制馬錢子炮制工藝研究

1前言；2材料與儀器；3方法與結(jié)果；4討論．制馬錢子炮制工藝研究摘要：馬錢子具有重要的中藥臨床應(yīng)用價(jià)值,但其毒性劇烈,中毒量與治療量接近,若因誤用,或服用過量,或炮制不得法,可引起中毒反應(yīng)甚則死亡。尤其在劑量方面,許多有關(guān)馬錢子毒性反應(yīng)的報(bào)道均由于服用馬錢子劑量過大引起。但臨床應(yīng)用時(shí)若劑量太小又達(dá)不到較好的療效。祖國醫(yī)藥學(xué)研究表明,馬錢子味苦,性溫,有大毒,歸肝,脾經(jīng)。主要功能為通絡(luò)止痛,散結(jié)消腫。用于治療風(fēng)濕頑痹,麻木癱瘓,跌撲損傷,癰疽腫痛等?，F(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)文獻(xiàn)研究表明,馬錢子含多種生物堿,藥理作用廣泛,可用于治療內(nèi)科、外科、五官科等疾病。馬錢子的主要有毒成分為番木鱉堿和馬錢子堿。若服用過量,可引起肢體顫動(dòng)、`驚厥、呼吸困難、昏迷。影響馬錢子毒性的因素很多,主要有劑量、炮制、配伍、劑型等方面。關(guān)鍵詞：馬錢子；炮制；士的寧；馬錢子堿；指紋圖譜；質(zhì)量控制現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)馬錢子研究概況概述近年來,醫(yī)藥學(xué)界對(duì)馬錢子做了大量研究工作,包括它的化學(xué)成分、藥理作用、臨床應(yīng)用、毒理學(xué)等方面,尤其在藥理與臨床研究方面。（一）中樞興奮作用番木鱉堿士的寧為馬錢子中含量最高的生物堿,對(duì)整個(gè)中樞系統(tǒng)都有興奮作用。首先興奮脊髓的反射功能,其次興奮延髓的呼吸中樞和血管運(yùn)動(dòng)中樞,并能提高大腦皮質(zhì)的感覺中樞功能。能興奮迷走神經(jīng),使呼吸中樞興奮性提高,呼吸加快加深。還可興奮咳嗽中樞。小劑量士的寧能加強(qiáng)皮質(zhì)的興奮過程,使處于抑制狀態(tài)的病人蘇醒,提高味覺、觸覺、聽覺等感覺器官的功能。較大劑量時(shí)可引起強(qiáng)直性驚厥。接近中毒量時(shí),在短暫的興奮后發(fā)生超抑制現(xiàn)象〔一川。馬錢子堿對(duì)小鼠兼有興奮與抑制作用,兩種作用的出現(xiàn)常取決于藥物的劑量及動(dòng)物個(gè)體對(duì)藥物的敏感性〔周。（二）鎮(zhèn)痛作用實(shí)驗(yàn)表明馬錢子堿具有中樞鎮(zhèn)痛作用,而士的寧有較弱的鎮(zhèn)痛作用`洲。馬錢子堿能明顯增加嗎啡鎮(zhèn)痛作用,且延長(zhǎng)其鎮(zhèn)痛時(shí)間。馬錢子堿的鎮(zhèn)痛作用不受納絡(luò)酮、帕吉林及利血平的影響,毛果蕓香堿可加強(qiáng)其鎮(zhèn)痛,而阿托品則能部分拮抗之,表明馬錢子堿鎮(zhèn)痛機(jī)制與膽堿能系統(tǒng)有一定聯(lián)系〔。馬錢子堿單用易產(chǎn)生鎮(zhèn)痛耐受性,與嗎啡合用,可明顯推遲嗎啡鎮(zhèn)痛耐受時(shí)間,且馬錢子堿不具有成癮性。健胃作用士的寧對(duì)人胃腸平滑肌無明顯影響,但因其有強(qiáng)烈苦味,可刺激味覺感受器而反射性地增加胃液分泌,促進(jìn)消化功能,并因提高味覺、嗅覺等功能而增進(jìn)食欲。（四）鎮(zhèn)咳、祛痰作用馬錢子堿氮氧化物抑制大鼠角叉菜膠致胸腔滲出液白細(xì)胞游走的作用明顯強(qiáng)于馬錢子堿,還可明顯抑制小鼠由巴豆油導(dǎo)致的耳腫及腹腔毛細(xì)血管的通透性,促進(jìn)炎癥滲出物的吸收,改變局部組織營養(yǎng)狀況。張氏〔等研究發(fā)現(xiàn)馬錢子堿大、中劑量組對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎反應(yīng)有明顯抑制作用,而小劑量組對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎原發(fā)性炎癥有一定抑制趨勢(shì)。（五）抑制腫瘤及免疫反應(yīng)作用馬錢子堿與士的寧及其氮氧化物對(duì)腫瘤細(xì)胞株、具有抑制其生長(zhǎng)及形態(tài)損傷作用,機(jī)制可能是抑制腫瘤細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成作用，復(fù)方馬錢子片能選擇性地抑制細(xì)胞免疫,抑制機(jī)體對(duì)免疫復(fù)合物的超敏反應(yīng)，復(fù)方馬錢子湯能抑制小鼠血清溶血素生成和水平,表現(xiàn)免疫調(diào)節(jié)作用,劑量對(duì)效應(yīng)有較大影響。