中藥對(duì)應(yīng)激小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響

中藥對(duì)應(yīng)激小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響

持續(xù)適應(yīng)可以導(dǎo)致身體功能紊亂，并導(dǎo)致和加重身體疾病的發(fā)生，如病毒感染、自身免疫性疾病和腫瘤。因此,緩解、降低應(yīng)激的不利反應(yīng),對(duì)臨床多種疾病的治療有積極的意義。祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)持續(xù)性應(yīng)激(七情、六淫)的臨床治療效果非常顯著,且多數(shù)補(bǔ)益中藥均有免疫增強(qiáng)作用,為此,本文用補(bǔ)益中藥及其復(fù)方觀察對(duì)應(yīng)激小鼠脾淋巴細(xì)胞受抑的影響及其調(diào)整機(jī)制。1材料和方法1.1時(shí)藥對(duì)應(yīng)激小鼠脾淋巴細(xì)胞胞漿鈣離子的影響動(dòng)物6～8周齡的BALB/c雄性小鼠,由本校醫(yī)學(xué)動(dòng)物部提供,將動(dòng)物隨機(jī)分為對(duì)照組、應(yīng)激模型組、給藥組。束縛性應(yīng)激動(dòng)物模型將小鼠裝入自制圓柱形小筒,后肢固定,禁食水,室溫下24h過夜。中藥菟絲子、川斷、女貞子、枸杞子等藥購(gòu)自北京醫(yī)科大學(xué)第三臨床醫(yī)院,并組成不同復(fù)方:菟絲子、川斷組(簡(jiǎn)稱絲斷);女貞子、枸杞子組(簡(jiǎn)稱貞杞);菟絲子、川斷、女貞子、枸杞子組(簡(jiǎn)稱合劑)。以上復(fù)方按1∶1比例,制成100%水煎劑,4℃保存?zhèn)溆?。灌胃給藥,每只小鼠每日0.4ml(約含0.4g生藥),應(yīng)激小鼠在應(yīng)激前連續(xù)給藥1周,對(duì)照組灌服等量自來水。補(bǔ)益中藥對(duì)應(yīng)激后小鼠脾淋巴細(xì)胞胞漿內(nèi)鈣離子的影響從表2可見應(yīng)激后小鼠脾淋巴細(xì)胞胞漿內(nèi)Ca2+濃度與對(duì)照組比較增加36%(P<0.05),灌服各藥組均可降低細(xì)胞胞漿內(nèi)Ca2+濃度,其中合劑組作用最好,接近正常對(duì)照組水平(P<0.05)。補(bǔ)益中藥對(duì)應(yīng)激后小鼠脾淋巴細(xì)胞膜的流動(dòng)性的影響從表3可見應(yīng)激后小鼠脾淋巴細(xì)胞膜的熒光偏振度(P)明顯降低(P<0.01),提示膜流動(dòng)性增高,而灌服中藥后均可使P值顯著增高(P<0.05),合劑組的P值接近正常對(duì)照組水平(P>0.05)。表明補(bǔ)益中藥對(duì)細(xì)胞膜有保護(hù)作用。合劑對(duì)應(yīng)激后小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖周期的影響對(duì)照組、應(yīng)激組、合劑組各組小鼠脾淋巴細(xì)胞在增殖過程中進(jìn)入S期(DNA合成期)的細(xì)胞百分比分別為13.72±2.23,4.72±0.81及9.76±1.97。G2/M(DNA合成后期,有絲分裂)期分別為4.48±1.44,8.24±1.42及4.74±1.84。G0/G1(DNA合成準(zhǔn)備期)分別為81.08±2.45,87.06±1.53及85.48±2.38。進(jìn)入DNA合成期的細(xì)胞百分比,模型組明顯低于正常對(duì)照組(P<0.05),DNA合成后期及DNA合成準(zhǔn)備期,模型組與對(duì)照組比較相對(duì)增多(P<0.05)。灌服中藥后進(jìn)入DNA合成期細(xì)胞增多,滯留在DNA合成后期及DNA合成準(zhǔn)備期的細(xì)胞相對(duì)減少。合劑組對(duì)應(yīng)激后小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-2活性、IL-2R陽性細(xì)胞的影響對(duì)照組、模型組、合劑組脾淋巴細(xì)胞IL-2活性分別為8.62±0.21,4.81±0.29,6.53±0.36U·ml-1。IL-2R陽性細(xì)胞分別為18.66±2.91,9.39±1.67及13.93±3.01。與對(duì)照組比較模型小鼠脾淋巴細(xì)胞合成的IL-2活性下降,IL-2R陽性細(xì)胞減少(P<0.01),合劑組可促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞IL-2的合成(P<0.05),增加IL-2R陽性細(xì)胞(P<0.01)。