一種利用綠僵菌降低農(nóng)藥殘留和聯(lián)合殺蟲的方法與流程

一種利用菌降農(nóng)藥殘留合殺的方與流本發(fā)明屬于生物復(fù)和害蟲防治領(lǐng)，具體涉及用綠菌來降低化學(xué)農(nóng)藥留的同時發(fā)揮聯(lián)合制害蟲蟲口密度方法。背技：目前，化學(xué)農(nóng)藥然是世界各國使的主要殺蟲劑，由于化學(xué)農(nóng)藥的三“”問題（農(nóng)藥殘留害蟲抗藥、害蟲生猖獗），世界國都在努力使用生農(nóng)藥，其中，真菌物農(nóng)藥主要從害體表入侵，防治害蟲種類多，目前用呈快速增長趨勢然而，真菌殺蟲的殺蟲速度還不人意，特別是蟲口度過大時，真菌殺劑雖然能夠使害逐漸死亡，但在蟲死亡過程中，其農(nóng)作物的危害還在續(xù)，導(dǎo)致農(nóng)作物收。為減少農(nóng)作損失，人們不得不害蟲蟲口密度大時應(yīng)用化學(xué)農(nóng)藥防，也有將化學(xué)農(nóng)和生物農(nóng)藥混合使，這樣可在一定程上減少化學(xué)農(nóng)藥用量，如：目前有將白僵菌和有機(jī)類農(nóng)藥混合后應(yīng)用農(nóng)作物、林業(yè)和場的蝗蟲防治。但是，該合使用方法仍有很多問題：首化學(xué)農(nóng)藥的濃度低后不能完全壓高密度的害蟲蟲口第二，化學(xué)農(nóng)藥所成的三“r”問題沒有解決；三，有些農(nóng)藥與僵菌等殺蟲真菌殺蟲劑不相，會導(dǎo)致真菌死，實際上起不到菌生物防治作用。本專利申請的前研究發(fā)現(xiàn)，有些僵菌能夠分解化農(nóng)藥，因此發(fā)明了種先用化學(xué)農(nóng)藥降蟲口密度，后用僵菌降低農(nóng)藥殘，同時，用綠僵菌死具有抗藥性的害，由于真菌能夠土壤中定殖，因可持續(xù)將害蟲蟲口制在較低的范圍，而可減少化學(xué)農(nóng)的施用頻度，降害蟲防治成本。技實要素：為了解決化學(xué)農(nóng)存在的三“r”問題（農(nóng)藥殘、害蟲抗藥、害再生猖獗），本發(fā)明提一種利用綠僵菌低農(nóng)藥殘留和聯(lián)殺蟲的方法。一種利用綠僵菌低農(nóng)藥殘留和聯(lián)殺蟲的操作步驟下：（1）菌種活化將綠僵菌接種到sday斜面養(yǎng)基中，溫度20-35℃培養(yǎng)8-16天，到斜面菌種；（2）擴(kuò)大培養(yǎng)6692將所述斜面菌種種到sdy液體培養(yǎng)基中，支斜面菌種接種300-1000ml的液體培養(yǎng)基，溫20-30℃、轉(zhuǎn)速110-250rpm/分鐘條下?lián)u瓶培養(yǎng)3-5天；按照1-10%的體積量比（v/w）接種到小麥固培養(yǎng)基、或大米固培養(yǎng)基、或麥麩固體培養(yǎng)基或谷糠固體培養(yǎng)中，20-35℃培養(yǎng)培養(yǎng)8-16天，到擴(kuò)大培養(yǎng)物；（3）收集孢子將擴(kuò)大培養(yǎng)物-50-40℃干燥，用收孢機(jī)取孢子；用含0.05%吐溫的將孢子配制成濃度1×10-1×10個孢子/ml的綠僵菌溶液；（4）化學(xué)農(nóng)藥殺和綠僵菌聯(lián)合處在害蟲爆發(fā)的農(nóng)，根據(jù)化學(xué)農(nóng)藥用劑量說明，將學(xué)農(nóng)藥均勻噴灑在蟲爆發(fā)的植物上，18-60h；在植物上噴灑所綠僵菌溶液，噴灑為每hm灑30-600l；噴灑化學(xué)農(nóng)藥一，農(nóng)殘降低80%及以上；合防治的田地中藥蟲的產(chǎn)生和害蟲再生猖獗的率降低90%及以上。