五脈綠絨蒿對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷的干預(yù)性研究

五脈綠絨蒿對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷的干預(yù)性研究

五脈苦艾酒是罌粟科植物，分布在中國(guó)西藏、陜西、甘肅、青海、四川等地。干燥的整藥是傳統(tǒng)的西藏藥物。具有清熱解毒、鎮(zhèn)痛、消炎利尿的功效。配藥具有鎮(zhèn)痛、息風(fēng)和哮喘、肝氣、肺炎、肺結(jié)核、潰瘍、嬰兒缺勤、咳嗽、哮喘等功效。本實(shí)驗(yàn)研究五脈綠絨蒿對(duì)小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶含量及對(duì)醋氨酚中毒的小鼠生存率的影響,探討五脈綠絨蒿的肝保護(hù)作用。1材料和方法1.1氯化碳試劑1.1.1動(dòng)物昆明種小白鼠雌雄各半,體重16～20g(由蘭州生物制品廠提供)1.1.2主要藥品和試劑醇提取的五脈綠絨蒿浸膏;四氯化碳試劑(分析純,用花生油配制成含CCl40.12%的試劑,由廣東西隴化工廠生產(chǎn));食用魯花花生油;吐溫80;谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)試劑盒(由南京建成生物工程研究所提供)。1.1.3主要儀器和設(shè)備721分光光度計(jì);高速冷凍離心機(jī);勻漿機(jī);低溫冰箱;電熱恒溫水浴鍋等。1.2對(duì)小鼠的處理及血清活性測(cè)定1.2.1五脈綠絨蒿藥物的提取將該藥粉碎稱取1kg加8L食用酒精回餾煮2h,濾出提取液,再加8L的食用酒精重復(fù)3次合并提取液并濃縮(回收酒精)在60℃的烘箱里烘干,實(shí)驗(yàn)時(shí)用花生油:吐溫80∶水為1∶1∶8配制生藥:濃度為0.47g/ml、0.18g/ml、0.06g/ml。1.2.2對(duì)急性肝損傷小鼠的處理將50只小鼠在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)2d后,按體重隨機(jī)分為空白對(duì)照組、CCl4模型組、低劑量藥物組、中劑量藥物組、高劑量藥物組,每組l0只,讓小鼠自由攝取常規(guī)顆粒狀飼料和自來(lái)水?？瞻讓?duì)照組不做任何處理,CCl4模型組用藥物助溶劑(花生油∶吐溫80∶水為l∶l∶8)以10ml/kg劑量灌胃7d,藥物組高、中、低三個(gè)劑量組分別按6.4g/kg、2.1g/kg、0.75g/kg體重灌胃給藥7d,末次給藥后2h,除空白對(duì)照組的小鼠外,其它四組均按以10ml/kg的劑量按體重一次性腹腔注射0.12%CC14花生油溶劑,禁食不禁水,20h后以眼球摘除法取血,分離血清。1.2.3對(duì)醋氨酚中毒小鼠的處理小白鼠40只,隨機(jī)分為4組,對(duì)照組,高、中、低劑量組,每組10只,連續(xù)灌胃給藥5d,于末次給藥0.5h后,所有均腹腔注射醋氨酚400mg/kg,觀察記錄20h內(nèi)小白鼠的死亡情況。1.2.4血清樣處理在3500r/min離心15min,取上清液低溫保存。1.2.5ALT活性測(cè)定參照改良賴氏法測(cè)定血清中的ALT能與丙氨酸和a-酮戊二酸反應(yīng)生成丙酮酸及谷氨酸,丙酮酸與2,4-二硝基苯肼生成2,4-二硝基苯腙在堿性液中顯棕紅色,在505nm處有最大吸收值。先用丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液作一標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后測(cè)定樣品的吸光度,查閱標(biāo)準(zhǔn)曲線,并且乘以血清稀釋倍數(shù),計(jì)算ALT的活力。1.2.6AST活性測(cè)定參照改良賴氏法測(cè)定,血清中的AST能與Asp和a-酮戊二酸反應(yīng)生成草酰乙酸和谷氨酸,前者與2,4-二硝基苯肼生成的2,4-二硝基苯腙在堿性液中顯棕紅色,在505nm處有最大吸收值,同上法計(jì)算AST的活力。1.2.6數(shù)據(jù)處理所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果用Xˉˉˉ±SEXˉ±SE表示采用t檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1對(duì)血清alt和ast活性的影響從上表可看出,CC14肝損傷模型組小鼠血清ALT和AST的活性明顯高于空白對(duì)照組;與模型組比較,藥物組小鼠血清ALT和AST的活性明顯降低,且中、低劑量的效果較好。2.2醋氨酚中毒大鼠的死亡率：結(jié)果如表2所示結(jié)果顯示:對(duì)照組致死率達(dá)100%,而給藥組隨著劑量的增加生存率呈逐漸升高的趨勢(shì),復(fù)方枸杞能提高醋氨酚中毒的小鼠生存率。3cc14的病理生理研究本實(shí)驗(yàn)表明CC14對(duì)小鼠肝組織有損傷作用,表現(xiàn)在血清中ALT、AST的含量比空白對(duì)照組的有顯著性的增高。CC14是一種典型的肝臟毒物,經(jīng)肝臟微粒體細(xì)胞色素P-450激活后,發(fā)生均裂產(chǎn)生自由基(CC13)。一方面CC13可以攻擊細(xì)胞膜上的磷脂分子,引起脂質(zhì)過(guò)氧化,并與膜蛋白結(jié)合,破壞了膜的結(jié)構(gòu)和功能;另一方面CC14抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的鈣離子泵,使鈣離子升高,從而激活肝細(xì)胞膜上的磷酸化酶,引起脂質(zhì)過(guò)氧化,導(dǎo)致肝細(xì)胞膜損傷。當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí),由于肝細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)氨酶的濃度比血清中的高,胞漿內(nèi)的ALT和AST因濃度差釋放入血,造成高血清ALT和AST,故血清中的ALT和AST的含量是反映肝受損的敏感指標(biāo),也能反映肝細(xì)胞損傷的程度。CC14可引起化學(xué)性肝損傷,導(dǎo)致肝細(xì)胞變性、壞死、間質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn),也能引起肝纖維化,肝纖維化又是大多數(shù)慢性肝病共有的病理特征,是進(jìn)一步向肝硬化發(fā)展的主要中間環(huán)節(jié)。肝纖維化的防治是當(dāng)今肝病治療的難點(diǎn)之一,也是國(guó)際上研究的熱點(diǎn)。目前治療肝病缺乏理想藥物,國(guó)外對(duì)晚期肝硬化唯一有效的方法是肝移植,即使在發(fā)達(dá)國(guó)家,由于可利用的捐獻(xiàn)器官少以及潛在接受者的病情復(fù)雜限制了這種技術(shù)應(yīng)用。西藥如干擾素、阿糖腺苷雖然有一定療效,但價(jià)格昂貴,難以普及,因此尋找有效而實(shí)用的中草藥防治肝病具有十分重要的意義,有著廣闊的前景。五脈綠絨蒿能防止CC14引起的小鼠血清ALT和AST的升高;其保護(hù)肝損傷的作用可能與五脈綠絨蒿中所含的多糖、黃酮類物質(zhì)有關(guān)。對(duì)藏藥五脈綠絨蒿化學(xué)成分進(jìn)行了研究