（六）心血管系統(tǒng)作用馬錢子堿能顯著激動(dòng)大鼠乳鼠的心肌細(xì)胞上型、型、型種鈣通道的單通道活動(dòng),使其開放時(shí)間延長(zhǎng)。異馬錢子堿及其氮氧化物能明顯抵消黃膘吟一黃嘿吟氧化酶一助引起的破壞培養(yǎng)的心肌細(xì)胞肌絲和線粒體等超微結(jié)構(gòu)的作用,說明對(duì)心肌細(xì)胞有保護(hù)作用。（七）其它作用馬錢子堿低濃度時(shí)促進(jìn)淋巴細(xì)胞有絲分裂,高濃度時(shí)抑制之。馬錢子水浸液于體外對(duì)許蘭黃癬菌、奧杜盎小芽抱癬菌等皮膚真菌或細(xì)菌有一定抑制作用二、HPLC測(cè)定馬錢子及其炮制品中士的寧和馬錢子堿的含量（一）馬錢子江西炮制方法為了論證江西炮制方法的合理性,我們對(duì)馬錢子的相關(guān)炮制品作了含量測(cè)定。用氯仿一濃氨溶液對(duì)樣品進(jìn)行超聲振蕩提取高效液相法測(cè)定馬錢子生品及各炮制品中士的寧和馬錢子堿的含量。本法回收率高、重現(xiàn)性好、色譜峰形態(tài)好、結(jié)果準(zhǔn)確可靠。1儀器與試藥高效液相色譜儀。對(duì)照品士的寧和馬錢子堿均購于中國藥品生物制品檢定所,士的寧批號(hào)一以刃供含量測(cè)定用,馬錢子堿批號(hào)一供鑒別用,經(jīng)純化后,用歸一化法測(cè)定含量為甲醇為色譜純其余為分析純。樣品馬錢子購自樟樹藥材市場(chǎng),經(jīng)鑒定為馬錢科植物馬錢皿一的干燥成熟種子。童便由首都師范大學(xué)幼兒園提供。2樣品炮制馬錢子取生馬錢子粉碎成細(xì)粉。砂燙法按《中國藥典》年版馬錢子項(xiàng)下方法炮制。油炸法取市售麻油,倒入鐵鍋中加熱至℃左右以溫程℃的溫度計(jì)距鍋底處測(cè)定,投人馬錢子炸至老黃色為度約,取出瀝盡油,晾干即得。樟幫尿泡法原藥放人童便中浸夏季放人冰箱中,溫度控制在一℃至鼓脹,取出,再用清水長(zhǎng)流水漂約一,取出,刮去絨毛。再用水漂,撈出,瀝干水,用樟刀切成腰子片,曬干。樟幫尿泡滑石粉炒法取尿泡馬錢子片,用滑石粉炒至黃色,篩去滑石粉,研末即可。建幫尿泡砂炒法取原藥材加人童便浸泡,加蓋置后取出,用清水?dāng)嚢铔_洗盡尿汁,再加清水漂一,取出,用碎瓷片刮去絨毛,切薄片,曬至全干。取定量的凈白砂,入鍋內(nèi)用武火炒至烘熱或輕松流利,倒入馬錢片,轉(zhuǎn)文火不斷翻炒至表面鼓起、轉(zhuǎn)棕褐色時(shí),迅速出鍋,篩去砂子,攤涼,再碾細(xì)末。醋酸浸法取凈馬錢子用水泡,潤(rùn),洗凈,切的薄片,再用的醋酸溶液浸泡,水漂,干燥,碾碎。醋酸浸泡砂炒法取醋酸浸馬錢子片按砂燙法項(xiàng)下炮制。醋酸煮法取凈馬錢子用水泡,潤(rùn),洗凈,切的薄片,用的醋酸溶液緩火煮,取出,晾干。（二）制馬錢子工藝研究1．制馬錢子工藝研究1.1制馬錢子炮制用砂考察1.1.1砂燙法炮制原理砂燙法用河砂或油砂作傳熱介質(zhì)，有以下特點(diǎn)，砂不具藥理作用，也不與藥物起協(xié)同作用，燙制藥物時(shí)，因砂的中間傳熱作用，能使藥物受熱面積顯著增大，受熱均勻，程度一致。砂燙法的一般工藝為，取適宜量的干凈河砂倒入鍋內(nèi)，用適當(dāng)火力加熱并攪拌，至砂流動(dòng)滑利時(shí)，投入大小分檔的藥物，不斷翻拌，燙至規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，迅速離火篩去砂，放晾即可。1.1.2砂燙法用砂品種及粒徑砂的產(chǎn)源選擇，建筑用砂分為天然砂、人工砂兩類，天然砂包括河砂、湖砂、山砂、淡化海砂，人工砂包括機(jī)制砂、混合砂等。其中海砂中大量含有碎貝殼及可溶性鹽等有害雜質(zhì)，不利于中藥炮制穩(wěn)定性及安全性，山砂是巖體風(fēng)化后在山澗堆積下來的巖石碎屑，其顆粒多棱角、粗糙，不容易炒至滑利狀態(tài)，且容易破外藥材表面性狀，鑒于獲取的難易程度，因此優(yōu)先選用河沙。砂的粒徑選擇，建筑用砂等級(jí)分為特細(xì)砂（0.7-1.5），細(xì)砂（1.6-2.2），中砂（2.3-3.0），粗砂（3.1-3.7）。