微生物室sop文件

細(xì)菌室操作規(guī)程ABC四醫(yī)院檢查科目錄細(xì)菌室操作程序文獻(xiàn)細(xì)菌室人員崗位職責(zé)……………………..1標(biāo)本采集及保存規(guī)定………3顯微鏡檢查法操作規(guī)程……………………5細(xì)菌室標(biāo)本操作流程………6細(xì)菌的形態(tài)檢查操作規(guī)程…………………8細(xì)菌生化反映鑒定及其它實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程………………11細(xì)菌的接種與培養(yǎng)辦法操作規(guī)程………17支原體培養(yǎng)、鑒定及藥敏操作規(guī)程……………19血液感染病原體檢查操作規(guī)程…………20中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染病原體檢查操作規(guī)程………………22下呼吸道感染病原體檢查操作規(guī)程……24尿路感染病原體檢查操作規(guī)程…………26消化道感染病原體檢查操作規(guī)程………29膿汁及病灶分泌物細(xì)菌學(xué)檢查操作規(guī)程………………31生殖系統(tǒng)標(biāo)本的解決……………………33抗菌藥品敏感實(shí)驗(yàn)………34醫(yī)院微生物感染控制檢測(cè)消毒滅菌效果監(jiān)測(cè)……….37環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)………….38采樣及檢查原則…….………….………..39各部位的消毒…………….43細(xì)菌室人員崗位職責(zé)1、上班后先搞好室內(nèi)衛(wèi)生、核查各個(gè)培養(yǎng)箱、冰箱的工作溫度與否在設(shè)定的范疇內(nèi)，并做好統(tǒng)計(jì)。檢查多個(gè)儀器工作與否正常，做好統(tǒng)計(jì)。2、接受樣本：核對(duì)各樣本號(hào)與申請(qǐng)單聯(lián)號(hào)與否一致，如不一致立刻與病房聯(lián)系方便作出對(duì)應(yīng)的解決，如退單或重送樣本等，并做好聯(lián)系狀況的統(tǒng)計(jì)。核查各送檢樣本與否符合規(guī)定。①痰液樣本：先看外觀、再直接涂片鏡檢，以白細(xì)胞≥25個(gè)/低倍鏡視野，而上皮細(xì)胞≤10個(gè)/低倍鏡視野，為合格痰液。②無(wú)菌體液樣本：檢查多個(gè)無(wú)菌體液樣本的盛放器皿與否符合規(guī)定。③容易干燥的樣本：對(duì)某些容易干燥的樣本如大便、咽拭子、膿液拭子、泌尿生殖道拭子等與否已經(jīng)干燥。對(duì)不符合規(guī)定的樣本必需與臨床聯(lián)系，方便作出對(duì)應(yīng)解決，辦法如聯(lián)號(hào)不符的樣本，做好統(tǒng)計(jì)。對(duì)符合的樣本進(jìn)行原始單的登記。3、樣本編號(hào)：對(duì)符合的樣本作出編號(hào)，普通細(xì)菌培養(yǎng)：痰液、咽拭子、血液增菌培養(yǎng)、尿液、胸、腹水、腦脊液、膽汁、膿液、泌尿生殖道拭子、大便致病菌培養(yǎng)。在多個(gè)培養(yǎng)基上及申請(qǐng)單上編號(hào)的同時(shí)均需明確標(biāo)明接種日期。4、樣本接種：①血液、骨髓、腹水、關(guān)節(jié)液等：增菌培養(yǎng)瓶；②痰液、咽拭子：血平板、麥康凱平板；③尿液：血平板、麥康凱平板；④大便致病菌：SS平板；⑤腦脊液：血平板、巧克力平板；⑥分泌物的淋球菌培養(yǎng)接種：淋球菌專用平板；⑦支原體培養(yǎng)+藥敏：按闡明書接種支原體專用培養(yǎng)基。對(duì)以上接種樣本的現(xiàn)在編號(hào)應(yīng)統(tǒng)計(jì)于登記本上。另外對(duì)痰、膿液、腦脊液等在接種的同時(shí)應(yīng)對(duì)其沉渣進(jìn)行革蘭染色，如有細(xì)菌和或何種細(xì)菌為主立刻告知臨床，并做好統(tǒng)計(jì)。5、核對(duì)昨天移種平板申請(qǐng)單及原始登記本，擬定標(biāo)本移種與否對(duì)的。觀察血液增菌培養(yǎng)瓶，如發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌生長(zhǎng)，立刻涂片革蘭染色，將細(xì)菌的染色特性及形態(tài)報(bào)告給臨床，并做好統(tǒng)計(jì)，同時(shí)進(jìn)行移種。6、觀察平板，挑取可疑菌落涂片革蘭染色，并做好細(xì)菌的鑒定與藥敏實(shí)驗(yàn)工作。7、檢查多個(gè)培養(yǎng)基及試劑的庫(kù)存量，做好需配制培養(yǎng)基或購(gòu)置試劑的交班工作。8、定時(shí)做好本室所用鑒定和藥敏試條的質(zhì)控，做好統(tǒng)計(jì)。9、每天必須消毒平板、基礎(chǔ)培養(yǎng)基等用于常規(guī)醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)，另外根據(jù)具體狀況即時(shí)準(zhǔn)備好多個(gè)中和劑、無(wú)菌瓶等，對(duì)48小時(shí)的空氣培養(yǎng)出報(bào)告，同時(shí)注意與否有致病菌、菌落數(shù)與否超標(biāo)。10、工作完畢后注意對(duì)工作臺(tái)面進(jìn)行消毒、室內(nèi)進(jìn)行消毒。標(biāo)本采集及保存規(guī)定1、總則：用于細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本在收集時(shí)應(yīng)注意嚴(yán)格無(wú)菌操作和及時(shí)送檢，檢測(cè)后標(biāo)本應(yīng)妥善保存。2、臨床標(biāo)本的采集、下呼吸道分泌物(痰液)令患者早上起床后用清水瀨口，不要刷牙，立刻從下部呼吸道咳出第一口痰，吐在無(wú)菌塑料痰盒中，及時(shí)送檢。、尿液(中段尿)護(hù)理人員協(xié)助采用中段尿約3ml入無(wú)菌塑料盒中，及時(shí)送檢。、糞便取有粘液、膿血部分的糞便置無(wú)菌塑料盒中及時(shí)送檢。、眼、耳、鼻、喉拭子將棉拭子沾取少量無(wú)菌生理鹽水(如沾取的太多，可在無(wú)菌生理鹽水瓶壁上擠去多出的水份)，然后采用可疑部位的分泌物，倒懸于無(wú)菌塑料盒中，及時(shí)送檢。、膿液用沾有生理鹽水的棉拭子沾取膿液，要盡量多取某些，然后將棉拭置于無(wú)菌塑料盒中，及時(shí)送檢。、血液2.6.1、凡懷疑菌血癥和敗血病的患者，采血培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)盡量在未使用抗菌素前采血，如已使用抗菌素，應(yīng)盡量選擇抗菌素在體內(nèi)濃度最低時(shí)采血，應(yīng)在病人第二次使用抗菌素之前采集血培養(yǎng)標(biāo)本。固然在病人發(fā)熱或寒顫時(shí)采集也可。