用全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)小型豬血液生理指標(biāo)

用全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)小型豬血液生理指標(biāo)

國(guó)家“15”科學(xué)研究中心“中國(guó)實(shí)驗(yàn)小型豬資源開(kāi)發(fā)、研究和應(yīng)用”項(xiàng)目計(jì)劃整合中國(guó)主要小型豬的資源。從中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所、廣西農(nóng)業(yè)大學(xué)和貴陽(yáng)中醫(yī)藥大學(xué)聯(lián)合引入貴陽(yáng)小型豬（gxmp）和小群體豬（guzhou微型豬，gzmp）。封閉群由貴州省的小型豬（gzmp）組成，封閉群由小群體組成，其中一些是gzmp。凈化后，形成一個(gè)基本群體，并建立國(guó)家實(shí)驗(yàn)小型豬資源中心（以下簡(jiǎn)稱“中心”）。血液生理指標(biāo)是監(jiān)測(cè)小型豬健康狀況以及反映凈化過(guò)程中生理變化的主要依據(jù),也是小型豬用于人類醫(yī)學(xué)研究的重要基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。本研究檢測(cè)了這3個(gè)小型豬品種引入“中心”前,原群體的血液生理指標(biāo),這些指標(biāo)可以作為群體凈化和飼養(yǎng)環(huán)境發(fā)生變化后,小型豬生理變化的參考,并以此了解凈化及標(biāo)準(zhǔn)化的飼養(yǎng)環(huán)境對(duì)小型豬的影響。通過(guò)3個(gè)小型豬品種之間相應(yīng)指標(biāo)的橫向比較,以及與人類、中國(guó)普通豬種、國(guó)外著名小型豬品種和國(guó)外重要豬品種相應(yīng)指標(biāo)的比較,可以為將來(lái)的研究工作奠定基礎(chǔ)。1數(shù)據(jù)分析和指標(biāo)檢測(cè)方法貴州小型豬46頭(公畜21頭,母畜25頭),于2005年5月底,采自貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所;五指山小型豬近交系45頭(公畜7頭,母畜38頭),于2005年7月初,采自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所;廣西巴馬小型豬56頭(公畜9頭,母畜47頭),于2005年7月底,采自廣西大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院巴馬小型豬保種場(chǎng)。非抗凝血3ml,EDTA抗凝血3ml均通過(guò)前腔靜脈采集。血液生理指標(biāo)共18項(xiàng),包括:白細(xì)胞總數(shù)(WBC,109/L);紅細(xì)胞總數(shù)(RBC,1012/L);血小板總數(shù)(PLT,109/L);中性粒細(xì)胞數(shù)(GR,109/L);中性粒細(xì)胞百分比(GR%,%);單核細(xì)胞數(shù)(MO,109/L);單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(MO%,%);淋巴細(xì)胞數(shù)(LY,109/L);淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(LY%,%);RBC平均容積(MCV,FL);紅細(xì)胞比容(HCT,%);紅細(xì)胞分布寬度(RDW,%);紅細(xì)胞平均血紅蛋白量(MCH,pg);平均RBC血紅蛋白量(MCHC,g/L);血紅蛋白(HGB,g/L);平均血小板容積(MPV,FL);血小板比容(PCT,%);血小板分布寬度(PDW,%)。貴州小型豬血樣送貴州省人民醫(yī)院血常規(guī)檢驗(yàn)科,用ADVIA120全自動(dòng)血球分析儀分析;五指山小型豬近交系血樣送中國(guó)人民解放軍309醫(yī)院,用K-1000血細(xì)胞全自動(dòng)分析儀(日本東亞公司)檢測(cè);巴馬小型豬血樣送廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院,用日本產(chǎn)NIHONKOHDEN血球計(jì)數(shù)儀(MEK-6318K)分析。