粒徑較小的特細(xì)砂及細(xì)砂在中藥炮制過程中容易嵌入藥材內(nèi)部，不容易篩除，影響藥材質(zhì)量，粒徑過大則傳熱不均勻，沙粒粗糙，不容易炒至滑利狀態(tài)，因此選用中砂進(jìn)行藥材炮制。砂的水洗及不水洗的選擇，在炮制過程中，未水洗的河沙含有較多灰塵，容易覆蓋在藥材表面，影響受熱，影響藥材灰分，且不利于性狀觀察，因此炮制用砂應(yīng)水洗后干燥使用。1.1.3砂燙法用砂量考察砂的用量以能埋沒藥物的1／2為宜，取凈河砂8kg，投入馬錢子直至混勻后埋沒到1/2為止，將馬錢子篩出，稱重為2.64kg，馬錢子與河砂比例為1：3。1.1.4炒制工藝考察最大炒制量考察將馬錢子與河沙以1：3的比例混勻后作預(yù)混物料備用，考察設(shè)備為自控溫旋蓋電熱炒藥機(jī)，廠家為臺(tái)州博大制藥機(jī)械科技有限公司，型號(hào)XCYD-500，炒藥桶深度56cm，直徑49cm。設(shè)定炒藥機(jī)轉(zhuǎn)速為40Hz，室溫下運(yùn)轉(zhuǎn)，持續(xù)投入預(yù)混物料，以炒藥機(jī)不合蓋正轉(zhuǎn)下，藥材剛好逸出也無帶不動(dòng)料時(shí)停在投料，篩去河沙，稱取馬錢子重量，確定制馬錢子最大炒藥量約為5kg左右，炮制試驗(yàn)過程中采用2.6kg投料量。炒制溫度及時(shí)間考察溫度及時(shí)間考察一：投料溫度為180℃，設(shè)定炒藥機(jī)轉(zhuǎn)速為40hz，正轉(zhuǎn)，溫度為180℃，升溫至150℃時(shí)投入凈河沙8kg，持續(xù)炒至溫度升為180℃時(shí)觀察河沙狀態(tài)，已達(dá)到翻炒流暢的滑利狀態(tài)。迅速將2.6kg的生馬錢子投入鍋中，每隔2min取樣一次，記錄各取樣點(diǎn)的性狀，測(cè)定其水分、馬錢子堿及士的寧的含量。結(jié)果見表2，藥材性狀見圖4-5。溫度及時(shí)間考察二：投料溫度為200℃，設(shè)定炒藥機(jī)轉(zhuǎn)速為40hz，正轉(zhuǎn)，溫度為200℃，升溫至150℃時(shí)投入凈河沙8kg，持續(xù)炒至溫度升為200℃時(shí)觀察河沙狀態(tài)，已達(dá)到翻炒流暢的滑利狀態(tài)。迅速將2.6kg的生馬錢子投入鍋中，每隔1min取樣一次，記錄各取樣點(diǎn)的性狀，測(cè)定其水分、馬錢子堿及士的寧的含量。結(jié)果見表2，藥材性狀見圖6。表2制馬錢子檢測(cè)結(jié)果樣品性狀水分/%馬錢子堿/%士的寧/%總灰分%原藥材表面密被灰棕或灰綠色絹狀茸毛，有絲樣光澤。剖面可見淡黃白色胚乳，深灰色11.21.422.342.3180℃3min表面棕灰色或深灰色，質(zhì)堅(jiān)脆，斷面深褐色8.31.272.50-5min表面棕灰色或深灰色，質(zhì)堅(jiān)脆，斷面深褐色8.01.352.422.97min表面棕灰色或深灰色，有焦斑，斷面黑褐色7.81.312.163.010min表面棕灰色或深灰色，部分有裂痕，斷面黑色12.312min表面棕灰色或深灰色，部分有裂痕，斷面黑色5.91.272.271.114min表面棕灰色或深灰色，部分有裂痕，斷面深黑色22.6200℃2min表面棕黃色，質(zhì)硬，斷面暗黃色8.31.072.17-4min表面棕黃色，有裂痕，質(zhì)脆，斷面深棕色7.91.072.05-5min表面棕黃色至棕褐色，有裂痕，質(zhì)脆，斷面深棕色6-6min表面棕褐色，有裂痕，質(zhì)脆，斷面深棕色3-7min表面棕褐色，有裂痕，質(zhì)脆，斷面深棕色9-藥典要求表面棕褐色或深棕色，質(zhì)堅(jiān)脆，平行剖面可見棕褐色或深棕色的胚乳。微有香氣，味極苦≤12.0≥0.80%1.20%～2.20%≤2.0%圖2不同炮制條件下馬錢子堿與士的寧的變化情況圖3180℃不同炒制時(shí)間制馬錢子總灰分的變化情況圖4180℃不同炒制時(shí)間制馬錢子表面及斷面性狀圖5180℃不同炒制時(shí)間制馬錢子表面及斷面性狀圖6200℃不同炒制時(shí)間制馬錢子表面及斷面性狀結(jié)果分析：①馬錢子在180℃條件下炒制時(shí)，斷面顏色在7min后開始發(fā)生顯著變化，由深灰色向深棕色轉(zhuǎn)變，表面顏色在10min后開始由灰褐色向深褐色轉(zhuǎn)變，在8min后大部分馬前子的表面開始出現(xiàn)裂痕。含量變化方面，馬錢子堿的含量呈逐漸下降的趨勢(shì)，但均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，其中14min的含量最低為1.11%。