2.6.2、成人每次采血5～10m1，小兒采血3～5ml。2.6.3、嚴(yán)格消毒病人采血部位和血培養(yǎng)瓶口，抽一定量血液后，無(wú)菌注入血培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，輕輕搖勻。2.6.4、從抽血到接種入瓶，動(dòng)作要快，避免血液凝固，同時(shí)要及時(shí)送檢。、穿刺液胸腹水、心包液、關(guān)節(jié)腔液、鞘膜積液，嚴(yán)格無(wú)菌抽取后，注入含肝素抗凝的無(wú)菌試管中，輕輕顛倒試管10余次，使肝素與穿刺液混勻達(dá)成抗凝的目的，或直接無(wú)菌注入血培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)及時(shí)送檢。、膽汁由?？漆t(yī)生以無(wú)菌辦法取引流液10m1注入無(wú)菌塑料盒內(nèi)。、腦脊液以無(wú)菌辦法取腦脊液3～5ml，置無(wú)菌試管內(nèi)，常溫保存送檢，如只做培養(yǎng)可直接無(wú)菌注入血培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，及時(shí)送檢。、生殖器官標(biāo)本陰道、子宮頸及前列腺等分泌物應(yīng)由醫(yī)師采集，收集于無(wú)菌塑料盒內(nèi)送檢。如疑為淋病奈瑟菌感染，做培養(yǎng)檢查時(shí)，采集的標(biāo)本應(yīng)床旁接種并及時(shí)放入孵箱培養(yǎng)。、燒傷標(biāo)本以無(wú)菌棉拭子直接采用多個(gè)部位創(chuàng)面的膿汁分泌物放入無(wú)菌塑料盒中。、支原體（解脲、人型）培養(yǎng)+藥敏的標(biāo)本采集2.12.1、支原體對(duì)干、熱抵抗力差，標(biāo)本采集后應(yīng)盡快接種支原體運(yùn)輸培養(yǎng)基送檢。2.12.2、男性：用細(xì)的無(wú)菌棉拭子沾取無(wú)菌鹽水少量進(jìn)一步尿道口內(nèi)2～2.5cm3、臨床標(biāo)本的保存細(xì)菌室標(biāo)本原則上規(guī)定及時(shí)送檢、及時(shí)解決，不得保存。顯微鏡檢查法操作規(guī)程顯微鏡檢查是細(xì)菌鑒定工作中的一重要手段，有助于細(xì)菌的初步鑒別，同時(shí)對(duì)下一步鑒定工作起著重要的指導(dǎo)作用。有時(shí)通過(guò)形態(tài)學(xué)檢查可得到初步診療，如痰中的抗酸桿菌和泌尿生殖道分泌物中的淋病奈瑟菌等。顯微鏡檢查有不染色標(biāo)本檢查法和染色標(biāo)本檢查法兩種。1、不染色標(biāo)本的檢查：不染色標(biāo)本重要用于檢查細(xì)菌的動(dòng)力及運(yùn)動(dòng)狀況。、壓滴法：用接種環(huán)取細(xì)菌懸液2環(huán)，置于清潔載玻片中央，覆上蓋玻片，于高倍鏡下觀察。制片時(shí)菌液要適量，不可有氣泡，不可外溢。、懸滴法：取干凈的凹窩載玻片及蓋玻片各1塊，將凹孔四周的平面上涂上一層凡士林，取一環(huán)菌液置蓋玻片中央，將凹窩載玻片的凹面對(duì)下，對(duì)準(zhǔn)于蓋玻片的液滴上，然后快速翻轉(zhuǎn)玻片，用小鑷子輕壓蓋玻片使之與凹孔邊沿粘緊。鏡下觀察時(shí)先低倍后高倍，不可壓碎蓋玻片。有動(dòng)力的細(xì)菌可見(jiàn)細(xì)菌從一處移到另一處，無(wú)動(dòng)力的細(xì)菌呈布朗運(yùn)動(dòng)而無(wú)位置的變化。螺旋體由于菌體纖細(xì)、透明，需用暗視野顯微鏡觀察其形態(tài)、活動(dòng)。2、染色標(biāo)本檢查法：通過(guò)對(duì)標(biāo)本的制片及染色，能觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列、染色特性以及莢膜、芽胞、異染顆粒等構(gòu)造，有助于細(xì)菌的初步鑒定。、快速革蘭染色法2.1.1、操作見(jiàn)試劑闡明書2.1.2、成果：革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。2.1.3、注意事項(xiàng)：染色關(guān)健在于涂片和脫色，涂片不適宜過(guò)厚，固定不適宜過(guò)熱，脫色不適宜過(guò)分，菌齡為18～24小時(shí)為佳。、抗酸染色法2.2.1、操作見(jiàn)試劑闡明書2.2.2、成果：抗酸桿菌呈紅色。2.2.3、注意事項(xiàng)：每一張玻片只能涂一份標(biāo)本且不能在染色缸中染色，以免造成不同標(biāo)本間的交互污染從而造成陰陽(yáng)性成果混淆，至無(wú)紅色液體流下。3、墨汁負(fù)染鏡檢：背景著色而菌體不著色的染色法，用以觀察新型隱球菌的寬厚莢膜等。菌室標(biāo)本操作流程1、標(biāo)本的接受、標(biāo)本接受的時(shí)間：原則上全天任何時(shí)間均可。、標(biāo)本的接受：接受標(biāo)本者要認(rèn)真核對(duì)標(biāo)本的數(shù)量、標(biāo)本與檢查單規(guī)定與否相符以及標(biāo)本的質(zhì)量等。、把接受的標(biāo)本編號(hào)。2、臨床標(biāo)本的接種、檢查目的是細(xì)菌培養(yǎng)+藥敏實(shí)驗(yàn)。各臨床標(biāo)本的培養(yǎng)基選擇以下：2.1.1培養(yǎng)基的選擇標(biāo)本類型培養(yǎng)基血中段尿腦脊液穿刺液膽汁呼吸道標(biāo)本糞便標(biāo)本病灶分泌物血培養(yǎng)瓶血平板、麥康凱平板血平板、巧克力平板血平板、麥康凱平板血平板、麥康凱平板血平板、麥康凱平板SS平板血平板、麥康凱平板2.1.2、生殖器標(biāo)本根據(jù)臨床醫(yī)生所寫的檢查項(xiàng)目接種對(duì)應(yīng)的平板，操作以下：淋球菌培養(yǎng)接種淋球菌平板；念珠菌培養(yǎng)接種沙保羅培養(yǎng)基；支原體培養(yǎng)則按《支原體培養(yǎng)的操作規(guī)程》操作；作普通細(xì)菌培養(yǎng)，則接種血平板和巧克力平板；衣原體抗原檢測(cè)的按《衣原體抗原檢測(cè)的操作規(guī)程》進(jìn)行檢查。、接種的辦法：標(biāo)本做分區(qū)劃線。、檢查目的為找抗酸桿菌的按《找抗酸桿菌的操作規(guī)程》進(jìn)行檢查。3、所接種的平板必須寫上標(biāo)本的編號(hào)和接種的日期，然后根據(jù)規(guī)定進(jìn)行培養(yǎng)。4、標(biāo)本的培養(yǎng)條件、溫度、時(shí)間平板培養(yǎng)條件、溫度、時(shí)間血平板巧克力平板淋球菌平板沙保羅平板其它的平板孵箱、35—37℃、18—孵箱、35—37℃、18—孵箱、35—37℃、18—孵箱、28—31℃、24—孵箱、35—37℃、18—5、根據(jù)生長(zhǎng)在平板上的細(xì)菌菌落形態(tài)、菌落涂片、染色、鏡檢等來(lái)綜合判斷細(xì)菌形態(tài)和染色性質(zhì)，按各屬鑒定的作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行各菌屬的常規(guī)鑒定及藥敏實(shí)驗(yàn)。