步驟（1）中，所sday培養(yǎng)基配方為：40g葡萄糖10g蛋白胨、10g酵母浸粉和15g瓊脂，加至1000ml。步驟（1）中，所pda培養(yǎng)基配方為：200g去皮馬薯、20g葡萄糖15g瓊脂，加水至1000ml步驟（2）中，按量比1：0.2-1.0將小麥、大米、或麥麩、或糠加水浸泡0.5小時，常規(guī)壓滅菌，得到小固體培養(yǎng)基、或大固體培養(yǎng)基、或麩固體培養(yǎng)基、谷糠固體培養(yǎng)基另一種利用綠僵降低農(nóng)藥殘留和合殺蟲的操作步如下：（1）菌種活化將綠僵菌接種到pda斜培養(yǎng)基中，溫20-35℃、培養(yǎng)8-16天得到斜面菌種；（2）擴(kuò)大培養(yǎng)將所述斜面菌種種到pdb培養(yǎng)基中，每支面菌種接種到300-1000ml的液體培養(yǎng)基，溫度20-℃、轉(zhuǎn)速110-250rpm/分鐘件下?lián)u瓶培養(yǎng)3-5天；按照1-10%的體積比v/v）接種到sdy或pdb液培養(yǎng)基中，于溫20-30℃、在轉(zhuǎn)速為110-250rpm/分的搖床中或在通量為體積比1:1（v/v的發(fā)酵罐中培養(yǎng)5-12天，者，得到液體培物；（3）化學(xué)農(nóng)藥殺和綠僵菌聯(lián)合處22在害蟲爆發(fā)的農(nóng)，根據(jù)化學(xué)農(nóng)藥用劑量說明，將學(xué)農(nóng)藥均勻噴灑在蟲爆發(fā)的植物上，18-60h時；將所述液體培養(yǎng)勻漿稀釋50-500倍均噴灑到噴灑過化學(xué)農(nóng)的植物上，噴灑為50-800l/hm。噴灑化學(xué)農(nóng)藥一，農(nóng)殘降低80%及以上；合防治的田地中藥蟲的產(chǎn)生和害蟲再生猖獗的率降低90%及以上。所述的綠僵菌metarhizium）可以是金龜綠僵菌（m.anisopliae）、羅伯綠僵菌(m.robberstii)、蝗僵菌（）或黃綠僵菌（）綠僵菌屬真菌。步驟（1）中，所sdy液體培養(yǎng)基配方為：萄糖40g、酵母浸粉10g、蛋白胨10g加水至1000ml步驟（1）中，所pdb培養(yǎng)基配方為：去皮鈴薯200g、葡萄糖20.0g加水至1000ml。本發(fā)明的有益技效果體現(xiàn)在下述個方面：1.本發(fā)明采用噴化學(xué)農(nóng)藥，可速降低蟲口，將害的危害降低到最點。同時，本發(fā)明發(fā)有些綠僵菌可以效降解化學(xué)農(nóng)藥因而，在化學(xué)農(nóng)藥蟲后及時施用綠僵，降解化學(xué)農(nóng)藥避免農(nóng)藥殘留。發(fā)明的綠僵菌不僅以有效降解化學(xué)農(nóng)，更主要的是可殺蟲，特別是可有抗藥的害蟲殺死從而避免了抗藥害的產(chǎn)生以及害蟲生猖獗。2.本發(fā)明既利了化學(xué)農(nóng)藥的優(yōu)殺蟲活性，又避免三“r”問題，其效果超過目前任何所有蟲防治策略。首，優(yōu)于將化學(xué)農(nóng)與綠僵菌混合噴灑方法，因為該方法能解決農(nóng)殘問題第二，優(yōu)于噴灑學(xué)農(nóng)藥后用芽孢桿等微生物降低農(nóng)殘方法，因為該方不能解決抗藥蟲產(chǎn)生以及害蟲再生獗的問題。