不同產(chǎn)地余甘子果汁中多酚、黃酮和多糖含量分析

不同產(chǎn)地余甘子果汁中多酚、黃酮和多糖含量分析

于甘子是薔薇科植物科的一種杏仁屬。截止2002年,我國(guó)余甘子野生及栽培林面積大約在60000hm2以上,野生余甘子在福建、云南、貴州、廣西等省每年合計(jì)產(chǎn)量為10萬(wàn)t。研究表明,余甘果中含有豐富的超氧化歧化酶(SOD)、Vc、多酚類(lèi)物質(zhì)及多糖等活性物質(zhì),具有抗炎、抗腫瘤、抗突變、抗高血壓、降血脂、降血壓、保肝等功效,并且已證實(shí),余甘子強(qiáng)烈的抗氧化活性是其生理功能的基礎(chǔ)。本文測(cè)定了廣東和海南產(chǎn)地的余甘子果汁的總多酚、粗黃酮和多糖的含量,并測(cè)定了其還原力和自由基的清除能力,分析其活性成分含量與抗氧化活性之間的關(guān)系,為余甘子的深度開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。1材料和方法1.1試劑和試藥試樣分別購(gòu)自廣東省惠州市及海南省?？谑?。DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)、氮藍(lán)四唑(NBT)、蘆丁(Rutin)購(gòu)于Sigma公司,其他試劑均為分析純。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1余甘果汁的制備稱取余甘果樣各200g加入50g水打漿,過(guò)濾得到余甘果汁。余甘果汁冷凍干燥,并于-4℃下保存?zhèn)溆?。干燥粉用體積分?jǐn)?shù)70%乙醇稀釋并定溶到10mg/mL。1.2.2活性物質(zhì)含量的測(cè)定總多酚采用Folin-Ciocalteu法測(cè)定;總黃酮采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法;多糖含量采用硫酸-苯酚法進(jìn)行測(cè)定。1.2.3三氯乙酸分光光度法取1mL樣品液,加pH6.6的磷酸緩沖液2.5mL和質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%鐵氰化鉀溶液2.5mL,混合后在50℃放置20min,加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%三氯乙酸溶液2.5mL,4800×g離心10min,取上清液2.5mL,加入2.5mL蒸餾水和質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%氯化鐵2.5mL,混勻,靜置10min,在700nm處測(cè)定吸光度。吸光度越高,抗氧化性越好,還原力越強(qiáng)。1.2.4空白吸光值測(cè)定樣品吸光值(A樣品):取1mL樣品液,加入1mmol/LDPPH甲醇溶液1mL,室溫放置30min,測(cè)定520nm處吸光值。以1mL體積分?jǐn)?shù)70%乙醇替代提取液測(cè)定空白吸光值(A空白)。DPPH清除率/%=(1-A樣品/A空白)×1001.2.5空白吸光值試驗(yàn)樣品吸光值(A樣品):取0.005mol/L鄰二氮菲溶液0.6mL,加0.4mLpH7.4的磷酸鹽,0.01mol/L硫酸亞鐵溶液0.3mL,0.02mol/LEDTA溶液0.3mL,蒸餾水0.6mL,樣品液1mL,體積分?jǐn)?shù)0.1%雙氧水0.8mL,37℃保溫1h,測(cè)定536nm處吸光值。以1mL70%乙醇和0.8mL蒸餾水替代提取液和雙氧水測(cè)定空白吸光值(A空白),以1mL體積分?jǐn)?shù)70%乙醇替代樣品測(cè)定損傷吸光值(A損傷)。