6、成果的報(bào)告確認(rèn)細(xì)菌鑒定及藥敏實(shí)驗(yàn)成果后，進(jìn)行檢查驗(yàn)單成果報(bào)告的存盤、打印。7、對(duì)各類細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本除特殊規(guī)定外，我室普通操作完后按規(guī)定進(jìn)行無(wú)害化解決。細(xì)菌的形態(tài)檢查操作規(guī)程1、不染色標(biāo)本的檢查壓滴法和懸滴法。重要用于檢查生活狀態(tài)下的細(xì)菌的動(dòng)力及運(yùn)動(dòng)狀況。將特制好的標(biāo)本置于顯微鏡載物臺(tái)中央，先以低倍鏡觀察，再用高倍鏡觀察。成果：有鞭毛的細(xì)菌呈穿梭似流星狀運(yùn)動(dòng)(有明顯的方向性)；無(wú)鞭毛的細(xì)菌呈布朗運(yùn)動(dòng)(只在原地顫動(dòng)而無(wú)位置的變化)。2、細(xì)菌染色標(biāo)本的檢查染色的第一步是制作涂片。菌落涂片時(shí)，先取生理鹽水l滴，置玻片上，用接種針挑取菌落，在鹽水中涂布。涂片時(shí)必須注意應(yīng)輕輕操作。劇烈的動(dòng)作會(huì)變化菌細(xì)胞原有的排列形式，或造成細(xì)菌鞭毛脫落，影響成果的精確性。制備的涂片應(yīng)自然干燥，并經(jīng)火焰固定，固定溫度不適宜過(guò)高，以玻片背面接觸手背不燙為準(zhǔn)，否則可能使細(xì)胞形態(tài)變化。將固定后的涂片進(jìn)行染色。、革蘭染色本染色是最基本的染色法，可用于標(biāo)本涂片或菌落涂片。染色成果將細(xì)菌分為革蘭陽(yáng)性(紫色)和革蘭陰性(紅色)兩類。2.1.1、試劑(1)結(jié)晶紫溶液A液：結(jié)晶紫295％乙醇20mlB液：草酸銨0.8g蒸餾水80ml需在用前24h將A液、B液混合，過(guò)濾后裝入試劑瓶?jī)?nèi)備用。(2)碘液碘lg碘化鉀2g蒸餾水300ml碘與碘化鉀混合并研磨，加入幾毫升水，使其逐步溶解，然后研磨，繼續(xù)加入少量蒸餾水至完全溶解。最后補(bǔ)足水量。也可用少量蒸餾水，先將碘化鉀完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。(3)脫色液：95％乙醇。(4)復(fù)染液A．貯存液：沙黃2.5g95%乙醇100mlB．應(yīng)用液：A液10ml蒸餾水90ml染色辦法：(1)．涂片經(jīng)火焰固定，加結(jié)晶紫液染1min，清水沖去染液。(2)．加碘液染1min，水洗。(3)．加脫色液，不時(shí)搖動(dòng)約10～30s，至無(wú)紫色脫落為止，水洗。(4)．加復(fù)染液，染30s，水洗。(5)．干后鏡檢。、抗酸染色抗酸染色直接用于痰標(biāo)本時(shí)，能夠適宜增加標(biāo)本涂片的厚度，以提高檢出率。染厚涂片時(shí)，須掌握復(fù)染色時(shí)間。如果背景過(guò)深，影響鏡檢。奴卡菌及放線菌可呈弱抗酸性，取培養(yǎng)菌落涂片染色時(shí)，呈現(xiàn)兩種現(xiàn)象，視野中有些菌陽(yáng)性，另外某些則陰性；有時(shí)同一種菌體上，紅色的深淺亦有不同，觀察時(shí)應(yīng)予注意。試劑(1)、石炭酸復(fù)紅溶液堿性復(fù)紅乙醇飽和溶液10ml5％石炭酸溶液90ml(2)、脫色劑濃鹽酸3ml95%乙醇97ml(3)、復(fù)染液(呂弗勒美藍(lán)液)美藍(lán)乙醇飽和溶液30ml10％氫氧化鉀0.1m1蒸餾水100ml染色辦法(1)、涂片經(jīng)火焰固定，加石炭酸復(fù)紅溶液，漸漸加熱至有蒸汽出現(xiàn)，切不可沸騰，持續(xù)約5min（若染色奴卡菌需要加長(zhǎng)時(shí)間），水洗。(2)、加脫色劑，不時(shí)搖動(dòng)玻片至無(wú)紅色脫落為止，水洗。(3)、加復(fù)染液，染～lmin，水洗。(4)、干后鏡檢。分枝桿菌呈紅色，背景為藍(lán)色。注：奴卡菌、放線菌標(biāo)本染色時(shí)，脫色劑改用2％硫酸水溶液。、墨汁莢膜染色用于觀察菌體有無(wú)莢膜構(gòu)造，借此鑒定某些菌，如新型隱球菌。傳統(tǒng)的辦法是用印度墨汁，但現(xiàn)在國(guó)內(nèi)無(wú)售。常規(guī)工作能夠用墨汁或墨水替代，但應(yīng)注意顆粒不能太粗，否則影響觀察成果。有人用5％黑色素水溶液做染料，效果較好。試劑印度墨汁或5％黑色素水溶液。染色辦法將標(biāo)本與1滴染色液在載玻片上混合，加上蓋玻片，輕輕壓一下，使標(biāo)本混合液變薄。在低倍鏡下尋找有莢膜的菌細(xì)胞。找到后，轉(zhuǎn)換高倍鏡確認(rèn)。細(xì)菌生化反映鑒定及其它實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程1、氧化-發(fā)酵實(shí)驗(yàn)(O-F實(shí)驗(yàn))原理：細(xì)菌在分解葡萄糖的過(guò)程中，必須有分子氧參加的，稱為氧化型。能夠進(jìn)行無(wú)氧降解的，稱為發(fā)酵型(發(fā)酵型細(xì)菌在有氧無(wú)氧的條件下均能分解葡萄糖)。不分解葡萄糖的細(xì)菌稱為產(chǎn)堿型。辦法：將待檢細(xì)菌同時(shí)穿刺接種兩支Hugh-Leifson培養(yǎng)基，其中一支培養(yǎng)基滴加無(wú)菌石蠟(或其它礦物油)，高度不少于lcm。35℃，24成果：培養(yǎng)基變黃表達(dá)細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸，兩支培養(yǎng)基均無(wú)變化為產(chǎn)堿型或不分解糖型；兩支培養(yǎng)基均均產(chǎn)酸為發(fā)酵型。若僅不加石蠟的培養(yǎng)基產(chǎn)酸為氧化型。應(yīng)用：重要用于腸桿菌科細(xì)菌與非發(fā)酵細(xì)菌的鑒別，前者均為發(fā)酵型，而后者均為氧化型或產(chǎn)堿型。也可用于葡萄球菌與微球菌問(wèn)的鑒別。2、β-半乳糖苷酶(ONPG)實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)菌產(chǎn)生半乳糖苷酶，分解鄰-硝基酚β-D-半乳糖苷(無(wú)色)生成鄰-硝基酚(黃色)。成果：菌懸液呈現(xiàn)黃色為陽(yáng)性反映，普通在20-30分鐘內(nèi)顯色。應(yīng)用：重要用于緩慢發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。3、七葉苷水解實(shí)驗(yàn)原理：有的細(xì)菌可將七葉苷分解成葡萄糖和七葉素，七葉素與培養(yǎng)基中的枸櫞酸鐵的二價(jià)鐵離子反映，生成黑色的化合物。成果：培養(yǎng)基變黑為陽(yáng)性，不變色為陰性。