎碱}：你認為，除了基于單/雙突變體的表型分析之外，有什么創(chuàng)新性的方法可以用于對植物CNGC家族的研究？ChiuJCetal.MolBiolEvol2002;Lametal.Nature1998GlutamateReceptor-likeChannelsinArabidopsis(20members)AtGLRs被分成三個CLADESChiuJCetal.MolBiolEvol2002AtGLRs的組織分布ChiuJCetal.MolBiolEvol2002GlutamateReceptor–LikeChannelsinPlantCellsMichardEetal.Science2011ImpairedstomatalclosureNormalCa2+oscillationOElinesdonotmaintainlong-termclosure擬南芥K+和K+通道K+占到植物干重的10%，是必須的大量元素。K+通道是植物吸收、轉(zhuǎn)運和重新分配K+的重要途徑。LebaudyA.etal.FEBSLett2007擬南芥K+通道分為三個家族TPK1EncodesanTwo-poreVacuoleK+ChannelLatzA.etal.PlantJ2007LebaudyA.etal.FEBSLett2007TheFunctionsofKir-likeChannelsareUnknownLebaudyA.etal.FEBSLett2007IRC:InwardlyrectifyingconductanceWIRC:WeaklyinwardlyrectifyingconductanceORC:OutwardlyrectifyingconductanceIRCRegul:RegulatorysubunitinvolvedinIRCformation擬南芥SHAKER家族K+通道—細胞質(zhì)膜K+通道K+的跨膜流動是氣孔運動的重要驅(qū)動力Ca2+indepROSWardandSchroeder,PlantCell1994擬南芥氣孔保衛(wèi)細胞中表達的K+通道基因內(nèi)向K+通道：

KAT1、KAT2、AKT1、AKT2和KC2外向K+通道基因： GORKAtKAT1-mediatedcurrentsHoshiT.JGenPhysiol1995KAT2和KAT1組成異源多聚體K+通道，介導氣孔保衛(wèi)細胞K+內(nèi)流Lebautyetal.,JBC2009KAT1:256(T256R)

262(G262K)KAT1和AKT2Baizabal-Aguirreetal.,JMB1999AtKC1isageneralmodulatorofArabidopsisinwardShakerchannelactivityJeangueninL.etal.PlantJ2011InoocyteFanetal.2008PNAS,105:8476-8481ABA抑制氣孔保衛(wèi)細胞K+inABA誘導K+in蛋白的內(nèi)化Sutteretal.,CurrBiol2007KAT1-GFPH+-ATPaseSYP121影響KAT1的分布Sutteretal.,PlantCell2006SYP121regulatesKinactivitybyinteractingwithKC1Honsbeinetal.,PlantCell2009CBL-CIPK23參與氣孔保衛(wèi)細胞K+in的調(diào)控Cheongetal.,PlantJ2007植株失水GORK在氣孔保衛(wèi)細胞中的表達對ABA不敏感GC:guardcellscc:suspension-culturedcellsBeckeretal.,FEBSLett2003GORK為氣孔保衛(wèi)細胞外向K+通道HosyE.etal.PNAS2003Acheetal.,FEBSLett2000AKT2:pH-andCa2+-sensitiveK+inLatzA.etal.Planta2007Mesophyl根毛中的K+通道ReintanzBetal.,PNAS2002SKORJohanssonIetal.,PlantJ2006SKOR是根組織中表達的外向K+通道SKOR受胞外K+和pH調(diào)控AKT1是低親和性K+通道。因此，多年來，多數(shù)人認為其在胞外K+營養(yǎng)缺乏時，并沒有顯著功能.低鉀敏感擬南芥突變體的篩選XuJetal.Cell2006低鉀條件下，lks突變體葉子發(fā)黃壞死，而野生型基本正常XuJetal.Cell2006LKS的功能恢復和過表達可以恢復/提高其擬南芥對低鉀條件的耐受能力說明LKS為K+吸收的關(guān)鍵功能蛋白！LKSencodesCIPK23,whichisaCBL-interactingproteinkinaseXuJetal.Cell2006XuJetal.Cell2006AKT1isthedownstreamtargetofLKSXuJetal.Cell2006AKT1isEssentialforK+uptakeCBL1/9-CIPK23對AKT1的激活對Ca2+具有依賴性Lietal.,PNAS2006SPIKfunctionsinpollentubegrowthasinwardK+channelMoulineetal.,GeneDev2009K+通道的活性調(diào)控機制電壓：多數(shù)K+通道對電壓具有依賴性14-3-3：TPK1磷酸化/去磷酸化：AKT1-CIPK23-CBL1/9Ca2+：氣孔保衛(wèi)細胞內(nèi)向K+通道pH:AKT2功能蛋白的亞基組成：氣孔保衛(wèi)細胞K+in配體：cNMP?CaM?LebaudyA.etal.FEBSLett2007擬南芥K+通道的組織分布陰離子通道/轉(zhuǎn)運體CLC家族NRT家族轉(zhuǎn)運蛋白SLAC1家族ALMT家族AtNRT2.7phloemAtNRT1.9NO3-的吸收木質(zhì)部裝/卸載存儲再分配韌皮部往下運輸FromTsayLabAtCLCs家族參與形成植物細胞內(nèi)膜陰離子通道或反向轉(zhuǎn)運蛋白ZifarelliGandPuschM.FEBSLett2010Dechorgnat,J.,etal.JExpBot2011CLC介導NO3-的跨膜運輸CLCdAtCLCaFunctionsasNO3-/H+AntiportorMediatingNO3-AccumulationinVacuolesinGuardCellsAngeliAD.etal.Nature2006MonachelloDetal.,NewPhytol2009Openbar:WTBlackbar:clceCLCe參與NO3-的體內(nèi)積累氣孔保衛(wèi)細胞中的陰離子通道S-typeandR-typeanionchannelcurrentso