3.由于綠僵菌以在環(huán)境中自行存和繁殖，因此可續(xù)控制害蟲，降化學(xué)農(nóng)藥的施用頻度并持續(xù)降低環(huán)境藥污染，修復(fù)污土地，降低害蟲防成本，提高農(nóng)林產(chǎn)質(zhì)量。具體實施方式下面結(jié)合實施例對發(fā)明作進(jìn)一步述。實施例1一種利用綠僵菌低農(nóng)藥殘留和聯(lián)殺蟲的操作步驟下：1.1菌種活化662662將金龜子綠僵菌（）接種到sday斜面培養(yǎng)上，溫度20℃培養(yǎng)8天，得到斜面菌。sday培養(yǎng)基配為：40g葡萄糖、10g蛋白、10g酵母浸粉和15g瓊脂，加水至1000ml。1.2擴(kuò)大培養(yǎng)將所述斜面菌種種到sdy液體培養(yǎng)基中，支斜面菌種接種300ml液體培養(yǎng)基，于三角瓶在20℃、110rpm/分鐘搖培養(yǎng)3天，然后，按照1%體積重量比（v/w）接種小麥固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。小麥預(yù)按重量比1：0.2加水浸泡0.5小時，規(guī)高壓滅菌；sdy液體培養(yǎng)基即葡萄糖40g、酵母浸粉10g及蛋白10g加水至1000ml。1.3收集孢子接種到小麥培養(yǎng)中繼續(xù)培養(yǎng)8天，將小麥養(yǎng)物在-50℃干燥，然用收孢機(jī)收取孢子。用含0.05%溫的水將孢子配成濃度1×10個孢子/ml的綠僵菌溶液。1.4化學(xué)農(nóng)藥殺和綠僵菌聯(lián)合處理在害蟲爆發(fā)的農(nóng)，根據(jù)化學(xué)農(nóng)藥用劑量說明，將學(xué)農(nóng)藥均勻噴灑在蟲爆發(fā)的植物上，18h，將濃度1×10個孢子/ml的綠僵菌溶液均勻噴灑植物上，每hm噴灑30l。噴農(nóng)藥一周后，殘降低80%；聯(lián)合防治的地中抗藥蟲的產(chǎn)和害蟲再生猖獗的幾率降低90%實施例2一種利用綠僵菌低農(nóng)藥殘留和聯(lián)殺蟲的操作步驟下：2.1菌種活化將羅伯茨綠僵(m.robberstii)接種到sday斜面養(yǎng)基中，在35℃培養(yǎng)16天。sday培養(yǎng)基配為：40g葡萄糖，10g蛋白，10g酵母浸粉和15g瓊脂，加水至1000ml。2.2擴(kuò)大培養(yǎng)將上述的活化的僵菌斜面菌種接到sdy液體培養(yǎng)基中，每支斜面種接種到1000ml液體養(yǎng)基，于三角瓶在30℃、250rpm/分鐘搖瓶培養(yǎng)5天，然992992后，按照10%體重量比（v/w）接種到大米體培養(yǎng)基基中進(jìn)行養(yǎng)。大米預(yù)先按重量比1：1.0加浸泡12小時后規(guī)高壓滅菌。2.3收集孢子接種到小麥培養(yǎng)后繼續(xù)培養(yǎng)16天，將小麥培物在40℃干燥，然后用收機(jī)收取孢子。用0.05%吐溫的水將孢子配成濃度1×10個孢子/ml的綠僵菌溶液。2.4化學(xué)農(nóng)藥殺和綠僵菌聯(lián)合處理在害蟲爆發(fā)的農(nóng)，根據(jù)化學(xué)農(nóng)藥用劑量說明，將學(xué)農(nóng)藥均勻噴灑在蟲爆發(fā)的植物上，60h，將濃度為1×10個孢子/ml的綠僵菌溶液均勻噴于植物上，每hm噴灑600l。