應(yīng)用：重要用于D群鏈球菌與其它鏈球菌的鑒別。前者為陽(yáng)性，后者為陰性。也可用于革蘭陰性菌與厭氧菌的鑒別。4．甲基紅實(shí)驗(yàn)原理：某些細(xì)菌在糖代謝過(guò)程中，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步分解，產(chǎn)生甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基pH值降至下列，加入甲基紅呈現(xiàn)紅色為陽(yáng)性。若細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生的酸少，或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為其它產(chǎn)物，則培養(yǎng)基pH值仍在以上，加入甲基紅呈現(xiàn)黃色為陰性。成果：呈現(xiàn)紅色為陽(yáng)性，橘紅色為弱陽(yáng)性。黃色為陰性。應(yīng)用：重要用于鑒別大腸桿菌與產(chǎn)氣桿菌，前者陽(yáng)性，后者陰性。另外腸桿菌科中變形桿菌屬、沙門菌屬、枸櫞酸桿菌屬和志賀菌屬等陽(yáng)性，而腸桿菌屬、哈夫尼亞菌屬則為陰性。5、VP實(shí)驗(yàn)原理：某些細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在堿性環(huán)境中，氧化為二乙酰，與精氨酸中的胍基作用生成紅色化合物。成果：在數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性，如無(wú)紅色出現(xiàn)且于35℃4h后仍如故者即為陰性。應(yīng)用：本實(shí)驗(yàn)與甲基紅實(shí)驗(yàn)一起使用，由于前者陽(yáng)性的細(xì)菌，后者普通為陰性。6、吲哚(靛基質(zhì))實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)菌分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚(靛基質(zhì))，加入對(duì)位二甲基苯甲醛生成紅色玫瑰吲哚。成果：于兩者液面接觸處出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性，無(wú)色為陰性。應(yīng)用：重要用于腸桿菌科的鑒定。6、尿素分解實(shí)驗(yàn)原理：含有尿素酶(尿酶)的細(xì)菌，分解尿素產(chǎn)生大量的氨，培養(yǎng)基變堿。成果：培養(yǎng)基呈堿性，使酚紅批示劑變紅為陽(yáng)性，不變色為陰性。應(yīng)用：重要用于腸桿菌科中變形桿菌屬細(xì)菌的鑒定，奇異變形桿菌、普通變形桿菌為陽(yáng)性，克雷伯菌屬、枸椽酸菌屬、雷氏普羅威登菌和摩根摩根菌為陽(yáng)性。7、苯丙氨酸脫氨酶實(shí)驗(yàn)原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶使苯丙氨酸脫氨生成苯丙酮酸，加入FeCl3生成綠色化合物。成果：出現(xiàn)綠色為陽(yáng)性，應(yīng)立刻觀察成果，延長(zhǎng)會(huì)引發(fā)退色。應(yīng)用：重要用于腸桿菌科的鑒定，變形桿菌屬、普羅威登斯菌和摩根摩根菌均為陽(yáng)性。腸桿菌科其它菌均為陰性。8、氨基酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)原理：含有氨基酸脫羧酶的細(xì)菌，分解氨基酸脫羧生成胺和CO2使培養(yǎng)基變堿，批示劑變化顏色。成果：對(duì)照管應(yīng)呈黃色，測(cè)定管呈紫色(批示劑為溴甲酚紫)為陽(yáng)性。應(yīng)用：重要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。9、氧化酶實(shí)驗(yàn)原理：氧化酶是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的最后呼吸酶。含有氧化酶的細(xì)菌，首先使細(xì)胞色素C氧化，再由氧化型細(xì)胞色素C使對(duì)苯二氨氧化。生成有色醌類化合物。成果：細(xì)菌在與試劑接觸10秒內(nèi)呈紫色為陽(yáng)性。為確保成果精確性，應(yīng)作陰、陽(yáng)性對(duì)照。應(yīng)用：重要用于腸桿菌科與假單胞菌的鑒別，前者為陰性。后者為陽(yáng)性。10、過(guò)氧化氫酶實(shí)驗(yàn)(觸酶實(shí)驗(yàn))原理：含有過(guò)氧化氫酶的細(xì)菌，能催化過(guò)氧化氫生成水和新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。試劑：3％過(guò)氧化氫溶液辦法：取菌置于干凈的試管或玻片上，然后滴加3％過(guò)氧化氫數(shù)滴；或直接滴加3％過(guò)氧化氫于不含血液的細(xì)菌培養(yǎng)基中，立刻觀察成果。成果：有大量氣泡產(chǎn)生為陽(yáng)性。不產(chǎn)憤怒泡為陰性。應(yīng)用：革蘭陽(yáng)性球菌中，葡萄球菌和微球菌均陽(yáng)性。而鏈球菌均陰性。1l、硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)原理：涉及兩個(gè)過(guò)程：一是在合成過(guò)程中，硝酸鹽還原為亞哨酸鹽和氨。再由氨轉(zhuǎn)化為氨基酸和細(xì)菌內(nèi)其它含氮化合物。二是在分解代謝過(guò)程中，硝酸鹽或亞硝酸鹽替代氧作為呼吸酶系統(tǒng)中的受氫體，能使硝酸鹽還原的細(xì)菌從哨酸鹽中獲得氧而形成亞硝酸鹽和其它還原性產(chǎn)物。成果：出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性。若加入試劑后無(wú)顏色變化反映，可能是①硝酸鹽沒(méi)有被還原，實(shí)驗(yàn)陰性。②硝酸鹽被還原為氨和氮等其它產(chǎn)物而造成假陰性，這時(shí)應(yīng)加入少量鋅粉，如出現(xiàn)紅色則表明實(shí)驗(yàn)確實(shí)為陰性。若仍不產(chǎn)生紅色，表明為實(shí)驗(yàn)為假陰性。應(yīng)用：本實(shí)驗(yàn)在細(xì)菌鑒定中應(yīng)用廣泛。12、氧化酶(改良法)實(shí)驗(yàn)試劑：四甲基對(duì)苯二胺(TMPD)二甲基亞砜(DMSO)溶解TMPD于DMSO中，置于避光玻塞瓶中，可在室溫中保存幾個(gè)星期。辦法：被檢菌株移種于7％羊血瓊脂上，30℃需氧條件下孵育15～18h，刮取菌落涂布于無(wú)色濾紙片上，加l滴上述試劑，陽(yáng)性者在2min內(nèi)呈深藍(lán)色。若被測(cè)菌株移種在蛋白胨酵母浸出液瓊脂上，最少孵育3天以上，才可檢測(cè)，陽(yáng)性反映5～10min出現(xiàn)。