診斷-血液學(xué)一般檢查

實(shí)驗(yàn)一血液學(xué)一般檢查

[內(nèi)容]血紅蛋白測(cè)定（氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法）白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WhiteBloodCellCount）

實(shí)驗(yàn)一1.血紅蛋白測(cè)定---

氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）測(cè)定法

該法具有操作簡(jiǎn)便，結(jié)果穩(wěn)定可靠，試劑容易保存等優(yōu)點(diǎn)，被國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)推薦為參考方法，為我國(guó)測(cè)定血紅蛋白首選方法。實(shí)驗(yàn)一血液在血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中溶血后，血紅蛋白被高鐵氰化鉀[K3Fe(CN)6]氧化為高鐵血紅蛋白（Hi），后者與氰離子（CN-）結(jié)合生成穩(wěn)定的棕紅色氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）。在特定波長(zhǎng)（540nm）和光徑（比色杯內(nèi)徑1.0cm）條件下具有一定的吸光度，通過(guò)用標(biāo)準(zhǔn)液制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可求出血紅蛋白濃度來(lái)。原理Hb

Hi+CN-HiCNK3Fe(CN)6實(shí)驗(yàn)一[試劑]血紅蛋白轉(zhuǎn)化液（文齊氏液）：氰化鉀（KCN）0.05g高鐵氰化鉀[K3Fe(CN)6]0.20g無(wú)水磷酸二氫鉀（KH2PO4）0.14gTritonX—1001.0ml蒸餾水加至1000ml[器材]1.血紅蛋白吸管，5ml吸管2.大試管3.721分光光度計(jì)上述試劑為淡黃色溶液，貯存于棕色瓶中室溫保存，其中非離子表面活性劑可加速溶血，縮短轉(zhuǎn)化時(shí)間，防止因血漿蛋白改變引起的混濁[標(biāo)本來(lái)源]

