藍(lán)布正水提物對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用

藍(lán)布正水提物對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用

藍(lán)布正是日本山楂的干燥草地。用完整的草或根插入，味道辛、甜、平坦。藍(lán)布正主治頭暈頭痛,月經(jīng)不調(diào),小腹痛,腎虛頭暈,跌打損傷,風(fēng)濕腰痛,同時(shí)經(jīng)藥理研究表明,具有保護(hù)腦缺血、祛痰平喘作用。尚未見藍(lán)布正降壓作用的報(bào)道。本研究采用大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)灌流模型,探討藍(lán)布正水提物對(duì)離體血管的舒張和可能作用機(jī)理,以便進(jìn)一步研究其是否具有抗高血壓作用。1實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠,雌雄兼用,250～300g,由云南生物制藥有限公司提供。合格證號(hào):SCXK(滇)2005-00010。1.2試劑:u3000e-u-3,5,4,4.2藍(lán)布正水提取物浸膏,課題組制備,濃度為:3g生藥/g,以生理鹽水稀釋成各濃度使用,以下藥物濃度均以生藥量表示。去甲腎上腺素,上海禾豐制藥有限公司,批號(hào):H31021177。Kerbs-Henseleit(KH)液(g·L-1):NaCl6.92,KCl0.35,MgSO4·7H2O0.12,NaHCO32.1,KH2PO40.16,CaCl20.28,葡萄糖2.0。無鈣K-H液為去掉CaCl2后加入EDTA0.0029g·L-1。無鈣高鉀K-H液為無鈣K-H液加入KCl2.98g·L-1,以上試劑均為臨時(shí)配用。離體血管平滑肌槽和BL-420生物機(jī)能系統(tǒng)均為成都泰盟科技有限公司。張力換能器:量程10g。2實(shí)驗(yàn)方法2.1u3000b-400實(shí)驗(yàn)放血處死大鼠后迅速分離胸主動(dòng)脈,置于4℃含飽和氧氣的KH液中,剔除周圍結(jié)締組織后,剪2～3mm長(zhǎng)的血管環(huán)。將血管環(huán)懸掛于經(jīng)37℃預(yù)熱容量為20mL的浴槽內(nèi),一端固定,一端通過張力換能器連接BL-420生物信號(hào)采集系統(tǒng)。在持續(xù)通以氧氣狀態(tài)下,逐漸調(diào)節(jié)前負(fù)荷到1.5g,在37℃下穩(wěn)定1h以上。之后用10～5M的去甲腎上腺素(NA)檢測(cè)血管活性,選取活性強(qiáng)的血管進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。進(jìn)行完1次實(shí)驗(yàn)后,換液3次,穩(wěn)定30min以上,再做下一次實(shí)驗(yàn),同一段血管最多進(jìn)行2次實(shí)驗(yàn)。2.2預(yù)收縮血管環(huán)的開孔加入10～5M的NA刺激血管達(dá)到峰值,累積加入藍(lán)布正水提物(0.3、0.6、0.9、1.2、1.5g·L-1),觀察其對(duì)預(yù)收縮血管環(huán)的舒張作用。對(duì)照組以生理鹽水代替藍(lán)布正等容加入。2.3預(yù)收縮血管環(huán)的測(cè)定加入60mM的KCl刺激血管達(dá)到峰值,累積加入藍(lán)布正水提物(0.3、1、3、10、20、30g·L-1),觀察其對(duì)預(yù)收縮血管環(huán)的舒張作用。對(duì)照組以生理鹽水代替藍(lán)布正等容加入。2.4預(yù)收縮血管環(huán)的制備將主動(dòng)脈環(huán)在無鈣KH液中平衡2h后,換以無Ca2+高K+的KH液平衡20min,使之去極化。然后加入10mM的CaCl2刺激血管達(dá)到峰值,累積加入藍(lán)布正水提物(0.1、0.3、1、3、10、20g·L-1),觀察其對(duì)預(yù)收縮血管環(huán)的舒張作用。對(duì)照組以生理鹽水代替藍(lán)布正等容加入。2.5數(shù)據(jù)處理方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果以(ue0af±s)表示,運(yùn)用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。2組間比較采用t檢驗(yàn),半數(shù)有效濃度(IC50)使用Logit法回歸計(jì)算。3結(jié)果3.1藍(lán)色織物能促進(jìn)血管收縮和擴(kuò)張藍(lán)布正水提物(0.3～1.5g·L-1)能劑量依賴性的抑制NA對(duì)血管的收縮作用,IC50為0.63g·L-1。結(jié)果見圖1。3.2藍(lán)色織物能促進(jìn)血管收縮和擴(kuò)張藍(lán)布正水提物(0.3～30g·L-1)能劑量依賴性的抑制NA對(duì)血管的收縮作用,IC50為5.74g·L-1。結(jié)果見圖2。3.3藍(lán)色織物能促進(jìn)血管收縮和擴(kuò)張藍(lán)布正水提物(0.1～20g·L-1)能劑量依賴性的抑制NA對(duì)血管的收縮作用,IC50為4.60g·L-1。結(jié)果見圖3。4藍(lán)布正在受體操縱性ca2+通道對(duì)受體依賴的抑高血壓是常見的心血管疾病,而血管(尤其是小動(dòng)脈)過分收縮后,會(huì)引起外周阻力的升高,對(duì)高血壓的形成和維持具有重要的意義。因此,許多治療高血壓的藥物主要是通過降低血管平滑肌的張力而發(fā)揮作用的,尤其是鈣通道拮抗劑。細(xì)胞膜上存在兩類鈣通道,一種是電位依賴性Ca2+通道(PDC),可以被高濃度K+激活;另一種為受體操縱性Ca2+通道(ROC),可以被NA激活,激活后不僅引起細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流,還能引起細(xì)胞內(nèi)鈣貯存池的Ca2+釋放。藍(lán)布正水提物能劑量依賴性的抑制NA引起的主動(dòng)脈環(huán)收縮,IC50為0.63g·L-1,說明其對(duì)受體依賴性的Ca2+通道有很明顯的阻斷作用,這可能是其舒張血管的主要機(jī)制。另一方面,藍(lán)布正不僅抑制高K+引起的血管收縮,還能抑制高K+無Ca2+除極化時(shí)外Ca2+依賴性主動(dòng)脈環(huán)收縮,IC50分別為5.74g·L-1和4.60g·L-1。說明藍(lán)布正對(duì)電位依賴性Ca2+通道的作用弱于受體操縱性Ca2+通道,只是在高濃度時(shí)才體現(xiàn)