13、CAMP實(shí)驗(yàn)原理：B群鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，可增進(jìn)葡萄球菌的β-溶血素溶解紅細(xì)胞活性，因此在兩菌的交界處溶血力增加。出現(xiàn)矢形(半月形)的溶血區(qū)。成果：在兩劃線交界處出現(xiàn)箭頭樣的溶血區(qū)為陽(yáng)性應(yīng)用：在鏈球菌中，只有B群鏈球菌CAMP實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。14、O/129抑菌實(shí)驗(yàn)原理：O/129(二氨基喋啶)對(duì)弧菌屬、鄰單胞菌屬細(xì)菌有克制作用，而對(duì)氣單胞菌無(wú)克制作用。辦法：將待檢菌均勻涂布于堿性瓊脂平板上，鑷取O/129紙片(含藥40ug)貼于平板上，35℃，18~成果：出現(xiàn)抑菌環(huán)為敏感，無(wú)抑菌環(huán)為耐藥應(yīng)用：弧菌屬、鄰單胞菌屬對(duì)O／129敏感，而氣單胞菌屬耐藥15、桿菌肽實(shí)驗(yàn)原理：A群鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎全部敏感，而其它鏈球菌絕大多數(shù)對(duì)其耐藥。16、奧普托欣實(shí)驗(yàn)原理：幾乎全部的肺炎鏈球菌對(duì)Optochin敏感，而Optochin對(duì)其它鏈球菌則無(wú)克制作用17、．H2S實(shí)驗(yàn)原理：有些細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸(如胱胺酸、半胱胺酸)產(chǎn)生硫化氫，硫化氫碰到鉛或亞鐵離子，則生成黑色的硫化鉛或硫化鐵。成果：培養(yǎng)基變黑為陽(yáng)性，不變?yōu)殛幮?。?yīng)用：重要用于腸桿菌科屬或種的鑒定。18、觸酶實(shí)驗(yàn)(過(guò)氧化氫酶實(shí)驗(yàn))試劑：3%H202溶液，置棕色瓶?jī)?nèi)于4℃辦法：先挑取固體培養(yǎng)基上的菌落，置于干凈的玻片上，然后滴加3％過(guò)氧化氫溶液1～2滴。靜置之，lmin內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡的為陽(yáng)性，不產(chǎn)憤怒泡的為陰性。19、葡萄球菌凝固酶和凝聚因子實(shí)驗(yàn)葡萄球菌凝固酶實(shí)驗(yàn)被廣泛地用于常規(guī)鑒定金黃色葡萄球菌與其它葡萄球菌。試管法凝固酶實(shí)驗(yàn)稱為葡萄球菌凝固酶，玻片法為檢測(cè)凝聚因子。凝聚因子實(shí)驗(yàn)：取1滴蒸餾水于干凈的玻片上，用接種環(huán)挑取待檢菌一環(huán)置于蒸餾水中，制成濃的菌懸液，無(wú)自凝現(xiàn)象。然后加一環(huán)家兔血漿混合，10s內(nèi)觀察成果，出現(xiàn)明顯細(xì)菌凝塊為陽(yáng)性，否則為陰性。如超出10s可出現(xiàn)假陽(yáng)性，有10％～15％金黃色葡萄球菌呈假陰性，因此必須用試管法驗(yàn)證凝聚因子實(shí)驗(yàn)。操作過(guò)程中的注意點(diǎn)：(1)10s內(nèi)觀察成果。(2)必須制備濃厚的均勻菌懸液。(3)用EDTA抗凝的兔血漿為最佳。(4)加血漿后不要再混攪，以免細(xì)菌凝塊分散變小。(5)生長(zhǎng)在高鹽培養(yǎng)基上的菌落可出現(xiàn)自凝或假陽(yáng)性。葡萄球菌凝固酶實(shí)驗(yàn)：用生理鹽水將血漿4倍稀釋，取。然后挑取3～5個(gè)菌落于稀釋血漿中，成濃菌懸液。置37℃試管法葡萄球菌凝固酶實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性者，應(yīng)見(jiàn)到明顯的纖維蛋白凝膠塊，出現(xiàn)羊毛狀或纖維狀沉淀物并非真正凝固，應(yīng)判為陰性。中間型葡萄球菌、豬葡萄球菌需要較長(zhǎng)時(shí)間孵育，才可出現(xiàn)陽(yáng)性。凝固酶實(shí)驗(yàn)應(yīng)考慮下述狀況：①某些金黃色葡萄球菌產(chǎn)生溶纖維蛋白酶，溶解纖維蛋白凝塊。②所用血漿缺少纖維蛋白原。③實(shí)驗(yàn)菌株不純。成果：玻片法以血漿中有明顯的顆粒出現(xiàn)而鹽水中無(wú)自凝現(xiàn)象判為陽(yáng)性；試管法以血漿凝固為陽(yáng)性。應(yīng)用：作為鑒定葡萄球菌致病性的重要指標(biāo)，也是葡萄球菌鑒別時(shí)慣用的一種實(shí)驗(yàn)。20、新生霉素耐藥實(shí)驗(yàn)辦法：挑取待檢菌菌落數(shù)個(gè)，制成相稱號(hào)麥?zhǔn)瞎?McFarland)濃度菌液，棉拭子浸透，擠去多出液，均勻涂在M-H平板上，貼上含5ug／片的新生霉素紙片，35℃孵育16～20h，抑菌環(huán)直徑≤細(xì)菌的接種與培養(yǎng)辦法操作規(guī)程一、細(xì)菌的接種根據(jù)待檢標(biāo)本的來(lái)源、培養(yǎng)目的及所用培養(yǎng)基的性狀，采用不同的接種辦法。l、平板畫線分離法（1）、持續(xù)畫線分離法此法重要用于雜菌不多的標(biāo)本。用接種環(huán)取標(biāo)本少量，于平板l/5處密集涂布，然后回來(lái)作曲線持續(xù)劃線接種，線與線間有一定距離，劃滿平板為止。（2）、分區(qū)畫線分離法此法合用于雜菌較多的標(biāo)本。先將標(biāo)本均勻涂布于平板邊沿一社區(qū)(約占平板1/5)，再在二、三區(qū)依次持續(xù)畫線，每畫線一區(qū)均將接種針滅菌一次。每一區(qū)的劃線均接觸上一區(qū)的接種線1～2次。以獲得單個(gè)菌落。2、斜面接種法該法重要用于單個(gè)菌落的純培養(yǎng)。用滅菌接種針取菌少量，從培養(yǎng)基斜面底部向上劃始終線，然后從底部向上作持續(xù)曲線畫線。始終畫到斜面頂端。3、液體接種法多用于某些液體生化實(shí)驗(yàn)管的接種。用滅菌接種環(huán)取菌少量，在試管內(nèi)壁與液面交接處的管壁上輕輕研磨，使細(xì)菌混合于液體中。4、穿刺接種法重要用于半固體培養(yǎng)基、明膠及雙糖鐵的接種。用接種針取菌少量，從半固體培養(yǎng)基中央，平行于管壁垂直刺入，靠近管底但不可接觸管底，然后接種針原路退出。5、傾注平板法臨床上重要用于尿液等標(biāo)本的細(xì)菌計(jì)數(shù)。將標(biāo)本經(jīng)適宜稀釋后，取一定量加入已滅菌的平皿內(nèi)，傾入已經(jīng)溶化并冷卻至45℃6、涂布接種法慣用于紙片藥品敏感性測(cè)定，也可用于被檢標(biāo)本的細(xì)菌計(jì)數(shù)。加定量的被檢菌液于瓊脂平板表面，然后用滅菌的棉簽重復(fù)涂布幾次，使被檢菌均勻分布在瓊脂平板表面。然后貼上藥敏紙片培養(yǎng)，或直接培養(yǎng)觀察成果。