士的寧的含量隨炮制時(shí)間的增加也呈下降趨勢(shì)，至14min后才符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，但此時(shí)表面性狀已開始產(chǎn)生焦斑。②馬錢子在200℃條件下炒至?xí)r，表面2min開始微微鼓起，顏色略微加深，但斷面顏色由原有的深灰色變?yōu)榘迭S色，4min時(shí)表面為棕灰色，斷面深褐色，5min時(shí)表面為深棕色，斷面棕褐色，符合藥典規(guī)定的性狀要求。含量方面，馬錢子堿的含量較原藥材大幅下降，但隨炮制時(shí)間的增加，馬錢子堿的含量變化幅度不大，至7min時(shí)均符合藥典要求，士的寧的含量隨炮制時(shí)間的增加呈下降趨勢(shì)，2min時(shí)已經(jīng)符合藥典規(guī)定。③灰分方面，河砂的凈制對(duì)制馬錢子的灰分影響較大，使用未凈制的輔料會(huì)導(dǎo)致制馬錢子灰分超標(biāo)，因此生產(chǎn)用輔料應(yīng)凈制后使用。（三）檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果1色譜條件HypersilSi02色譜柱((4.6mmX200mm,5,um)，流動(dòng)相【1)正己烷一二氯甲烷-醇一濃氨溶液(47.5:47.5:5:0.35)，流速1mL"min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)254nm。士的寧和馬錢子堿的分離度值大于1.5，定量方法為外標(biāo)工作曲線法。士的寧和馬錢子堿的理論塔板數(shù)分別不低于2500和300002標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取士的寧和馬錢子堿對(duì)照品分別為11.60mg和11.20mg，置25mL容量瓶中，加氯仿至刻度，作為混合對(duì)照品溶液。精密吸取上述對(duì)照品溶液3}5}7}9}11}13拌L，注人液相色譜儀，測(cè)定其峰面積積分值。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。士的寧和馬錢子堿的回歸方程分別為:Y二2116.75X+9.29，r=0.9999和Y=1249.84X+21.35，r=0.999803精密度試驗(yàn)精密吸取上述對(duì)照品溶液1和L，注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算RSD分別為:士的寧1.07%，馬錢子堿0.92%o4重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一樣品試液，分別于2,4,6,8,10,12h進(jìn)行測(cè)定，得士的寧和馬錢子堿的RSD分別為1.82%和2.61%。5穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一樣品試液，分別于2,4,6,8,10,12h進(jìn)行測(cè)定，得士的寧和馬錢子堿的RSD分別為1.82%和2.61%。6回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，取已知含量的炮制品5份，精密稱定，精密加人對(duì)照品適量，按樣品測(cè)定項(xiàng)下方法操作，計(jì)算回收率，結(jié)果士的寧的平均回收率為99.7%RSD=2.0%;馬錢子堿的平均回收率為98.0%}RSD=2.9%a7含量測(cè)定將生品及各炮制品粉末過3號(hào)篩，精密稱取生品及各炮制品各3份，每份約0.07g，分別加濃氨試液SmL,氯仿45mL，超聲波振蕩提取(SOOW,SOHZ)1ho分取氯仿層，用無水硫酸鈉脫水，水浴濃縮，用氯仿定容至25mL，混勻，經(jīng)0.45腳微孔濾膜過濾，備用〔4J。按上述給定的條件測(cè)定，每次進(jìn)樣1和L,測(cè)得峰面積按峰面積外標(biāo)法計(jì)算，求得樣品中士的寧和馬錢子堿的含量，結(jié)果見表馬錢子不同炮制方法樣品平均含量側(cè)定結(jié)果(n=3)樣品士的寧%RSD%馬錢子堿%RSD%生品1.80.860.781.8油品11.2砂燙品1.50.420.551.3尿泡品0.6（四）檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果1古代馬錢子的炮制方法有多種,但沿至現(xiàn)今僅有砂燙、供烤、油炸等方法,目前以砂燙法居多。