計(jì)算3個(gè)小型豬品種各指標(biāo)的總?cè)后w、公畜和母畜平均數(shù),并在品種間進(jìn)行方差異質(zhì)性平均數(shù)差異顯著性檢驗(yàn),以總?cè)后w平均數(shù)與人類各指標(biāo)的參考范圍、國(guó)外著名的哥廷根小型豬品種、中國(guó)地方豬品種以及國(guó)內(nèi)外育種中廣泛使用的長(zhǎng)白豬相應(yīng)指標(biāo)進(jìn)行比較。人類參考值來(lái)自309醫(yī)院,哥廷根小型豬數(shù)據(jù)來(lái)源于哥廷根小型豬網(wǎng)站和文獻(xiàn)報(bào)道(Ellegaard等,1995),中國(guó)地方豬品種來(lái)源于文獻(xiàn)中報(bào)道的軍牧1號(hào)(李慕等,2000)和劍河白香豬(邱小田等,2005),國(guó)外優(yōu)良品種來(lái)源于文獻(xiàn)報(bào)道的長(zhǎng)白豬(邱小田等,2005)。2人類、哥廷根小型豬、地方豬的臨床生理指標(biāo)比較GZMP、WZSP和GXMP各項(xiàng)血液生理指標(biāo)的群體平均數(shù)、最大值、最小值和標(biāo)準(zhǔn)差見(jiàn)表1。GZMP和WZSP群體間差異不顯著(P>0.05)的血液生理指標(biāo)有:LY、HGB、PCT和PDW;差異達(dá)到顯著水平(0.01<P<0.05)的指標(biāo)有:RBC、PLT和MO;差異達(dá)到極顯著水平(P<0.01)的指標(biāo)有:WBC、GR、MCV、HCT、RDW、MCH、MCHC和MPV。GZMP和GXMP群體間差異不顯著的指標(biāo)有:GR、LY、RDW、PCT和PDW;差異達(dá)到顯著水平的指標(biāo)有:HCT和HGB;差異達(dá)到極顯著水平的指標(biāo)有:WBC、RBC、PLT、MO、MCV、MCH、MCHC和MPV;WZSP和GXMP群體間差異不顯著的指標(biāo)有:GR、LY、MO、HCT、HGB和PCT;差異達(dá)到顯著水平的指標(biāo)有:MCH;差異達(dá)到極顯著水平的指標(biāo)有:WBC、RBC、PLT、RDW、MCHC、MPV和PDW。GZMP、WZSP和GXMP與人類、哥廷根小型豬、地方豬品種及長(zhǎng)白豬各血液生理指標(biāo)的比較見(jiàn)表2。3個(gè)小型豬品種與人類各血液生理指標(biāo)參考值相比較,處于人類指標(biāo)范圍內(nèi)的有8項(xiàng):GR、GR%、MO、HCT、HGB、MPV、PCT和PDW;比人類最大值高的有5項(xiàng):WBC、RBC、LY%、RDW和MCHC;比人類最小值低的有3項(xiàng):MO%、MCV和MCH;GXMP的PLT和LY,WZSP的MO大于人類的最大值,而其它2個(gè)品種的同一指標(biāo)的處于其范圍內(nèi)。GXMP檢測(cè)結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)比較(王愛(ài)德等,2001),文獻(xiàn)報(bào)道中較本次檢測(cè)結(jié)果高的指標(biāo)有:WBC、PLT和RDW。中國(guó)3個(gè)小型豬品種與哥廷根小型豬相比較,同一血液生理指標(biāo),哥廷根小型豬的MO%、MCV和HCT比3個(gè)小型豬的值都低,且低于人類參考范圍最小值;PLT和LY較3個(gè)小型豬的值都高,且高于人類參考范圍最大值。3個(gè)小型豬品種與國(guó)內(nèi)普通豬品種相比,國(guó)內(nèi)普通豬較小型豬及人類最小值低的指標(biāo)是HGB,較3個(gè)小型豬和人類最大值高的指標(biāo)有WBC、PLT和LY;長(zhǎng)白豬較所有小型豬品種都低及人類最小值低的指標(biāo)有:WBC、RBC、LY、LY%和HGB,沒(méi)有比國(guó)內(nèi)3個(gè)小型豬高的指標(biāo)。3國(guó)內(nèi)外在行業(yè)內(nèi)不同品種間的差異3.13個(gè)小型豬品種的背景資料本研究檢測(cè)了引入“中心”的3個(gè)小型豬品種凈化前的血液生理指標(biāo)。五指山小型豬原產(chǎn)于海南省白沙縣和東方縣,由于這些區(qū)域?qū)儆谄h(yuǎn)山區(qū),交通不便,經(jīng)歷代近親繁育,在當(dāng)時(shí)就已經(jīng)是基因高度純合的近交品種。到20世紀(jì)70年代,五指山小型豬已瀕臨滅絕。1987年,中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所馮書(shū)堂研究員等從海南省五指山地區(qū)將同一窩仔豬中的公母豬各1頭引到北京,經(jīng)過(guò)子配母、全同胞交配和祖孫三代內(nèi)交配的方式進(jìn)行近親繁育,在移地保種獲得成功的基礎(chǔ)上,成功培育出世界首批近交系豬。