3應(yīng)激對(duì)應(yīng)激小鼠免疫細(xì)胞的作用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)應(yīng)激的研究進(jìn)展較深入,偏重于基礎(chǔ)理論的探討,但如何減少和緩解應(yīng)激對(duì)機(jī)體的不利的影響,報(bào)道甚少。祖國(guó)醫(yī)學(xué)根據(jù)“陰平陽秘,精神乃治”的整體治療觀點(diǎn),對(duì)各種應(yīng)激(七情、六淫)所致疾病的治療,采用調(diào)整機(jī)體陰陽失調(diào),多收到較好療效。為更深入、系統(tǒng)探討中醫(yī)藥緩解應(yīng)激、提高免疫功能的作用機(jī)理,本文觀察了補(bǔ)益中藥對(duì)應(yīng)激小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖過程中IL-2,IL-2R、細(xì)胞周期、胞漿內(nèi)鈣離子濃度、細(xì)胞膜流動(dòng)性等的影響。本課題采用束縛性應(yīng)激方法,表明應(yīng)激后小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力下降,胞漿內(nèi)鈣離子濃度增加、IL-2產(chǎn)生的活性降低、IL-2R陽性細(xì)胞表達(dá)減少、細(xì)胞膜流動(dòng)性增強(qiáng),細(xì)胞增殖周期中進(jìn)入S期細(xì)胞減少,滯留于G2/M與G0/G1期的細(xì)胞相對(duì)增多。灌服菟絲子、川斷及女貞子、枸杞子及四藥合劑后可使上述狀況改善,均可恢復(fù)或接近正常對(duì)照組水平。據(jù)報(bào)道菟絲子、川斷、女貞子、枸杞子各藥,對(duì)機(jī)體造血系統(tǒng)、細(xì)胞與體液免疫功能有調(diào)整功能,并有較廣泛的藥理作用。為此本試驗(yàn)選用這兩組藥。試驗(yàn)結(jié)果表明補(bǔ)陽類藥菟絲子、川斷與補(bǔ)陰類藥女貞子、枸杞子兩組藥均可改善對(duì)應(yīng)激小鼠免疫細(xì)胞的影響,而兩組之間無明顯差異,但四藥合劑的作用較強(qiáng),與正常組水平接近。提示中醫(yī)在組方治療應(yīng)激所致疾病時(shí),補(bǔ)陰藥與補(bǔ)陽藥相互配伍,可以提高療效。結(jié)合本試驗(yàn),表明上述補(bǔ)益中藥對(duì)應(yīng)激小鼠免疫細(xì)胞的調(diào)整作用機(jī)理是多環(huán)節(jié),初步認(rèn)為可對(duì)抗應(yīng)激后小鼠淋巴細(xì)胞細(xì)胞胞漿內(nèi)Ca2+亢進(jìn),恢復(fù)細(xì)胞膜流動(dòng)性,增加白細(xì)胞介素-2受體陽性細(xì)胞,提高白細(xì)胞介素-2合成,調(diào)整細(xì)胞增殖周期,從而可緩解和降低應(yīng)激對(duì)機(jī)體的不利反應(yīng)。但應(yīng)激對(duì)免疫細(xì)胞的影響是多方面的,本課題正在作進(jìn)一步的研究。主要試劑RPMI-1640,MTT,DPH等為Sigma公司產(chǎn)品。Fura-2/AM為中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所產(chǎn)品1.2細(xì)胞膜流動(dòng)性測(cè)定小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)參見文獻(xiàn)方法。細(xì)胞胞漿游離鈣的測(cè)定參見文獻(xiàn)方法。淋巴細(xì)胞膜流動(dòng)性測(cè)定參見文獻(xiàn)法。白細(xì)胞介素-2(IL-2)測(cè)定參見文獻(xiàn)方法白細(xì)胞介素-2受體(IL-2R)及細(xì)胞增殖周期測(cè)定參見文獻(xiàn)方法。1.3統(tǒng)計(jì)方法2結(jié)果試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS軟件t檢驗(yàn)法。1.1.11.1.21.1.31.1.41.2.11.2.21.2.31.2.41.2.5灌服中藥后rea誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞增殖變化響從表1可見應(yīng)激后小鼠淋巴細(xì)胞對(duì)ConA誘導(dǎo)的增殖反應(yīng)低下,與對(duì)照組比較明顯下降(P<0.01),灌服中藥后均可提高ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖,其增加百分率分