砂燙或烘烤法的關(guān)鍵是加熱溫度和時(shí)間,一般控制加熱溫度以一℃,至馬錢子表面鼓起,內(nèi)部略變棕黃色,質(zhì)地松脆為度。成品有效成分含量高,毒性降低,容易粉碎,便于生產(chǎn)?！吨袊幍洹分幸?guī)定的砂燙馬錢子炮制方法在現(xiàn)階段是可行的。2馬錢子是毒劇中藥,其毒性主要表現(xiàn)為士的寧的作用,也基本代表馬錢子的藥效,毒性強(qiáng)弱與士的寧的含量成正比關(guān)系。古今炮制目的主要是為去毒,其次因馬錢子多入丸、散,質(zhì)地堅(jiān)硬,很難粉碎,不便制劑,所以炮制后人藥。由于士的寧在高溫條件下易氧化分解,通過加熱泡制可使士的寧含量降低而達(dá)到減毒的目的同時(shí)可使馬錢子質(zhì)地酥脆,而達(dá)到便于脫毛和粉碎的目的。3馬錢子主含的士的寧既是有效成分義是有毒成分,因此通過加熱處理降低士的寧含量以減緩馬錢子毒性似有不妥。炮制應(yīng)以達(dá)到便于粉碎為目的,盡量使士的寧不受損失。只要有效地解決了馬錢子粉碎問題,嚴(yán)格控制其總生物堿和士的寧含量,即可在中成藥生產(chǎn)時(shí)使用帶毛生馬錢子,但臨床應(yīng)用時(shí)必須嚴(yán)格控制,一次服用士的寧的劑量為一毫克,既能達(dá)到治療目的,又不會(huì)引起中毒。但尚須以此為基礎(chǔ)進(jìn)一步研制馬錢子的新型飲片規(guī)格,確保馬錢子應(yīng)用更方便、安全、有效。4本文用正相高效液相色譜法對(duì)馬錢子生品、油炸品、砂燙品、樟、建幫炮制品、改良法炮制品中士的寧和馬錢子堿進(jìn)行了含量測(cè)定,結(jié)果顯示,各炮制品中士的寧和馬錢子堿的含量較生品均有所降低。其中砂燙品和油炸品中含量相差不大。而江西炮制法與改良法炮制品中士的寧和馬錢子堿的含量遠(yuǎn)比上述炮制品中的含量低。其中以醋酸浸品和醋酸浸砂炒品中的含量為最低。藥典規(guī)定馬錢子用量為一,有文獻(xiàn)報(bào)道江西尿泡馬錢子用量可至一且砂燙品和油炸品的炮制是根據(jù)其炮制溫度和炮制品的顏色等外觀變化來觀察其炮制程度的,經(jīng)驗(yàn)性很強(qiáng),質(zhì)量不易控制。江西炮制法與改良法炮制品可根據(jù)炮制時(shí)間的長(zhǎng)短來控制其生物堿含量,安全劑量范圍大,還可人煎劑的醋酸溶液與童便的值大致相當(dāng),均為一,其炮制原理為其中的酸性成分易于與馬錢子中的生物堿結(jié)合形成可溶性的鹽而降低毒性。而醋酸煮馬錢子則因高溫加速生物堿在酸溶液中的溶解而縮短炮制時(shí)間。從中醫(yī)理論上理解,我們認(rèn)為醋酸炮制馬錢子可增強(qiáng)其作用。醋酸味酸、澀,入肝經(jīng),具有收斂、散疲、止痛、解毒等功效。馬錢子也能人肝經(jīng),醋制后可增強(qiáng)其入肝經(jīng)而止痛的功效,它與醋兩者結(jié)合,性味相得,歸經(jīng)相順,既減毒又增之效。醋制品從形、色、氣、味來說,均符合中醫(yī)飲片的特色,有利于入湯劑,醋制品為薄片,顏色米黃,醋味宜人,可克服尿泡的不衛(wèi)生狀況,縮短炮制時(shí)間,簡(jiǎn)化炮制程序。而江西樟幫用滑石粉炒制馬錢子,滑石粉性味甘寒,而馬錢子屬溫苦之品,符合中藥炮制的`“反制”理論。且滑石粉比砂子質(zhì)地細(xì)膩,傳熱較慢,用它炒制馬錢子,與藥物接觸大面積大,使藥物受熱均勻。味宜人,可克服尿泡的不衛(wèi)生狀況,縮短炮制時(shí)間,簡(jiǎn)化炮制程序。而江西樟幫用滑石粉炒制馬錢子,滑石粉性味甘寒,而馬錢子屬溫苦之品,符合中藥炮制的`“反制”理論。且滑石粉比砂子質(zhì)地細(xì)膩,傳熱較慢,用它炒制馬錢子,與藥物接觸大面積大,使藥物受熱均勻。（五）炮制馬錢子生用毒性劇烈，僅供外用。經(jīng)過炮制后，馬錢子的毒性降低，易于粉碎，便于制劑或配入成方應(yīng)用，常供內(nèi)服。1古代炮制李時(shí)珍首先提出“番木鱉用豆腐制過用之良”?！侗静輩R言》中亦有用豆腐炮制馬錢子的記載，目的都是借助豆腐以解毒。明代《魯府秘方》中“用牛油炸黃色”，這是油炸馬錢子的原始。清代《良朋匯集》中“用香油(炸)待浮起取出，乘熱去皮為末”，是香油炸馬錢子的最早記載。此后《串雅補(bǔ)》對(duì)油炸馬錢子的內(nèi)在質(zhì)量進(jìn)一步提出要求，即“以打碎黃色為度，如黑色則過于火候，失藥之靈性矣”。