二、細(xì)菌培養(yǎng)辦法根據(jù)臨床初步診療及待檢細(xì)菌的種類，可選用不同的環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng)。慣用的有需氧培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法。1、需氧培養(yǎng)法本法是臨床細(xì)菌室慣用的培養(yǎng)辦法，即將已經(jīng)接種好的平板、斜面和液體培養(yǎng)基等。置于35℃2、二氧化碳培養(yǎng)法本室用CO2孵箱將已接種好的培養(yǎng)基置于CO2孵箱內(nèi)培養(yǎng)。三、分離及純化法、分離是指從原材料或多個(gè)細(xì)菌的混合培養(yǎng)物中將多個(gè)細(xì)菌彼此獨(dú)立地分離開(kāi)，以得到純的單一菌株，技術(shù)環(huán)節(jié)以下：作純培養(yǎng)分離時(shí)，普通只用一只完整的瓊脂平板。涂劃多采用分區(qū)劃線法，在一只平板中可劃3～5個(gè)區(qū)。劃法有兩種：3.1.13.1.2、純化是指欲獲得大量純培養(yǎng)物的辦法，所用平板大小可根據(jù)需要的菌量而定。辦法是將一單個(gè)菌落或?qū)⑾嗨频木渥鞔罅棵芗縿澯谄桨迳隙@得大量純的培養(yǎng)物。支原體培養(yǎng)、鑒定及藥敏操作規(guī)程1．原理及根據(jù)原則：支原體分離鑒定培養(yǎng)基用于泌尿生殖道支原體(解脲支原體Uu和人型支原體Mh)的檢測(cè)與診療。當(dāng)有Uu和Mh生長(zhǎng)，分解尿素和精氨酸引發(fā)PH上升，使以酚紅為批示劑的培養(yǎng)基由黃轉(zhuǎn)紅。根據(jù)珠海迪爾生物工程有限公司生產(chǎn)的試劑盒闡明書。2．標(biāo)本的采集：、男性：用特別細(xì)的無(wú)菌棉拭子沾取無(wú)菌生理鹽水少量進(jìn)一步尿道口內(nèi)2～2.5cm處取分泌物，前列腺液亦可用沾取無(wú)菌生理鹽水的無(wú)菌棉拭子盡量多的沾取。、女性：用沾取少量無(wú)菌生理鹽水的棉拭子取宮頸內(nèi)口1～2cm處單層柱狀上皮細(xì)胞，取樣拭子不可碰陰道壁。、支原體對(duì)干、熱抵抗力差，標(biāo)本采集后應(yīng)立刻送檢。整個(gè)采樣過(guò)程應(yīng)注意無(wú)菌操作。3、標(biāo)本接種：(本實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免污染雜菌)、取出培養(yǎng)基，放置靠近室溫，并在瓶蓋上編號(hào)。、將采集的標(biāo)本拭子插入培養(yǎng)瓶中，在靠近液面上方的瓶壁擠示壓旋轉(zhuǎn)拭子多次，使拭子中標(biāo)本滲入到肉湯中：若為液體標(biāo)本，取200u1加入培養(yǎng)基中；若為中段尿，經(jīng)3000轉(zhuǎn)／分離心15分鐘取沉渣100ul加入培養(yǎng)基中。、蓋上瓶蓋，置35～37℃孵箱，在24～4、成果判讀：培養(yǎng)基變紅，判斷陽(yáng)性，培養(yǎng)基黃色并清亮，判斷陰性。5、已檢標(biāo)本解決：密閉容器高壓滅菌后，按醫(yī)用垃圾解決。血液感染病原體檢查操作規(guī)程1、標(biāo)本采集(1)、采集時(shí)間和次數(shù)血標(biāo)本普通應(yīng)在病人發(fā)熱早期或根據(jù)不同的發(fā)熱狀況在未用抗生素前采集做細(xì)菌培養(yǎng)，提高陽(yáng)性率需持續(xù)三次采血進(jìn)行培養(yǎng)。(2)、采血部位及抽血量普通抽取肘靜脈血。采血量為成人5~10ml，小朋友為3～5ml。(3)、成果觀察：培養(yǎng)72小時(shí)后若肉眼或自動(dòng)血液培養(yǎng)儀報(bào)告仍未細(xì)菌生長(zhǎng)，則盲目移種一次，仍未細(xì)菌生長(zhǎng)，向臨床發(fā)出一級(jí)初級(jí)報(bào)告：“血液經(jīng)72小時(shí)培養(yǎng)無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)”，為避免漏診，應(yīng)在培養(yǎng)5天、7天時(shí)再作盲目移種培養(yǎng)。疑為亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、真菌血癥等時(shí)，血培養(yǎng)最少持續(xù)培養(yǎng)2～3周，仍無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)方可報(bào)告為陰性。血液標(biāo)本（無(wú)菌采集）72h盲目移種血液標(biāo)本（無(wú)菌采集）72h盲目移種（初級(jí)報(bào)告）有細(xì)菌生長(zhǎng)涂片、染色、鏡檢需氧培養(yǎng)、CO2培養(yǎng)直接藥敏實(shí)驗(yàn)觀察菌落涂片、染色、鏡檢純培養(yǎng)血清學(xué)鑒定、生化反映實(shí)驗(yàn)、藥敏實(shí)驗(yàn)確認(rèn)報(bào)告初步報(bào)告3、血培養(yǎng)瓶中不同體現(xiàn)為不同細(xì)菌生長(zhǎng)：渾濁并有凝無(wú)塊均勻渾濁，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)氣微渾濁，有綠色變化表面有菌膜，培養(yǎng)基清晰，底層容血表面有菌膜，膜下有綠色渾濁血細(xì)胞層上面有顆粒狀生長(zhǎng)，自上而下的溶血金黃色葡萄球菌多為革蘭陰性菌肺炎鏈球菌枯草桿菌銅綠假單胞菌溶血性鏈球菌4、血液及骨髓標(biāo)本中常見(jiàn)病原菌革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌肺炎鏈球菌大腸埃希菌金黃色葡萄球菌傷寒及其它沙門菌表皮葡萄球菌變形桿菌溶血性鏈球菌產(chǎn)氣腸桿菌糞腸球菌肺炎克雷伯氏菌銅綠假單胞菌糞產(chǎn)鹼桿菌沙雷氏菌流感嗜血桿菌布魯氏菌5、報(bào)告成果血培養(yǎng)陽(yáng)性均作為危急值報(bào)告，因此血培養(yǎng)的成果應(yīng)及時(shí)告知臨床醫(yī)生，每日開(kāi)始工作能夠首先檢查血培養(yǎng)，如有細(xì)菌生長(zhǎng)，立刻解決。、疑有細(xì)菌生長(zhǎng)者，經(jīng)涂片、革蘭氏染色、鏡檢后，電話告知主治醫(yī)生，報(bào)告“疑有革蘭氏××菌生長(zhǎng)”。并做藥敏實(shí)驗(yàn)，報(bào)告初步成果。、經(jīng)分純培養(yǎng)完畢鑒定及藥敏實(shí)驗(yàn)，發(fā)出報(bào)告。、培養(yǎng)7天仍為陰性的標(biāo)本，報(bào)告無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。臨床上診療為亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎者，可持續(xù)培養(yǎng)至兩周再發(fā)陰性報(bào)告。