噴農(nóng)藥一周后農(nóng)降低90%；聯(lián)合防治的田中抗藥蟲的產(chǎn)生害蟲再生猖獗的幾率降低98%實施例3一種利用綠僵菌低農(nóng)藥殘留和聯(lián)殺蟲的操作步驟下：3.1菌種活化將黃綠綠僵菌）種到pda斜面培養(yǎng)基中在30℃培養(yǎng)12天。pda斜面培養(yǎng)基方為：200g去皮馬鈴薯，20g葡糖和15g瓊脂，水至1000ml。3.2擴(kuò)大培養(yǎng)將上述的活化的綠綠僵菌斜面菌接種到pdb液體培養(yǎng)基中，每支面菌種接種到600ml液體養(yǎng)基，于三角瓶在25℃、180rpm/分鐘搖瓶培養(yǎng)4天，然后，按照1%積比（v/v）接種到sdy液培養(yǎng)基中，溫度20℃在速為110rpm/分鐘的搖中培養(yǎng)5天，得到液體培物，即降低農(nóng)殘殺蟲的生物制劑。pdb液體培養(yǎng)基方為：去皮馬鈴薯200g及葡萄糖20.0g加水至1000ml。sdy液體培養(yǎng)基方為：葡萄糖40g、酵母浸粉10g及蛋白胨10g加水至1000ml。3.3化學(xué)農(nóng)藥殺和綠僵菌聯(lián)合處理2222對蟲口密度大的蟲首先噴灑化學(xué)藥殺蟲，根據(jù)化農(nóng)藥使用劑量說明將化學(xué)農(nóng)藥均勻噴在害蟲爆發(fā)的植上，待48h，將前面收取的液體養(yǎng)物勻漿后稀釋50倍勻噴灑到噴灑過藥的植物上。液體酵物勻漿稀釋液用量為50l/hm。噴農(nóng)藥一周后農(nóng)降低85%；聯(lián)合防治的田中抗藥蟲的產(chǎn)生害蟲再生猖獗的幾率降低95%實施例4一種利用綠僵菌低農(nóng)藥殘留和聯(lián)殺蟲的操作步驟下：4.1菌種活化將蝗綠僵菌（m.acridum）接到pda斜面培養(yǎng)培，在26℃培養(yǎng)10天。pda斜面培養(yǎng)基方為：200g去皮馬鈴薯，20g葡糖和15g瓊脂，水至1000ml。4.2擴(kuò)大培養(yǎng)將上述的活化的青霉斜面菌種接到pdb液體培養(yǎng)基中，每支斜面種接種到600ml液體培養(yǎng)，于三角瓶中在26℃、200rpm/分搖瓶培養(yǎng)3天，然后，按照10%體比（v/v）接種到sdy液體養(yǎng)基中，溫度30℃在氣量為體積比1:1（v/v的發(fā)酵罐中培養(yǎng)12天，得液體培養(yǎng)物，即于降低農(nóng)殘和殺蟲的生物制劑pdb液體培養(yǎng)基方為：去皮馬鈴薯200g及葡萄糖20.0g加水至1000ml。sdy液體培養(yǎng)基即葡萄糖40g、酵母浸粉10g及蛋白10g加水至1000ml。4.3化學(xué)農(nóng)藥殺和綠僵菌聯(lián)合處理對蟲口密度大的蟲首先噴灑化學(xué)藥殺蟲，根據(jù)化農(nóng)藥使用劑量說明將化學(xué)農(nóng)藥均勻噴在害蟲爆發(fā)的植上，待36h后，將前面收取液體養(yǎng)物勻漿后稀釋500倍，勻噴灑到噴灑過藥的植物上。液體酵物勻漿稀釋液用量為800l/hm。噴農(nóng)藥一周后農(nóng)降低87%；聯(lián)合防治的田中抗藥蟲的產(chǎn)生害蟲再生猖獗的幾率降低96%技特：1.