清代《外科證治全生集》有“水浸半月，入鍋煮數(shù)滾，透心黑脆，再用細(xì)土拌炒，入盆中拌，餐一夜，取鱉去土，磨粉入藥”的復(fù)制法，但此法使馬錢子“氣味散失”大部分，且操作復(fù)雜。清代《得配本草》還有將馬錢子“水磨切片，炒研，或醋、或蜜(制)”的炮制方法。對(duì)于馬錢子去皮毛的記載首見于明代《壽世保元》“去殼莢”。清代《外科大成》載“刮去殼”?！洞叛a(bǔ)》有“水浸脹，刮去皮毛”或“用甘草水煮脹去皮毛”等記載?！陡菅伦鹕珪诽岢觥俺唇谷ッ薄！侗静菥V目拾遺》中則用“黃土炒，焦黃為度，石臼中搗磨，用細(xì)篩篩去皮毛”，認(rèn)為馬錢子炒焦或炸焦后，去皮毛較容易。卜科證治全生集》用“水浸半月，入鍋煮數(shù)滾，再浸熱湯中數(shù)日，刮去皮心”。去毛的目的都是為了凈化藥材，未見“毛毒性大”的記載。2現(xiàn)代炮制現(xiàn)代對(duì)馬錢子的炮制除保留了古代的豆腐制、油炸、土炒、去毛等炮制方法外，又增加了許多新的炮制方法。熊氏〔5〕等提到可采用砂燙法、甘草制法、童便制法炮制馬錢子。董氏〔6，等認(rèn)為砂燙法、油炸法等費(fèi)工費(fèi)時(shí)，不適宜大批量生產(chǎn)，應(yīng)采用炒藥機(jī)清炒法炮制馬錢子收到良好效果;龔氏〔7〕等認(rèn)為尿泡馬錢子操作復(fù)雜，建議用醋酸代替尿泡，既可以大大縮短時(shí)間，又可以除去尿泡馬錢子的不衛(wèi)生缺點(diǎn)。楊氏〔8l等提出綠豆煮法炮制馬錢子，姜氏〔s1等亦提出將凈馬錢子與綠豆用清水浸泡，煮沸后再用文火煮，并烘干的炮制法。潘氏〔tol等提到用遠(yuǎn)紅外烘箱烤模擬砂燙馬錢子的溫度烘8分鐘，有受熱均勻、操作安全的優(yōu)點(diǎn)?，F(xiàn)在應(yīng)用較多的為砂燙法和油炸法。尤以砂燙法居多?！吨腥A人民共和國藥典》1995年版收載有生馬錢子、砂燙馬錢子和馬錢子粉。駱氏〔of對(duì)砂燙馬錢子作深入的探討，認(rèn)為:砂燙時(shí)可聞及馬錢子的爆裂聲;嗅到豆香氣;外觀鼓起;表皮絨毛失去光澤，顯棕褐或灰褐色，胚乳內(nèi)面呈淺褐色，或有小泡鼓起;剪開胚乳其斷面無白色，而呈淺黃色。這樣來判定馬錢子砂燙的“度”較客觀而全面，且易掌握。3性味歸經(jīng)馬錢子味苦，性溫，有大毒，入肝、脾經(jīng)。對(duì)于馬錢子的藥性是寒性還是溫存在很大爭(zhēng)議?！侗静菥V目。卷十八》載其“苦、寒”?！侗静菰肌芬嘣啤拔逗?。以后歷代本草學(xué)者、醫(yī)家大多遵循這一觀點(diǎn)，認(rèn)為馬錢子性寒。編教材《中藥學(xué)》(6版)，國家中醫(yī)藥管理局負(fù)責(zé)，宋立人主編的《中華本草》(1999年版)亦認(rèn)為馬錢子“味苦，性寒”。但《中華人民共和國藥典》(1995年版)將其性味由原來的苦寒改為苦溫。沙氏〔1z7從藥物性能、中毒反應(yīng)、現(xiàn)代藥理作用等方面論述馬錢子應(yīng)為苦溫而不是苦寒。唐氏〔13，亦從主治病的性質(zhì)、配伍應(yīng)用、中毒解救等角度探討該藥為溫性。中醫(yī)藥學(xué)高級(jí)叢書《中藥學(xué)》(2000年版，高學(xué)敏主編)載其“味苦，性溫”。對(duì)于馬錢子毒性的認(rèn)識(shí)經(jīng)歷了一個(gè)從“無毒”到“有毒”到“大毒”的過程?！侗静菥V目》曰“無毒”?！侗静輩R言》言其“有毒”?！侗静菰肌氛撈洹拔犊?、寒，有大毒”“鳥中其毒，則麻木搐急而斃;狗中其毒，則苦痛斷腸而斃。若誤服之，令人四肢拘攣”?！夺t(yī)學(xué)衷中參西錄》亦提出“其毒甚烈…開通經(jīng)絡(luò)，透達(dá)關(guān)節(jié)之力，實(shí)遠(yuǎn)勝于它藥也”。以后的本草學(xué)者和醫(yī)家都認(rèn)同馬錢子“大毒”這一觀點(diǎn)。三、馬錢子HPLC指紋圖譜的研究（一）儀器、試劑和樣品1儀器Surveyor高效液相色譜儀，二極管陣列工作站:Xcalibur(win2000操作系統(tǒng));色譜柱:KromasilKR100-5C18}5um}萬分之一電子天平(梅特勒公司);超聲波清洗脫氣機(jī)(ModelC3860)o(PDA)檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器;250X4.6mm(LabAlliance);2試劑甲醇(色譜純，廊坊興科化工有限公司);乙睛(色譜純，天津大學(xué)科威公司);冰醋酸(分析純，天津市文達(dá)稀貴試劑廠);濃鹽酸(36-38%}v/v)(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠);濃氨水(25-28%)(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠);三乙胺(分析純，天津大學(xué)科威公司);二次重蒸餾水。