舒乳消痛口服液澄清工藝研究

舒乳消痛口服液澄清工藝研究

舒乳止痛口服由雞血藤、白芍、丹參、當(dāng)歸、王不留行、土黃酮、三棱、白術(shù)和莪術(shù)組成。這個(gè)處方是湯劑。該處方經(jīng)過(guò)多年的臨床應(yīng)用，對(duì)乳痛和乳房增生有迅速有效的治療作用。為了臨床服用方便,減少服用量,根據(jù)本方特點(diǎn),將湯劑改為口服液,并對(duì)傳統(tǒng)的水提醇沉工藝進(jìn)行了優(yōu)選(另文報(bào)道),但水醇法生產(chǎn)成本高,安全性差,甲殼素類澄清劑是近年來(lái)出現(xiàn)的新型絮凝劑,用于中藥制劑的除雜已有報(bào)道[1.2],因其資源豐富,成本低,應(yīng)用方便,越來(lái)越受到人們的重視?，F(xiàn)將殼聚糖作為澄清劑對(duì)舒乳消痛口服液的除雜工藝進(jìn)行研究,從有效成份入手,選擇總固型物、正丁醇浸出物、芍藥苷含量為指標(biāo)進(jìn)行了全面考查,并與優(yōu)選過(guò)的醇沉工藝進(jìn)行了比較。1藥材、藥品與試劑島津LC-10A高效液相色譜儀(日本);WDL-95色譜工作站(中科院大連化學(xué)物理研究所);梅特勒-托利多AB204-N電子天平;藥材購(gòu)自甘肅省醫(yī)藥公司,經(jīng)鑒定符合中國(guó)藥典2000年版一部規(guī)定;芍藥苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):0736-9811);殼聚糖(甘肅省藥品檢驗(yàn)所提供);甲醇(色譜純,天津市化學(xué)試劑二廠);正丁醇(分析純,天津市化學(xué)試劑一廠)。2方法和結(jié)果2.1藥渣和藥渣合并按5副處方量稱取當(dāng)歸、白術(shù)、莪術(shù)等6味藥提取揮發(fā)油,按5副處方量稱取其余藥材與提取揮發(fā)油后藥渣合并,加水4000ml浸泡0.5h,煎煮1h,過(guò)濾,藥渣再加3200ml水,煎煮1h,濾液合并,放置過(guò)夜,過(guò)濾,藥液待用。2.2殼聚糖澄清劑的加入量取相當(dāng)于藥材180g的藥液4份,分別濃縮至藥材:藥液為1∶1,1∶2,1∶3,1∶4,再分別均分為6份,水浴至70℃以上,按表1加入1%殼聚糖醋酸溶液(用1%的醋酸溶液浸泡殼聚糖使成膠體溶液),保溫20min,同時(shí)攪拌,放置過(guò)夜。以醇沉上清液為陽(yáng)性對(duì)照,水煎液為陰性對(duì)照。從結(jié)果可見(jiàn),殼聚糖澄清劑在藥液中的加入量與藥液所含的藥材量有關(guān),且隨著藥液的密度減小,需加入的殼聚糖量有增大的趨勢(shì)。將判斷為“+”的樣品過(guò)濾,濃縮定容至50ml待測(cè)。2.3乙醇濃縮定容液取相當(dāng)于30g藥材的藥液1份,濃縮至藥材∶藥液為1∶1.5時(shí),加入乙醇,使含醇量達(dá)到70%,冷藏24h,濾過(guò),回收乙醇,濃縮定容至50ml。2.4蒸發(fā)金屬的制備精密吸取定容后的藥液15ml,置干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,水浴蒸干,烘箱105℃恒溫1.5h,置干燥器中冷卻20min,迅速稱重,計(jì)算總固型物。2.5正丁醇浸出物的制備精取定容后的藥液20ml,用正丁醇(20,20,15,15ml)萃取4次,合并正丁醇液,置干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,水浴揮干,烘箱105℃恒溫1.5h,置干燥器中冷卻20min,迅速稱重,計(jì)算正丁醇浸出物。2.6方法的線性范圍與準(zhǔn)確度(1)HPLC色譜條件Shim-packCLC?ODS柱;流動(dòng)相:甲醇?水(45∶55);流速:1ml·min-1;紫外檢測(cè)波長(zhǎng):230nm;檢測(cè)靈敏度0.1AUFS;柱溫:室溫;理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低于3500。