果蠅雜交實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

10果蠅雜交試驗(yàn)【試驗(yàn)?zāi)康摹糠▽?duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)展分析?！驹囼?yàn)原理】〔fruitfl〔Diptera〔genus3000800多種。大局部的物種以腐爛的水果或植物體為具已達(dá)完善的地步，果蠅對(duì)今日的遺傳學(xué)的進(jìn)展有其不行磨滅的奉獻(xiàn)；從1980Drs.C.Nesslein-olhard和E.Weichaus〔通常用作遺傳學(xué)試驗(yàn)材料的是黑腹果蠅Drosophilamelanogaste作為試驗(yàn)材料有很多優(yōu)點(diǎn)：⑴飼養(yǎng)簡(jiǎn)潔。在常溫下，以玉米粉等作飼料就可以生長(zhǎng)，生殖。400～500個(gè)，因此在短時(shí)間內(nèi)就可獲得大量的子代，便于遺傳學(xué)分析。4對(duì)。⑷唾腺染色體制作簡(jiǎn)潔。橫紋清楚，是細(xì)胞學(xué)觀(guān)看的好材料。果蠅的生活史：20～25℃。10℃10℃15℃卵→幼蟲(chóng)幼蟲(chóng)→成蟲(chóng)57天18天20℃8天6天25℃5天4天26～33天。果蠅的生活史如下：雌蠅→減數(shù)分裂→卵受精雄蠅→減數(shù)分裂→精子第一批成蟲(chóng)羽化〔第八天〕〔26～33天〕蛹〔第四天〕其次次蛻皮〔其次天〕

產(chǎn)第一批卵第一批卵孵化〔第零天〕幼蟲(chóng)第一次蛻皮幼蟲(chóng)〔第一天〕果蠅的性別及突變性狀的鑒別：8個(gè)染色體〔2n=43對(duì)在雌雄果蠅中是一樣的，稱(chēng)常染色體。另外一對(duì)稱(chēng)性染色體，在雌果蠅中是XX，在雄蠅XY。較雌性個(gè)體小，腹部環(huán)紋5流蘇，稱(chēng)性梳Sexcombs7條，腹尖色淺，無(wú)性梳。試驗(yàn)中使用的果蠅突變品系影響局部突變名稱(chēng)基因符號(hào)染色體上座位翅殘翅vgIIR67.0眼色白眼wX1.5體色黑體bIIR48.5剛毛焦剛毛snX21.0翅形小翅mX36.1,野生型果蠅為紅眼、灰身、長(zhǎng)翅、直剛毛，與這些性狀對(duì)應(yīng)的突變性狀〔+〕與黑身〔b〕是一對(duì)相對(duì)性狀，且灰身對(duì)黑身為完全顯性，本雜交，性狀的遺傳行為應(yīng)符合分別定律。〔b一突變性狀為焦剛毛〔sn，與之對(duì)應(yīng)的野生型性狀為直剛毛〔+，掌握這對(duì)相相對(duì)性狀的純合親本雜交，其性狀的遺傳行為應(yīng)符合自由組合定律。生物某些性狀的遺傳常與性別聯(lián)系在一起，這種現(xiàn)象稱(chēng)為伴性遺傳sex-linkedinheritance，這是由于支配某些性狀的基因位于性染色體上。果蠅XXYX染色體上，在Y染色體則沒(méi)有與之相應(yīng)的等位基因。將紅眼〔+〕果蠅和白眼〔w〕果蠅雜交，其后代眼色的表現(xiàn)與性別有關(guān)。而且，正反交的結(jié)果不同。不完全連鎖基因在形成配子時(shí)，伴同源染色體非姊妹染色體單體之間發(fā)此確定基因在染色體上的相對(duì)位置，繪制出連鎖遺傳圖。果蠅〔Drosophilamelanogaster〕的紅眼〔+〕對(duì)白眼〔w〕是顯性，直剛毛〔+〕對(duì)焦剛毛〔sn〕是顯性，長(zhǎng)翅〔+〕對(duì)小型翅〔m〕是顯性，掌握這三對(duì)相對(duì)性狀的基因都位于X染色體上，假設(shè)將白眼、焦剛毛snm〕三隱性突變體雌蠅Xwsnwsnm〕與紅眼〔、直剛毛〔、長(zhǎng)翅〔〕野生型雄蠅〔+++〕雜交，1可產(chǎn)生三雜合體雌蠅wsn〕和三隱性雄蠅wsnYX染色體上三個(gè)隱性基因所掌握的性〕,F28種F18種配子及數(shù)目全都，通過(guò)觀(guān)看和統(tǒng)計(jì)F2代〔相當(dāng)于測(cè)交子代〕8種表型的個(gè)體數(shù)，就可估算出這三對(duì)基因間的交換率，由此確定這三對(duì)基因其在染色體上的相對(duì)位置，繪制出連鎖遺傳圖?！