一種利用綠菌降低農(nóng)藥殘留聯(lián)合殺蟲方法，其征在于操作步驟下：6692（1）菌種活化將綠僵菌接種到sday斜面養(yǎng)基中，溫度20-35℃培養(yǎng)8-16天，到斜面菌種；（2）擴(kuò)大培養(yǎng)將所述斜面菌種種到sdy液體培養(yǎng)基中，支斜面菌種接種300-1000ml的液體培養(yǎng)基，溫20-30℃、轉(zhuǎn)速110-250rpm/分鐘條下?lián)u瓶培養(yǎng)3-5天；按照1-10%的體積量比（v/w）接種到小麥固培養(yǎng)基、或大米固培養(yǎng)基、或麥麩固體培養(yǎng)基或谷糠固體培養(yǎng)中，20-35℃培養(yǎng)培養(yǎng)8-16天，到擴(kuò)大培養(yǎng)物；（3）收集孢子將擴(kuò)大培養(yǎng)物-50-40℃干燥，用收孢機(jī)取孢子；用含0.05%吐溫的將孢子配制成濃度1×10-1×10個孢子/ml的綠僵菌溶液；（4）化學(xué)農(nóng)藥殺和綠僵菌聯(lián)合處在害蟲爆發(fā)的農(nóng)，根據(jù)化學(xué)農(nóng)藥用劑量說明，將學(xué)農(nóng)藥均勻噴灑在蟲爆發(fā)的植物上，18-60h；在植物上噴灑所綠僵菌溶液，噴灑為每hm灑30-600l；噴灑化學(xué)農(nóng)藥一，農(nóng)殘降低80%及以上；合防治的田地中藥蟲的產(chǎn)生和害蟲再生猖獗的率降低90%及以上。2.一種利用綠菌降低農(nóng)藥殘留聯(lián)合殺蟲方法，其征在于操作步驟下：（1）菌種活化將綠僵菌接種到pda斜培養(yǎng)基中，溫20-35℃、培養(yǎng)8-16天得到斜面菌種；（2）擴(kuò)大培養(yǎng)將所述斜面菌種種到pdb培養(yǎng)基中，每支面菌種接種到300-1000ml的液體培養(yǎng)基，溫度20-℃、轉(zhuǎn)速110-250rpm/分鐘件下?lián)u瓶培養(yǎng)3-5天；按照1-10%的體積比v/v）接種到sdy或pdb液培養(yǎng)基中，于溫20-30℃、在轉(zhuǎn)速為110-250rpm/分的搖床中或在通量為體積比1:1（v/v的發(fā)酵罐中培養(yǎng)5-12天，到液體培養(yǎng)物；（3）化學(xué)農(nóng)藥殺和綠僵菌聯(lián)合處22在害蟲爆發(fā)的農(nóng)，根據(jù)化學(xué)農(nóng)藥用劑量說明，將學(xué)農(nóng)藥均勻噴灑在蟲爆發(fā)的植物上，18-60h時；將所述液體培養(yǎng)勻漿稀釋50-500倍均噴灑到噴灑過化學(xué)農(nóng)的植物上，噴灑為50-800l/hm；噴灑化學(xué)農(nóng)藥一，農(nóng)殘降低80%及以上；合防治的田地中藥蟲的產(chǎn)生和害蟲再生猖獗的率降低90%及以上。3.根據(jù)權(quán)利要1或2所述的一種利用綠菌降低農(nóng)藥殘留聯(lián)合殺蟲方法，其特征在于：所的綠僵菌（metarhizium）是龜子綠僵菌（m.anisopliae）、伯茨綠僵菌(m.robberstii)、蝗綠僵（）或黃綠綠僵菌（）的一種。4.根據(jù)權(quán)利要1所述的一種利綠僵菌降低農(nóng)藥殘和聯(lián)合殺蟲方法其特征在于：步驟1）中，所述sday培養(yǎng)基方為：40g葡萄糖、10g蛋白胨、10g酵母浸粉和15g瓊，加水至1000ml。5.根據(jù)權(quán)利要1所述的一種利綠僵菌降低農(nóng)藥殘和聯(lián)合殺蟲方法其特征在于：步驟1）中，所述pda培養(yǎng)基配為：200g去皮馬鈴薯、20g葡萄和15g瓊脂，加水1000ml。6.根據(jù)權(quán)利要