3藥材和對(duì)照品馬錢子藥材(粉末):10批次，藥廠提供。批號(hào)為:y302-1(炙)，y302-2(生)，y302-3(炙)，y302-4(炙)，y302-5(炙)，y302-6(炙)，y302-7(炙)，y302-8(炙)，y302-9(炙)，y302-10(炙)4對(duì)照品馬錢子堿購自中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)的寧購自中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):11070-2003060（二）實(shí)驗(yàn)方法1對(duì)照品溶液的制備士的寧對(duì)照品溶液精密稱定2.4mg士的寧對(duì)照品至lOml量瓶中，加甲醇超聲使溶解，冷卻，加甲醇至刻度，作為士的寧對(duì)照品溶液(濃度0.24mg/ml)o馬錢子堿對(duì)照品溶液精密稱定2.6mg馬錢子堿對(duì)照品至lOml量瓶中，加甲醇超聲使溶解，冷卻，加甲醇至刻度(濃度0.26mg/ml)o2供試品溶液制備方法的選擇根據(jù)馬錢子中主要含生物堿的性質(zhì)，選取文獻(xiàn)中報(bào)道較多的六種提取方法。取批號(hào)y302-1馬錢子藥材，采用不同的溶劑和提取方法制備馬錢子供試品溶液，具體方法如下:從100g馬錢子粉末中稱定1.35g，置于100m1量瓶中，按表2-1中的方法加入提取溶劑，進(jìn)行提取操作，過濾取濾液，收集于50ml量瓶中，加入相應(yīng)提取溶劑補(bǔ)足至刻度，過0.45um濾膜，分別得供試品溶液1,2,3,4,5,序號(hào)提取溶劑提取方式方法1甲醇一濃氨水(20:3),50m1超聲波震蕩30min方法2甲醇一濃氨水(20:3),50m1冰箱5℃冷浸24h方法3濃氨水4ml浸潤(rùn)，氯仿46m1超聲波震蕩30min3色譜條件的選擇取3.2.2中方法1制備的供試品溶液，在檢測(cè)波長(zhǎng)254nm下，進(jìn)樣量10時(shí)，流速為1.Om1/min，選用不同比例的甲醇一水、甲醇一水·三乙胺、甲醇一水一三乙胺一乙酸、乙睛一水一三乙胺一乙酸作為流動(dòng)相，采用等度洗脫進(jìn)行試驗(yàn)，確定流動(dòng)相組分。4流速的選擇當(dāng)其他條件相同時(shí)，在流速為lml/min和0.6m1/min的色譜條件下，考察流速對(duì)色譜圖的影響，選擇適當(dāng)?shù)牧魉贄l件。5檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇用PDA檢測(cè)器在200^-400nm范圍內(nèi)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，選取指紋圖譜能有最好整體效果的檢測(cè)波長(zhǎng)。6色譜柱的選擇選用其他兩根不同品牌的色譜柱,比較不同色譜柱的分離效果。7共有峰的確定取批次樣品同法制備供試品溶液,測(cè)定每批次的色譜圖,計(jì)算共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積,確定共有峰。8方法學(xué)驗(yàn)證取批號(hào)y302-1馬錢子藥材，根據(jù)2.2.2確定的供試液制備方法制備供試品溶液，進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。9精密度試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液10u1，連續(xù)進(jìn)樣5次，計(jì)算各峰相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)。