羥基自由基清除率/%=(A樣品-A損傷)/(A空白-A損傷)×1001.2.6樣品溶液和吸光值a樣品采用核黃素-光-氮藍(lán)四唑體系測(cè)定。空白吸光值(A空白):取0.5mLpH7.5的磷酸鹽緩沖液,加入0.3mL5×10-5mol/L核黃素,0.25mL0.02mol/L甲硫氨酸,5.1×10-4mol/L氮藍(lán)四唑和1.0mL樣品溶劑,再加去離子水定容至5.0mL,40W日光燈照射20min,于560nm處比色。樣品吸光值(A樣品):取0.5mLpH7.5的磷酸鹽緩沖液,加入0.3mL5×10-5mol/L核黃素,0.25mL0.02mol/L甲硫氨酸,5.1×10-4mol/L氮藍(lán)四唑和1.0mL樣品溶液,再加去離子水定容至5.0mL,40W日光燈照射20min,于560nm處比色。超氧陰離子自由基清除率/%=(A空白-A樣品)/A空白×1002結(jié)果與討論2.1海南栽培品種的得率及總黃酮含量表1為廣東和海南兩產(chǎn)地的余甘果汁粉得率和活性物質(zhì)含量的測(cè)定結(jié)果。從表1可知,不同產(chǎn)地的余甘果汁的活性物質(zhì)含量差異顯著。廣東野生品種果粉得率最高,為48.1mg/g,廣東栽培品種的得率為40.2mg/g,海南栽培品種的得率最低,僅為39.5mg/g。廣東野生果汁的總多酚含量最高,達(dá)到(204.15±6.85)mg/g(干物質(zhì));海南產(chǎn)地的余甘子果汁總多酚含量最低,僅為(130.60±3.31)mg/g(干物質(zhì))(P<0.01)。海南野生品種余甘子果汁的總黃酮含量也最高,達(dá)到(81.11±8.67)mg/g(干物質(zhì))。廣東栽培品種的總黃酮含量最低,為(38.69±0.49)mg/g(干物質(zhì))(P<0.05)。多糖含量最高的是廣東野生果汁(19.78±1.22)mg/g干物質(zhì),最低的是廣東栽培果汁(11.03±2.01)mg/g(干物質(zhì))(P<0.05)。2.2不同濃度vd不同產(chǎn)地余甘子果汁粉,VC的抗氧化能力比較見(jiàn)表2。表2結(jié)果表明,各種余甘子果汁都有較強(qiáng)的抗氧化活性和清除自由基的能力。廣東野生余甘子果汁抗氧化活性較高,在濃度為10mg/mL時(shí),其還原力最高,達(dá)到1.344±0.14;VC還原力最低,為1.205±0.05;廣東栽培余甘子果汁和海南栽培余甘子果汁還原力分別為1.291±0.01、1.210±0.09,均高于同濃度的VC。廣東栽培余甘子果汁的DPPH自由基清除力最高,濃度為10mg/mL時(shí),清除率達(dá)到(92.09±1.52)%,高于同濃度的VC的清除率(90.67±2.53)%;廣東野生余甘子果汁DPPH清除力相對(duì)較弱,其清除率為(86.84±11.02)%;海南栽培余甘子果汁DPPH自由基清除力最弱,其清除率為(72.35±13.33)%。廣東野生余甘子果汁對(duì)羥基自由基的清除力最高,其清除率為(91.50±3.53)%;VC在同濃度下的羥基自由基清除率為(88.32±2.59)%,海南栽培余甘子果汁的羥基自由基清除力最低,其清除率為(84.32±0.77)%;廣東栽培余甘子果汁與海南栽培余甘子果汁相近,其清除率為(84.40±4.01)%。對(duì)超氧陰離子自由基的清除力最高的是VC,濃度在10mg/mL時(shí)清除率為(94.03±9.95)%;廣東野生余甘子果汁的超氧陰離子自由基的清除力較VC稍低,其清除率為(92.31±1.30)%;廣東栽培余甘子果汁超氧自由基清除力最低,其清除率為(86.00±10.33)%。