驹囼?yàn)材料】不同品系的黑腹果蠅；黑身果蠅〔b：黑體、紅眼、長(zhǎng)翅、直剛毛〔bb〕三隱果蠅：灰體、白眼、小翅、焦剛毛〔++wwsnsnmm〕品系。試驗(yàn)用具、藥品：〔指管，麻醉瓶，棉花，乙醚，酒精，丙酸，培育基等?！驹囼?yàn)操作】〔一〕果蠅試驗(yàn)技術(shù)麻醉：對(duì)果蠅進(jìn)展檢查時(shí)，用乙醚麻醉，使果蠅處于昏迷狀態(tài)。使用時(shí)將乙醚2～3滴〕滴到麻醉瓶的棉花球上〔留意不要讓乙醚流進(jìn)瓶?jī)?nèi)要保持枯燥，否則會(huì)粘住果蠅翅膀，影響觀(guān)看。麻醉果蠅時(shí)，先將長(zhǎng)有果蠅的培育板上進(jìn)展觀(guān)看?！补壋岚蛲庹?5角，說(shuō)明死亡。檢查完畢后，把不需要的果蠅倒入盛有煤油或酒精或水的瓶中〔死蠅盛留器。果蠅交配：將雌雄果蠅放在一起培育，雌蠅的生殖器中有貯精囊，可保存交配所得的大量精子，雌蠅一次交配所得的精子，足夠它屢次排出的卵受精，因此在做雜交試驗(yàn)時(shí)，雌蠅必需選用處女蠅〔沒(méi)有交配過(guò)的雌蠅。雌蠅孵出后12小時(shí)內(nèi)不會(huì)交配，這個(gè)時(shí)間內(nèi)把果蠅全部倒出，分出雌雄蠅，單獨(dú)飼養(yǎng)，這好標(biāo)簽，注明兩親本的基因型及交配日期，進(jìn)展培育。7～8天后倒掉親本〔肯定要倒干凈，以免親代和子代混淆，待F1成蠅羽化后開(kāi)頭計(jì)算，觀(guān)看性狀。牢靠20〔F2也可能有了F2F1F1作親本，進(jìn)展F1雌蠅與另一品系雄蠅雜交時(shí)，還要嚴(yán)格地選取處女蠅，方法同上。原種培育在作的留種培育時(shí)，應(yīng)事先檢查一下果蠅有沒(méi)有混雜，以防原種喪失。親5～10〔依溫度而定，10～154周換一次，20～25℃約二周換一次。每一原種培育至少保存兩套，培育瓶的標(biāo)簽上要寫(xiě)明突變10～15℃，培育時(shí)避開(kāi)日光直射。代的親本，連續(xù)培育?？罩腹苤?，讓它活動(dòng)2～3小時(shí)，換一支指管，再活動(dòng)1～2小時(shí)，而后倒入一支的培育瓶中連續(xù)培育，這樣可以防止霉菌污染。要防止混雜。培育瓶的塞子要做得緊些，不使果蠅逃出。調(diào)換培育瓶時(shí)，要防止挑出數(shù)對(duì)雌雄蠅飼養(yǎng)，進(jìn)展篩選直到完全沒(méi)有分別為止。這樣做，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，只是在不得已時(shí)才承受。一般混雜時(shí)，只要便利，可以重引種，將混雜種棄去?！捕彻夒s交試驗(yàn)果蠅的性狀觀(guān)看、性別鑒定及飼養(yǎng)。選取雜交親本中所用的母本必需是處女蠅。剛羽化的雌蠅在12h內(nèi)一般10～12h收集一次羽化的成蠅，并將雌雄蠅分開(kāi)飼養(yǎng)。收集處女蠅數(shù)量的多少依據(jù)需要而定。麻醉接種用黑身果蠅與三隱果蠅雜交，正反交同時(shí)進(jìn)展。即三隱♀×黑身♂，黑身♀×三隱♂。正交♀BBXw-m-snXw-m-snbbX+++Y♂正交♀BBXw-m-snXw-m-snbbX+++Y♂日期：姓名：♀bbX+++日期：姓名：反交X+++BBXw-m-snY♂將雜交瓶放在20℃～25℃恒溫箱內(nèi)培育。培育7～8d，倒掉雜交親本〔倒掉的果蠅最好處死。1 4～5d，F(xiàn)F1 126～10F20℃～25℃恒溫箱內(nèi)連續(xù)F代〔正反交作一樣處理。1217～8dF代。12 4～5d，F(xiàn)F2 【結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析】〔一〕數(shù)據(jù)記錄灰體 黑體正交合計(jì)♀ ♂ ♀ ♂╋╋╋1622 1247 561 426 3856━━—1185 1154 397 362 3098━╋╋309 261 113 77 760╋━—264 259 99 96 718╋╋— 63 49 22 17 151━━━━╋╋━╋━╋━8197263624031131512712888134124513175792