中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染病原體檢查操作規(guī)程l、標(biāo)本采集以無(wú)菌辦法采集腦脊液2～5ml，盛于無(wú)菌瓶中送檢。2、直接檢查腦脊液可直接涂片、革蘭染色或抗酸染色等，然后鏡檢。無(wú)色透明的腦脊液，應(yīng)作離心取沉淀物涂片、染色鏡檢。3、檢查環(huán)節(jié)：、普通細(xì)菌涂片檢查除結(jié)核性腦膜炎外，由其它細(xì)菌引發(fā)的化膿性腦膜炎，腦脊液明顯混濁，可直接涂片，革蘭染色鏡檢。無(wú)色透明的腦脊液，應(yīng)離心后涂片、染色、鏡檢，根據(jù)染色及形態(tài)特性可初步提示細(xì)菌的種類。結(jié)核分枝桿菌涂片檢查：取腦脊液的離心沉淀物(3000r／min。30min)作抗酸染色。新型隱球菌涂片檢查：取腦脊液的離心沉淀物作墨汁負(fù)染色。生化鑒定、血清學(xué)鑒定藥敏實(shí)驗(yàn)報(bào)告初步報(bào)告結(jié)核分枝桿菌新生隱球菌等生化鑒定、血清學(xué)鑒定藥敏實(shí)驗(yàn)報(bào)告初步報(bào)告結(jié)核分枝桿菌新生隱球菌等普通細(xì)菌腦膜炎奈瑟菌抗酸染色革蘭染色動(dòng)力實(shí)驗(yàn)?zāi)旧呈吓囵B(yǎng)基、血平板血平板、巧克力平板（5%CO2環(huán)境）染色標(biāo)本不染色標(biāo)本分離培養(yǎng)直接涂片（取離心沉淀）腦脊液普通細(xì)菌腦膜炎奈瑟菌4、檢查程序5、腦脊液培養(yǎng)常見(jiàn)病原菌革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌金黃色葡萄球菌腦膜炎奈瑟菌A、B群鏈球菌卡他布蘭漢菌肺炎鏈球菌流感嗜血桿菌結(jié)核分支桿菌腸桿菌科菌種產(chǎn)單核李斯特菌腦膜敗血性黃桿菌新型隱球菌假單胞菌白色念珠菌6、報(bào)告成果無(wú)論是涂片還是培養(yǎng)，一但見(jiàn)到陽(yáng)性菌應(yīng)立刻告知臨床醫(yī)師。培養(yǎng)并經(jīng)鑒定的成果報(bào)告“××菌”，同時(shí)報(bào)告藥敏實(shí)驗(yàn)成果。下呼吸道感染病原體檢查操作規(guī)程1、標(biāo)本的采集有自然咳痰法、咽拭子采集法、支氣管鏡下采集法及分泌物標(biāo)本。2、標(biāo)本的直接檢查(1)、將痰標(biāo)本涂片后待干，固定、染色，或直接濕片鏡檢，對(duì)病原學(xué)早期、初步診療有重要意義。并向臨床發(fā)出初級(jí)報(bào)告。(2)、普通認(rèn)為合格的痰標(biāo)本為：以白細(xì)胞≥25個(gè)/低倍鏡視野，而上皮細(xì)胞≤10個(gè)/低倍鏡視野。采集合格標(biāo)本對(duì)細(xì)菌的診療尤為重要。3、分離培養(yǎng)與鑒定(1)、普通規(guī)定下呼吸道感染培養(yǎng)的細(xì)菌濃度應(yīng)>107CFU/ml，可視為病原菌，<104CFU/ml可視為污染菌。若介于兩者之間105～106CFU／ml時(shí)，要持續(xù)分離培養(yǎng)兩次以上仍為105～106CFU／ml時(shí)，亦認(rèn)為是病原菌。分離培養(yǎng)血平板、麥康凱平板分離培養(yǎng)血平板、麥康凱平板涂片、染色、鏡檢痰液及下呼吸道分泌物報(bào)告鑒定實(shí)驗(yàn)、藥敏實(shí)驗(yàn)純培養(yǎng)細(xì)菌菌落觀察初步報(bào)告涂片、染色、鏡檢

4、下呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)常見(jiàn)病原菌革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌金黃色葡萄球菌腦膜炎奈瑟氏菌化膿性鏈球菌流感嗜血桿菌肺炎鏈球菌腸桿菌科細(xì)菌結(jié)核分支桿菌非發(fā)酵菌白喉棒狀桿菌嗜肺軍團(tuán)菌假絲酵母菌5、報(bào)告成果痰中的病原菌不少屬于機(jī)會(huì)致病菌，與正常菌群同時(shí)存在，報(bào)告時(shí)應(yīng)作闡明，未檢出致病菌時(shí)，應(yīng)報(bào)告“無(wú)致病細(xì)菌生長(zhǎng)”。尿路感染病原體檢查操作規(guī)程1、尿液培養(yǎng)常見(jiàn)病原菌革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌金黃色葡萄球菌淋病奈瑟菌腸球菌大腸埃希菌A群鏈球菌變形桿菌腐生葡萄球菌肺炎克雷伯菌表皮葡萄球菌產(chǎn)氣腸桿菌結(jié)核分支桿菌沙門菌種銅綠假單胞菌沙雷菌2、標(biāo)本收集、尿液標(biāo)本的采集可采用多個(gè)辦法：有中段尿采集法、膀胱穿刺法、腎盂尿采集法，而常規(guī)是取中段尿作細(xì)菌培養(yǎng)。、取中段尿作培養(yǎng)時(shí)先要進(jìn)行前尿道的清洗消毒，以免前尿道寄生菌群污染標(biāo)本。、如采用其它辦法收集標(biāo)本，必須由臨床醫(yī)生根據(jù)臨床診療需要而執(zhí)行收集術(shù)，并在檢查單上寫明。3、檢查環(huán)節(jié)、涂片檢查3.1.1、普通細(xì)菌及淋病奈瑟菌涂片：以無(wú)菌操作吸取尿液10ml，3000r/min離心15min，去上清液，取沉淀涂片，革蘭氏染色鏡檢，作初步報(bào)告。如查見(jiàn)革蘭氏陰性雙球菌，呈腎形位于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外，報(bào)告“找到革蘭陰性雙球菌，存在于細(xì)胞內(nèi)外，形似淋病奈瑟菌”。如未查見(jiàn)上述細(xì)菌可報(bào)告“未發(fā)現(xiàn)革蘭陰性雙球菌”。3.1.2、念珠菌涂片：取尿液沉淀物放于清潔玻片上，覆以蓋玻片，制成涂片，用高倍鏡檢查。革蘭染色后，如發(fā)現(xiàn)發(fā)亮的芽生孢子和假菌絲，就可報(bào)告“霉菌孢子及菌絲”。3.1.3、結(jié)核分枝桿菌：取尿液10ml，4000r/min離心30min，取沉淀物涂片，抗酸染色，鏡檢。如找到紅色桿菌，可報(bào)告“查到抗酸桿菌”。、普通細(xì)菌培養(yǎng)(細(xì)菌計(jì)數(shù))：用定量接種環(huán)取尿液10ul接種血平板，35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)，觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，并計(jì)數(shù)菌落數(shù)，乘以1000，求出每毫升尿液的菌落數(shù)。