餌料生物調(diào)查識(shí)別與生物餌料培養(yǎng)技術(shù)-微生態(tài)制劑的應(yīng)用技術(shù)

光合細(xì)菌的擴(kuò)培和應(yīng)用3、光合細(xì)菌的培養(yǎng)方法滅菌消毒滅菌1、工具、容器的滅菌高壓蒸汽滅菌（121℃、20-30min）干熱滅菌（烘箱，150-160℃、2h）2、培養(yǎng)基的滅菌常壓蒸汽滅菌（牛奶、明膠）過(guò)濾滅菌（賽氏過(guò)濾器、微孔過(guò)濾器）高壓蒸汽滅菌注射器過(guò)濾除菌日常管理操作和測(cè)試攪拌和充氣：保持菌體懸浮，并接受光照，DO小于1mg/L調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度：40μE/M2/S～100μE/M2/S溫度調(diào)節(jié)：23℃～39℃酸度測(cè)定和調(diào)節(jié)：用酸調(diào)節(jié)pH界于7～8測(cè)定光密度：確定培養(yǎng)物的菌細(xì)胞濃度，了解光合細(xì)菌的生長(zhǎng)情況生長(zhǎng)情況的檢查測(cè)定培養(yǎng)液的光密度（分光光度儀）光密度值增加越快，菌體的繁殖也越快觀察菌液的顏色及其變化菌液的顏色正常，接種后顏色迅速由淺變深，說(shuō)明菌體繁殖快反之，培養(yǎng)液出現(xiàn)非正常顏色，菌體附壁或顏色不見(jiàn)變深，則多半是培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)的問(wèn)題分光光度儀測(cè)定菌體生長(zhǎng)密度（OD）光譜范圍：599-600波段OD值為1.0時(shí)，對(duì)應(yīng)細(xì)胞數(shù)約為1.0*109采收的光合細(xì)菌可直接使用，也可貯存直接采收：濃度低，運(yùn)輸貯存不便濃縮或進(jìn)一步加工成固體：濃度提高10倍，達(dá)5×109細(xì)胞/mL～10×109細(xì)胞/mL，減少運(yùn)輸和貯存成本

濃縮的方法：黑暗靜置沉淀過(guò)濾濃縮加絮凝劑連續(xù)離心4、光合細(xì)菌的檢驗(yàn)（一）檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)：１、微生物指標(biāo)：菌落形態(tài)

光合細(xì)菌稀釋后在瓊脂培養(yǎng)皿上培養(yǎng)，菌落形態(tài)為草帽形或園形，表面光滑，少隆起，邊緣整齊，棕紅色。菌體形態(tài)

顯微鏡下觀察，光合細(xì)菌菌體形態(tài)為短桿狀或卵園形，寬0.5-0.9微米，長(zhǎng)1.2-2.0微米，無(wú)芽孢，無(wú)莢膜，單極鞭毛，可運(yùn)動(dòng)。革蘭氏染色陰性

2、感觀指標(biāo)

光合細(xì)菌為紅色懸浮液體，帶培養(yǎng)基發(fā)酵味，長(zhǎng)時(shí)間靜置紅色懸浮菌體會(huì)逐漸下沉，振蕩后可恢復(fù)懸浮液狀，無(wú)臭味。3、光合細(xì)菌含量

總菌數(shù)不低于30億個(gè)/ml30*109

活菌數(shù)不低于20億個(gè)/ml20*1094、理化指標(biāo)

酸度PH6.5-7.0

電導(dǎo)率6－8ms/cm

5、光譜指標(biāo)

光吸收植A660＞1.5

A490＞2.5

A805＞1.7

A860＞1.9

6、衛(wèi)生指標(biāo)

沙門(mén)氏菌無(wú)

黃曲霉素B1(mg/Kg)＜0.02

總砷（AS）(mg/Kg)＜0.5

鉛(mg/Kg)＜2.0

（3）培養(yǎng)中的菌液一滴做涂片，自然干燥，酒精燈火焰固定，經(jīng)初染（結(jié)晶紫），媒染（路氏碘液），脫色（95％乙醇），復(fù)染（番紅染液）后，油鏡（16×100）觀察，菌體呈紅色。2、感觀檢驗(yàn)量取樣品500ml，置三角瓶中，用肉眼觀察顏色，用嗅覺(jué)檢察嗅味。長(zhǎng)期靜置已有沉淀的產(chǎn)品應(yīng)先振蕩或攪拌10－20秒后再取樣。

3、含量測(cè)定（１）總菌數(shù)測(cè)定：樣品充分振蕩后取0.5ml用水稀釋到200ml滅菌水中，攪勻后從中取數(shù)微升充板入血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池中（每大格0.1mm3，置600倍顯微鏡下觀察，同時(shí)用紅血球計(jì)數(shù)法記菌數(shù)，將25個(gè)小格的每格菌數(shù)平均值乘1億為每毫升總菌數(shù)。（２）活菌數(shù)測(cè)定：將（１）中稀釋的菌液再稀釋100000倍，取1ml加到10ml培養(yǎng)液中，混合均勻后加入20g/1000ml濃度瓊脂溶液10ml，置平皿中凝固，加玻璃蓋在25－30℃溫度，無(wú)菌環(huán)境下，60瓦白熾燈照射，距燈泡12cm，1－2天后觀察計(jì)數(shù)菌落數(shù)，以下式計(jì)算：

每毫升樣品中的活菌數(shù)＝菌落計(jì)數(shù)/25×1億

4、理化指標(biāo)測(cè)定（1）酸度測(cè)定

以不低于0.01PH值精度的酸度計(jì)，直接于20ml樣品中測(cè)量。（2）電導(dǎo)率測(cè)定

以DOS－IIA型（或同等精度其它型號(hào)）電導(dǎo)儀直接于20ml樣品中測(cè)量。5、光譜指標(biāo)測(cè)定

取0.5ml樣品置3ml容積，1cm光徑比色杯中，加入2ml蒸餾水，以蒸餾水為對(duì)照，在可見(jiàn)分光光度計(jì)中讀取660nm、490nm、805nm、860nm波長(zhǎng)處光吸收值，再乘5得到以上幾個(gè)波長(zhǎng)處的光吸收值。6、衛(wèi)生指標(biāo)檢驗(yàn)（略）室內(nèi)小型培養(yǎng)光合細(xì)菌簡(jiǎn)易培養(yǎng)光合細(xì)菌簡(jiǎn)易培養(yǎng)第一步往5L瓶子里面灌水（注意注水量）第二步準(zhǔn)備菌種第三步光合細(xì)菌培養(yǎng)基1袋（粉劑）第四步準(zhǔn)備：100ml的量杯1個(gè)，2000ml的量杯1個(gè)第五步將搖晃均勻的菌種，倒入2000ml的量杯中，至1000ml的位置第六步將1000ml的菌種，倒入放好水的瓶子中。第七步