(2)線性關(guān)系取芍藥苷對(duì)照品,加甲醇制成320μg·ml-1的對(duì)照品溶液,再分別精密吸取0.5,0.75,1,1.5,2ml至10ml容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度。取10μl進(jìn)樣,記錄峰面積,以峰面積Y對(duì)芍藥苷濃度X作線性回歸,得回歸方程Y=2590X-10249,r=0.9995,表明濃度在16～64μg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。(3)回收率取已知含量的樣品溶液2ml(n=5),分別精密加入適量對(duì)照品,用蒸餾水定容至5ml,按下述(5)測(cè)定方法中同法處理,測(cè)定,平均回收率為101.2%,RSD1.91%。(4)精密度同一對(duì)照品溶液重復(fù)測(cè)定,計(jì)算芍藥苷峰面積的RSD,日內(nèi)RSD為0.25%(n=5),日間RSD為2.46%(n=5)。(5)測(cè)定方法取上述定容后的藥液5ml,正丁醇萃取4次,合并正丁醇液,水浴揮去溶劑,殘?jiān)蛹状既芙?濾入25ml容量瓶中,定容至刻度,搖勻,再精密量取1ml于5ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,進(jìn)樣10μl。2.7不同濃縮比例的藥材中藥結(jié)果見(jiàn)表2。將表2結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,總固型物、正丁醇浸出物、芍藥苷含量與藥液的濃縮比例有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)系,方程如下:Y1=0.1273lnX+0.8605,r=0.933;Y2=0.007X+0.088,r=0.720;Y3=86.188lnX+501.71,r=0.864。其中X為藥液的濃縮比例,為便于計(jì)算,取藥液∶藥材值分別為1,2,3,4;Y1為總固型物,Y2為正丁醇浸出物,Y3為芍藥苷含量。從其相關(guān)系數(shù)看,總固型物的保留量與X的關(guān)系最顯著、芍藥苷含量次之,正丁醇浸出物再次之,但均通過(guò)了0.01的信度檢驗(yàn),呈顯著的正相關(guān)。即隨著X的增大(藥液密度的降低),三指標(biāo)成份的保留量增加,反之,減少。在同一藥材∶藥液下,能使藥液澄清的最大殼聚糖加入量與最小量比較,使總固型物平均損失5.50%,正丁醇浸出物平均降低10.29%,芍藥苷含量平均減少6.86%。因此,選擇藥材∶藥液為1∶4,殼聚糖加入量占藥材總量的0.6%(W/W)時(shí),能使藥液澄清,又使有效成份的保留量相對(duì)最大,為最佳絮凝工藝。3殼聚糖除雜與安全性的比較從以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,確定舒乳消痛口服液的最佳絮凝工藝為將按2.1制備工藝制得的藥液濃縮至藥材∶藥液為1∶4,在70℃以上,按藥材重量的0.6%(以殼聚糖計(jì)),加入已泡好的1%的殼聚糖醋酸溶液,邊加邊攪拌,保溫20min,放置24h后,進(jìn)行過(guò)濾、濃縮處理。使用殼聚糖澄清劑用于舒乳消痛口服液的除雜工藝,可使水浸提液澄清,去除雜質(zhì),保留有效成份;而且具有縮短生產(chǎn)周期,降低成本,安全性高的特點(diǎn)。與醇沉工藝比較,各有效成份的保留比例存在一定的差別,總固型物量高于醇沉,正丁醇浸出物又較之略低,而水溶性相對(duì)較大的芍藥苷含量指標(biāo)差別不大。文獻(xiàn)報(bào)道殼聚糖除雜較醇沉能明顯提高多糖和有機(jī)酸的含量,但對(duì)水溶性較小的成份有所影響。因此,對(duì)舒乳消痛口服液使用殼聚糖澄清劑能提高有效成份的總保留量,但對(duì)一些水溶性較小的皂苷成份可能損失較醇沉略大。哪種更有利于臨床治療效果的提高,尚有待于更進(jìn)一步的試驗(yàn)說(shuō)明。舒乳消痛口服液水浸提液的pH為4.4,適