海南栽培余甘子果汁的超氧自由基清除力稍高于廣東栽培余甘子果汁,其清除率為(88.46±10.41%)。2.3黃酮類(lèi)物質(zhì)與抗氧化活性的相關(guān)性余甘子果汁中總多酚含量與其抗氧化活性之間的相關(guān)性分析見(jiàn)圖1～圖4。從圖1～圖4可以看出,余甘子果汁中的總多酚含量與其抗氧化活性之間有顯著線性相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)在P<0.01水平上都>0.9?？偠喾雍吭礁叩臉悠?其還原力值越高,清除自由基的能力也越強(qiáng)。廣東野生余甘果汁的總多酚含量最高(204.15±6.85)mg/g,其抗氧化活性相對(duì)較高,濃度為10mg/mL時(shí),其還原力為1.344±0.14,羥基自由基和超氧陰離子自由基的清除率分別為(91.50±3.53)%、(92.31±1.30)%。采用總多酚含量與其抗氧化活性相關(guān)性分析的方法,對(duì)余甘子果汁中黃酮類(lèi)物質(zhì)的含量與其還原力、超氧陰離子自由基、羥基自由基及DPPH自由基清除率的相關(guān)性進(jìn)行分析,結(jié)果表明,黃酮物質(zhì)的含量與抗氧化活性之間的相關(guān)性稍差。黃酮物質(zhì)的含量與還原力、羥基自由基清除力、DPPH清除力及超氧陰離子自由基的清除力的相關(guān)系數(shù)分別為:R2=0.8248(P<0.05)、R2=0.6696(P<0.05)、R2=0.7542(P<0.05)及R2=0.8304(P<0.05)。雖然在很多植物中黃酮類(lèi)物質(zhì)起主要的抗氧化作用,但在余甘子果汁中除了黃酮類(lèi)還有其他的酚類(lèi)物質(zhì)一起組成一個(gè)抗氧化體系,協(xié)同發(fā)揮抗氧化作用。Goshal等人曾報(bào)道,從余甘子果實(shí)中分離出的2種水解單寧油柑酸A和B有較強(qiáng)的的抗氧化活性。余甘果汁中抗氧化酚類(lèi)物質(zhì)的提取、分離及各成分間的協(xié)同作用需進(jìn)一步研究。采用相同的方法對(duì)余甘子果汁中多糖物質(zhì)的含量與還原力、超氧陰離子自由基、羥基自由基及DPPH自由基清除率的相關(guān)性分析表明,多糖含量與抗氧化活性之間沒(méi)有顯著的相關(guān)性,說(shuō)明多糖對(duì)余甘子果汁的抗氧化能力沒(méi)有顯著的貢獻(xiàn),這與肖湘等人的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不相吻合,原因可能是原料來(lái)源不同導(dǎo)致的。余甘子果汁起抗氧化作用的主要是酚類(lèi)物質(zhì),它能夠提供活潑的氫質(zhì)子,有效的清除氧自由基;酚類(lèi)還能夠與過(guò)氧化自由基結(jié)合成穩(wěn)定的化合物,阻止了氧化過(guò)程中的鏈鎖反應(yīng)的傳播;另外,酚類(lèi)通過(guò)對(duì)金屬離子絡(luò)合作用清除自由基。不同余甘子果汁有不同的酚類(lèi)物質(zhì)組成,就有不同的抗氧化活性。體現(xiàn)在不同的樣品對(duì)不同的自由基的清除能力不同。比如,廣東野生余甘果汁的總多酚含量最高,其還原力、羥基自由基和超氧陰離子自由基的清除力都是最強(qiáng)的,廣東栽培果汁雖然多酚含量稍低,但其DPPH自由基清除力最高。3廣東余甘果汁抗氧化活性分析2.余甘子果汁中含有豐富的生物活性物質(zhì)。在實(shí)驗(yàn)所用的原料中,廣東野生余甘果汁的總多酚含量、總黃酮含量和水溶性多糖含量最高,分別為(204.15±6.85)mg