EDTA-K2抗凝全血或毛細(xì)血管采血

實(shí)驗(yàn)一[操作]1.取血紅蛋白轉(zhuǎn)化液5.0ml加入大試管中。2.用血紅蛋白吸管吸取全血20μl，輕拭管尖外余血，并準(zhǔn)確調(diào)節(jié)血柱液面至20μl。加入到準(zhǔn)備好的血紅蛋白轉(zhuǎn)化液底部，并用上清液吸、吐兩次洗凈血紅蛋白吸管內(nèi)殘余血液，充分混勻，靜置5分鐘。實(shí)驗(yàn)一3.于722分光光度計(jì)上以轉(zhuǎn)化液為空白進(jìn)行比色測(cè)定，波長(zhǎng)540nm,光徑1.0cm。4.通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線間接求出血液中Hb的含量實(shí)驗(yàn)一將HiCN標(biāo)準(zhǔn)液倍比稀釋?zhuān)ㄈ?0g/L、100g/L、150g/L、200g/L）后,在所用的分光光度計(jì)上540nm處，光徑1.0cm，以轉(zhuǎn)化液為空白測(cè)定各稀釋度的吸光度。以標(biāo)準(zhǔn)品血紅蛋白含量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,或求出換算常數(shù)K(K=ΣHb/ΣA)。則通過(guò)待測(cè)標(biāo)本吸光度值查標(biāo)準(zhǔn)曲線或用K值計(jì)算血紅蛋白濃度（Hb=K×A）。[附]HiCN標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和K值計(jì)算：實(shí)驗(yàn)一[參考值]成年男性：（120～160）g/L成年女性：（110～150）g/L新生兒：（170～200）g/L[注意事項(xiàng)]1.試劑因含氰化鉀，雖濃度較低，但在配制、保存、使用中需妥善。2.標(biāo)準(zhǔn)曲線或K值，應(yīng)定期檢查、校準(zhǔn)。[報(bào)告方式]Hb：__g/L實(shí)驗(yàn)一2.白細(xì)胞計(jì)數(shù)[原理]血液用白細(xì)胞稀釋液（2%醋酸溶液）稀釋?zhuān)辜t細(xì)胞溶解，白細(xì)胞形態(tài)更加清晰后，充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)池，于顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體積內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液中的白細(xì)胞數(shù)量實(shí)驗(yàn)一1.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，蓋玻片2.血紅蛋白吸管（具有10μl及20μl刻度）3.1ml吸管，小試管，玻棒4.光學(xué)顯微鏡[器材]實(shí)驗(yàn)一[試劑]白細(xì)胞稀釋液：冰醋酸2ml1%龍膽紫1ml或結(jié)晶紫數(shù)滴蒸餾水加至100ml[標(biāo)本來(lái)源]EDTA-K2抗凝全血或毛細(xì)血管采血實(shí)驗(yàn)一1.加稀釋液：取白細(xì)胞稀釋液0.38ml于一干凈小試管中。2.加血：用血紅蛋白吸管取全血（指血或EDTA-K2抗凝血）20μl，輕拭管尖外余血，準(zhǔn)確調(diào)節(jié)血液液面至20μl處，將血紅蛋白吸管插入白細(xì)胞稀釋液中（即小試管底部），迅速將血液放出，并用上清液吸吐兩次洗凈血紅蛋白吸管內(nèi)殘余血液。3.溶血：輕輕混勻后室溫靜置，待液體變?yōu)樽睾稚?，即紅細(xì)胞被完全破壞。4.沖池：用微量吸管或玻棒取適量混勻的白細(xì)胞懸液充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)池（一次充好，液體不可外溢，不可有氣泡，否則擦凈重充），室溫水平靜置2～3分鐘，待細(xì)胞下沉后顯微鏡下計(jì)數(shù)。5.計(jì)數(shù)：將血細(xì)胞計(jì)數(shù)盤(pán)放在顯微鏡載物臺(tái)上，低倍鏡下計(jì)數(shù)四角4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)。（壓線細(xì)胞計(jì)數(shù)原則：數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右）[操作]實(shí)驗(yàn)一6.計(jì)算：白細(xì)胞/L=(N/4)×10×106×20=(N/20)×109式中N表示四個(gè)大方格內(nèi)數(shù)得的白細(xì)胞總數(shù)。/4:為平均每個(gè)大方格（0.1mm3）稀釋液內(nèi)WBC數(shù)。×10：將一個(gè)大方格白細(xì)胞數(shù)換算為1μl內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)?！?06：1L=106μl?！?0：為血液稀釋倍數(shù)。白白白白白細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)實(shí)驗(yàn)一計(jì)數(shù)池構(gòu)造實(shí)驗(yàn)一低倍鏡下的計(jì)數(shù)池大方格結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)一低倍鏡下的白細(xì)胞形態(tài)（10X10）實(shí)驗(yàn)一白細(xì)胞計(jì)數(shù)操作步驟實(shí)驗(yàn)一[報(bào)告方式]白細(xì)胞數(shù)（WBC）：__×109/L[參考值]成人：（4～10）×109/L新生兒：（15～20）×109/L實(shí)驗(yàn)一1.采血及計(jì)數(shù)室充液注意事項(xiàng):毛細(xì)血管采血部位的皮膚必須正常，凡局部有水腫、發(fā)炎、紫紺或凍瘡等均不可穿刺采血。穿刺必須足夠深，使血液自行流出或輕施壓力即可流出。EDTA-K2抗凝全血使用前需混勻。計(jì)數(shù)盤(pán)和蓋玻片在使用前需用稠布或紗布擦拭干凈。血紅蛋白吸管內(nèi)腔一定要干燥，否則會(huì)影響吸血量及導(dǎo)致溶血。毛細(xì)血管采血?jiǎng)幼鞅仨氀杆俜駝t常易凝固，若作血紅蛋白和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)兩項(xiàng)時(shí)，應(yīng)先取紅細(xì)胞計(jì)數(shù)標(biāo)本，后作血紅蛋白測(cè)定。手指血紅細(xì)胞與靜脈采血有差異且影響因素多，條件允許時(shí)應(yīng)盡量靜脈采血。[注意事項(xiàng)]實(shí)驗(yàn)一2．一定要在稀釋液轉(zhuǎn)為棕褐色后方能充池計(jì)數(shù)，否則因RBC殘存而干擾計(jì)數(shù)使結(jié)果偏高。3．白細(xì)胞稀釋液不能破壞有核紅細(xì)胞，某些病理情況下外周血出現(xiàn)大量有核紅細(xì)胞，可使白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果偏高，應(yīng)進(jìn)行校正。校