由以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果看出，采用此種實(shí)驗(yàn)方法建立馬錢子指紋圖譜，相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的精密度、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性均表現(xiàn)良好，所有峰的RSD<3%符合《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)))的規(guī)定。但和相對(duì)保留時(shí)間相比，相對(duì)峰面積的精密度、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性表現(xiàn)不是很理想，有些小峰的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較大。這是由多方面的原因造成的，由于梯度洗脫，基線不平，對(duì)于小峰影響較大，因此相對(duì)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差增大;檢測(cè)器的噪音也可能對(duì)一些小峰的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差有不利影響;另外，由于色譜柱的連續(xù)使用，其中可能殘留的雜質(zhì)在清洗時(shí)未能完全除去，影響到了峰形，積分時(shí)間影響了峰面積，也會(huì)造成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的增大;柱溫的影響也需進(jìn)一步考察。小結(jié)本章探討了馬錢子藥材HrLe指紋圖譜研究過程中所涉及的多方面問題。主要包括:藥材供試品溶液的制備、色譜分離條件的優(yōu)化、共有峰的標(biāo)定、指紋圖譜的方法學(xué)驗(yàn)證、有效成分的含量測(cè)定、to批馬錢子藥材的相似度評(píng)價(jià)。通過比較不同提取方法選取色譜峰多，馬錢子堿，士的寧含量高的提取方法，確定以甲醇一水一濃鹽酸(so:so:1}為提取溶劑，超聲波震蕩30min為馬錢子藥材供試品溶液的制備方法。通過比較不同的流動(dòng)相、流速、檢測(cè)波長(zhǎng)、色譜柱，確立了馬錢子藥材HPLC指紋圖譜的色譜條件為:KromasilKR100-SC18色譜柱，流速lml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，流動(dòng)相為乙睛(B):0.2%三乙胺-0.2%乙酸(^)梯度洗脫(v/v):Omin時(shí)8%:92%}30min時(shí)17%:83%}60min時(shí)60%:40%。通過10批藥材檢測(cè)結(jié)果標(biāo)定具有代表性的12個(gè)峰作為共有峰，建立指紋圖譜。通過方法學(xué)驗(yàn)證，證明該方法精密度，穩(wěn)定性，重現(xiàn)性較好，RSD均小于3%。通過相似度評(píng)價(jià)，比較了10批馬錢子藥材的質(zhì)量，藥材的相似度均在0.99以上，可見質(zhì)量很均一，穩(wěn)定，符合《中藥注射劑色譜指紋圖譜實(shí)驗(yàn)研究技術(shù)指南》(試行)的規(guī)定。由于本實(shí)驗(yàn)采用了FinniganSurveyor型高效液相色譜儀，Xcalibur色譜工作站，其不具備將液相色譜文件轉(zhuǎn)化成AIA格式文件的功能，所以不能導(dǎo)入到國家藥典委員會(huì)開發(fā)的中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件，故在計(jì)算相似度的時(shí)候遇到了一些困難。本課題在Excel中計(jì)算得出相似度，采用中位數(shù)法得出共有模式，然后分別采用夾角余弦和相關(guān)系數(shù)的算法得出相似度。夾角余弦系數(shù)體現(xiàn)的是一種成比例的相似性關(guān)系，隨著夾角的變小，樣品向量逐漸向標(biāo)準(zhǔn)靠近，相似性增大，反之，相似性小。相關(guān)系數(shù)則表示了距離上的相似性。不同的相似度計(jì)算方法，可以從不同角度反映圖譜的相似情況，可能得到結(jié)論不完全一致，但并不存在矛盾。參考文獻(xiàn):[1]吳皓，蔡寶呂，鄭培新等.炮制對(duì)馬錢子中生物堿的影響，中國中藥雜志，1994,19(5):277.[2]龔千鋒.樟樹中藥炮制全書，南昌:江西科學(xué)技術(shù)出版社，1990,250.[3]牟晨嘩.兒種炮制方法對(duì)馬錢子士的寧含