7803 26934176 3627 1476 1217 10496♀ 5652 ♂ 4844反交合計(jì)♀ ♂ ♀ ♂╋╋╋3558 1437 1153 481 6629━━—145 914 122 313 1494━╋╋ 46 205 27 74 352╋━— 73 195 26 62 356╋╋— 41 88 31 41 201━━╋ 13 73 12 35 133╋━╋157 318 96 125 696━╋— 61 274 26 77 438灰體黑體灰體黑體體色合計(jì)759827014094♀350455871493♂1208471210299圖譜分析P: BB〔灰體〕×bb〔黑體〕F1: Bb(灰體)自交F2： BB Bb bb灰體黑體理論比值：3：1實(shí)際正交數(shù)量：78032693比值：2.90：1反交數(shù)量：75982701比值： 2.81 ： 1基因〔B/b〕基因〔B/b〕正交P〔n=1〕基因差異不顯著〕〔A/a〕反交F2表型灰體黑體合計(jì)O7803269310496E7872262410496χ22.4192表型灰體黑體合計(jì)實(shí)得數(shù)7598270110299預(yù)期數(shù)7724.252574.7510299χ28.2540P〔n=1〕<0.01〔差異極顯著〕圖譜分析正交：P: 灰體焦剛毛〔BBXsnXsn〕×〔bbX+Y〕F1: BbX+Xsn ×BbXsnYF2： BBX+Xsn BbX+Xsn BBXsnXsn BbXsnXsn bbXsnXsnbbXsnY

BbX+Y BBX+Y BBXsnY BbXsnY bbX+Y灰體直剛毛 黑體直剛毛 灰體焦剛毛 黑體焦剛毛理論比值：3：1：3：1實(shí)際數(shù)量：4243149435601199比值：3.54：1.25：2.97：1反交：P: 黑體直剛毛〔bbX+X+〕×〔BBXsnY〕F1: BbX+Xsn ×BbX+YF2： BBX+X+ BbX+X+ BBX+Xsn BbX+Xsn bbX+X+BbX+Y BBX+Y BBXsnY BbXsnY bbX+YbbXsnY灰體直剛毛黑體直剛毛灰體焦剛毛黑體焦剛毛理論比值： 9：3： 3： 1實(shí)際數(shù)量：580720031791698比值：8.32：2.87： 2.57： 1χ2檢驗(yàn)表型合計(jì)灰體直剛毛黑體直剛毛灰體焦剛毛黑體焦剛毛實(shí)得數(shù)424314943560119910496正預(yù)期數(shù)393613123936131210496交χ294.8463P〔n=3〕<0.01〔差異極顯著〕實(shí)得數(shù)58072003179169810299反預(yù)期數(shù)5793.18751931.06251931.0625643.687510299交χ217.4544P(n=3)<0.01〔差異極顯著〕圖譜分析正交 反交P： XwXw〔雌白眼〕×X+Y〔雄紅眼〕 雌紅眼〕×XwY〔雄白眼〕F1: X+Xw〔雌紅眼〕×XwY〔雄白眼〕 X+Xw〔雌紅眼〕×X+Y〔雄紅眼〕理論： 1 ： 1 1 ： 1實(shí)際： 25 ： 16 30 ： 29F2： X+Xw XwXw X+Y XwY X+X+ X+Xw X+YXwY雌紅眼雌白眼雄紅眼雄白眼 雌紅眼 雄紅眼 理論 1 ： 1 ： 1 ： 1 2 ： 1 ： 1實(shí)際3069 ：2583 ：2537 ：2307 5135 ： 2747 ： 1965χ2檢驗(yàn)紅眼紅眼白眼正F1表型雌雄雌雄合計(jì)交實(shí)得數(shù)25001641預(yù)期數(shù)20.50020.541χ21.9756P〔n=1〕0.1—0.5(>0.05)〔差異不顯著〕表型雌雄雌雄合計(jì)實(shí)得數(shù)306925372583230710496F2預(yù)期數(shù)262426242624262410496χ2117.2880P(n=3)<0.01〔差異極顯著〕表型雌雄雌雄合計(jì)實(shí)得數(shù)30290059F1預(yù)期數(shù)29.529.50059χ20.0169反 P〔n=1〕0.5—0.95(>0.05)〔差異不顯著〕表型雌雄雌雄合計(jì)實(shí)得數(shù)51352747-19659847預(yù)期數(shù)4923.52461.75-2461.759847χ2142.3761P〔n=2〕<0.01〔差異極顯著〕交F2交F2++snwm+個(gè)體數(shù)目最少，應(yīng)是雙交換產(chǎn)物，由此可以推論，基因sn肯定位于中間，而三基因的相對(duì)挨次是wsnmF2F2表型數(shù)量比例重組發(fā)生在基因+++3856+++3856wsnm3098++m881wsn+792+snm718w++760+sn+151w+m240總計(jì)1049666.25％w—snsn—mw—m15.94％√√14.08％√√3.73％1√17.81％√19.66％30.02％交換值圖距理論值w-m30.02％+2×3.73％＝37.47％37.4734.6sn-m19.66％19.6615.1w-sn17.81％17.8119.5并發(fā)率1.07干擾-0.07染色體圖w sn m17.8119.6633.417.8119.66理論連鎖圖w sn m15.1019.6034.6015.1019.60【分析及爭(zhēng)論】比率來(lái)看，相差比較大。單因子適合度測(cè)驗(yàn)主要是來(lái)驗(yàn)證分別定律。在χ2適合度檢驗(yàn)中我們覺(jué)察，正交的結(jié)果P值>0.05，說(shuō)明試驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)與理論的數(shù)據(jù)相差不大，支持最初的假設(shè)。但是對(duì)于反交來(lái)說(shuō)，得到的P值<0.01，說(shuō)明與孟德?tīng)柗謩e定律相差很大，不能夠用基因的回交來(lái)說(shuō)明。自由組合定律的驗(yàn)證：果蠅的體色和剛毛是兩對(duì)獨(dú)立遺傳的基因，剛毛基因位于X染色體上。因此，對(duì)于這兩對(duì)基因來(lái)說(shuō)，自身遵守自由組合定律，且F2正反交表型比率不同，通過(guò)圖譜分析，我們得到正交表型比率〔灰體直剛毛：灰體焦剛毛：黑體直剛毛：黑體焦剛毛〕分別為3:3:1:1和9:3:3:1。在雙因子χ2適合度檢驗(yàn)中，正反交的結(jié)果P值均<0.01，與孟德?tīng)栕杂山M合定律相差很大。針對(duì)于以上單因子及雙因子χ2適合度檢驗(yàn)發(fā)生的現(xiàn)象，我認(rèn)為主要有以下兩個(gè)方面的緣由：反交型的單因子適合度測(cè)驗(yàn)可以看出，體色分別比不符合3:1，可能兩個(gè)基因存在于某些有關(guān)于性別方面的連鎖。試驗(yàn)的隨機(jī)誤差較大。試驗(yàn)操作的不到位以及對(duì)果蠅性別、表型特征區(qū)分錯(cuò)誤使結(jié)果消滅誤差。X果蠅的X染色體上。對(duì)于這對(duì)基因來(lái)說(shuō)，遵守伴性遺傳的規(guī)律，且正反交個(gè)體在F1、F2代上表型比率不同，通過(guò)圖譜分析，正交個(gè)體在F1代產(chǎn)生的雄性個(gè)體都是白眼的。通過(guò)χ2適合度測(cè)驗(yàn)，正反交的結(jié)果F1代P值