WZSP被北京解放軍總醫(yī)院、北京口腔醫(yī)院、北京佑安醫(yī)院、北京阜外醫(yī)院、北京同仁醫(yī)院等醫(yī)院、學(xué)校和研究所廣泛用于糖尿病、心血管疾病、口腔疾病、結(jié)膜保存和移植等相關(guān)研究中,并取得很好的研究成果(馮書(shū)堂等,1999)。貴州小型豬的中心產(chǎn)區(qū)在貴州省從江縣。1985年,貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院甘世祥教授從中心產(chǎn)區(qū)引入貴州小型香豬組建基礎(chǔ)群,以小型化、早熟化為育種目標(biāo)進(jìn)行定向選育,1987年,經(jīng)專家鑒定,正式命名為貴州小型豬。貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院通過(guò)與貴州省人民醫(yī)院、貴州省心血管研究所、中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)燒傷研究所以及中國(guó)人民解放軍海軍醫(yī)學(xué)研究所等單位進(jìn)行廣泛合作,為人類心血管系統(tǒng)疾病、燒傷和減壓病等的研究建立了有效的動(dòng)物模型(甘世祥等,2001)。廣西巴馬小型豬原產(chǎn)于廣西壯族自治區(qū)巴馬縣。1987年,廣西大學(xué)王愛(ài)德教授等從原產(chǎn)地引入2頭公豬和14頭母豬組建基礎(chǔ)群,采用群內(nèi)閉封純繁選育及半同胞為主的近交方式進(jìn)行選育,形成了遺傳穩(wěn)定的封閉群,具有“兩頭烏”的毛色特點(diǎn)。到2005年6月底,廣西巴馬小型豬總存欄數(shù)有300多頭,其中封閉群260頭,完成了17世代封閉群的培育。廣西巴馬小型豬廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)研究的多個(gè)領(lǐng)域,例如廣西壯族自治區(qū)藥品檢驗(yàn)所病理室進(jìn)行新藥檢驗(yàn),廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院以其建立心肌梗塞動(dòng)物模型和呼吸系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型,廣西大學(xué)將其作為燒傷病人皮膚敷料的供體,并用于豬瘟疫苗的動(dòng)物模型(王愛(ài)德等,1995)。3.2各指標(biāo)在品種間差異的來(lái)源血液生理指標(biāo)一直作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用于人類醫(yī)學(xué)研究的重要基礎(chǔ)數(shù)據(jù),這些指標(biāo)將成為監(jiān)測(cè)小型豬從貴陽(yáng)和廣西引到北京過(guò)程中健康狀況,以及SPF、恒溫、恒濕封閉環(huán)境中培育過(guò)程個(gè)體生理變化的主要依據(jù)。本研究的各項(xiàng)生理指標(biāo)中,3個(gè)小型豬品種間都無(wú)顯著差異的指標(biāo)僅有血小板比容,血紅蛋白含量在貴州與廣西巴馬小型豬間具有顯著差異,五指山小型豬與這2個(gè)品種間的差異不顯著,有6項(xiàng)指標(biāo)在3個(gè)品種間都具有極顯著差異,而其它10項(xiàng)指標(biāo)最少在2個(gè)品種間具有極顯著差異。同一群體內(nèi)不同指標(biāo)的變異程度也不盡相同,貴州小型豬的變異系數(shù)(coefficientofvariation,CV)在0.035(MCHC)到1.059(MO)之間,平均CV為0.243,五指山小型豬的CV值在0.024(MCHC)到0.564(MO%)之間,平均CV為0.19,廣西巴馬小型豬的CV值在0.015(MCHC)到0.597(GR)之間,平均CV為0.182。產(chǎn)生這種差異的原因可能是品種的遺傳基礎(chǔ)、生長(zhǎng)繁育環(huán)境、飼養(yǎng)條件和管理水平等因素。本研究檢測(cè)的18項(xiàng)指標(biāo)中,有8項(xiàng)是3個(gè)小型豬品種的值均位于人類參考范圍之內(nèi),有3項(xiàng)是較人類最小值都低,有5項(xiàng)較人類最大值都高。與3個(gè)小型豬品種相比較,哥廷根小型豬有3項(xiàng)指標(biāo)較中國(guó)小型豬參數(shù)值都低,且低于人類最小值;有2項(xiàng)指標(biāo)較它們的都高,且高于人類最大值;國(guó)內(nèi)普通豬比小型豬和人類最小值都低的指標(biāo)有1項(xiàng),較小型豬都高且高于人類最大值的指標(biāo)有3項(xiàng);