根據(jù)菌落特性、涂片染色成果，進(jìn)行鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)，如培養(yǎng)48小時(shí)無(wú)菌生長(zhǎng)，即報(bào)告“無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)”、特殊菌培養(yǎng)：淋病奈瑟菌培養(yǎng)，選用專用巧克力瓊脂平板，接種后放入二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)。4、檢查程序分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)淋病奈瑟菌培養(yǎng)報(bào)告鑒定、藥敏實(shí)驗(yàn)涂片染色鏡檢血平板、麥康凱平板離心、沉淀涂片染色（革蘭及抗酸染色）尿標(biāo)本初步報(bào)告專用巧克力培養(yǎng)基（5%～10%CO2，35℃,18～24h）5、成果報(bào)告：、尿液細(xì)菌培養(yǎng)檢查必須報(bào)告細(xì)菌的種屬、菌落計(jì)數(shù)(cfu/m1)及藥敏成果。、革蘭氏陰性菌落計(jì)數(shù)不小于105cfu/ml，革蘭氏陽(yáng)性菌計(jì)數(shù)不小于104cfu/ml，真菌不小于103cfu/ml有診療意義。、普通常規(guī)結(jié)核培養(yǎng)要8周方能報(bào)告。陽(yáng)性成果可提前報(bào)告。但不做菌落計(jì)數(shù)只報(bào)告“抗酸桿菌生長(zhǎng)”的報(bào)告，如做了進(jìn)一步的分型和鑒定，才干報(bào)告“有××型結(jié)核桿菌生長(zhǎng)”。、用專用培養(yǎng)基培養(yǎng)淋球菌經(jīng)鑒定可直接報(bào)告“有淋球菌生長(zhǎng)”但不做菌落計(jì)數(shù)，如涂片發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)或外有革蘭氏陰性雙球菌可報(bào)告“發(fā)現(xiàn)革蘭陰性雙球菌”。、如尿液培養(yǎng)同時(shí)有三種或以上細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)，可視為污染標(biāo)本，建議重留送檢。消化道感染病原體檢查操作規(guī)程1、糞便標(biāo)本中常見(jiàn)病原菌革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌金黃色葡萄球菌傷寒及其它沙門菌結(jié)核分支桿菌志賀菌屬難辨梭菌致病大腸埃希菌白色念珠菌(ETEC、EPEC、EIEC、EHEC)弧菌屬菌種氣單胞、鄰單胞菌種小腸結(jié)腸炎耶爾森菌彎曲菌2、標(biāo)本采集、自然排便采集法：自然排便后，挑取膿血、粘膜部分的糞便2～3g，液體糞便取絮狀物置于大便培養(yǎng)管或增菌液中送檢。、直腸肛管法：用大便培養(yǎng)用的肛管直接插入肛門成人4～5cm，幼兒2～3cm，輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)多次，目的是使直腸表面粘液能通過(guò)肛管孔進(jìn)入肛管內(nèi)。然后拔出放入大便培養(yǎng)管中送檢。3、檢查環(huán)節(jié)、涂片檢查糞便標(biāo)本因多個(gè)正常菌群含量甚多而普通不作直接涂片找致病菌，只有懷疑霍亂弧菌及菌群失調(diào)所致腹瀉時(shí)，才作直接涂片檢查。、各項(xiàng)的涂片檢查均按染色辦法進(jìn)行，但大便檢查霍亂弧菌的解決程序：3.2.1、染色檢查：將米泔樣的標(biāo)本涂2張片用乙醇固定后染色，觀察弧菌有無(wú)呈魚群狀排列。3.2.2懸滴檢查：取患者糞便制成懸滴涂片，霍亂弧菌古典型和EL-Tor型均呈現(xiàn)極活潑的穿梭狀運(yùn)動(dòng)。3.2.3制動(dòng)檢查：運(yùn)動(dòng)活潑的弧菌涂片加人霍亂弧菌診療血清后，在顯微鏡下觀察，若原運(yùn)動(dòng)活潑的現(xiàn)象停止，為制動(dòng)實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。、大便標(biāo)本的培養(yǎng)目的是培養(yǎng)致病菌或追蹤病人有否菌群失調(diào)現(xiàn)象，無(wú)特殊規(guī)定作普通致病菌培養(yǎng)的標(biāo)本接種麥康凱、SS平板各一種。、菌群失調(diào)的細(xì)菌學(xué)檢查：選用多個(gè)培養(yǎng)基涉及SS、麥康凱、血平板、高鹽甘露醇鹽瓊脂平板、Campy-BA血瓊脂平板和沙氏瓊脂等，目的是使更多的菌群得到生長(zhǎng)，以利于檢查腸道的細(xì)菌狀況。、霍亂弧菌的培養(yǎng)：直接取患者米泔樣糞便，接種于堿性蛋白胨水增菌液和4號(hào)平板，35℃培養(yǎng)6～8h，再轉(zhuǎn)種一只4號(hào)平板。35℃培養(yǎng)18～24h后形成較大、菌落中間為灰黑色、有光澤、隆起、濕潤(rùn)的菌落，如潑水狀。挑取可疑菌落5～10個(gè)與霍亂多價(jià)“O診療血清作玻片凝集實(shí)驗(yàn)，如為陽(yáng)性，則立刻報(bào)告，并將可疑菌送疾病控制中心確認(rèn)。、真菌培養(yǎng)：真菌性腹瀉多繼發(fā)于抗生素治療后，常見(jiàn)的真菌腹瀉多由白色假絲酵母菌引發(fā)。將標(biāo)本接種于沙氏平板及血平板上，置27℃和35報(bào)告鑒定、藥敏實(shí)驗(yàn)報(bào)告鑒定、藥敏實(shí)驗(yàn)涂片檢查菌落觀察觀察動(dòng)力革蘭氏染色SS、麥康凱平板沙氏平板、血平板等沙門氏菌、志賀氏菌霍亂弧菌涂片檢查分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)便或肛拭子5、成果報(bào)告糞便培養(yǎng)的報(bào)告方式應(yīng)以分離目的菌種的成果而定，如：現(xiàn)在常規(guī)以SS培養(yǎng)基分離糞便中的致病菌，陽(yáng)性者應(yīng)報(bào)告“檢出沙門菌或檢出志賀菌”，陰性者報(bào)告“未檢出沙門菌或未檢出志賀菌”。其它培養(yǎng)成果報(bào)告方式與上述原則相似。膿汁及病灶分泌物細(xì)菌學(xué)檢查操作規(guī)程1、膿汁及病灶分泌物培養(yǎng)常見(jiàn)病原菌革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌葡萄球菌腸桿菌科細(xì)菌鏈球菌假單胞菌炭疽芽孢桿菌擬桿菌破傷風(fēng)芽孢桿菌腐敗謝瓦納拉菌產(chǎn)氣莢膜梭菌嗜血桿菌結(jié)核分枝桿菌產(chǎn)堿桿菌放線菌、奴卡菌弧菌屬細(xì)菌念珠菌氣單胞菌2、標(biāo)本采集：標(biāo)本由臨床醫(yī)師行無(wú)菌操作術(shù)采集，但應(yīng)注意下列幾點(diǎn)：、閉鎖性膿腫疑為厭氧菌感染時(shí)，取材后立刻將空氣排空，同時(shí)針尖插入橡皮塞內(nèi)避免空氣進(jìn)入，連同注射器一并送檢。、開(kāi)放膿腫、膿性分泌物可在患部直接用棉拭或紗布擦抹，如為瘺管亦可在無(wú)菌操作下取組織碎片分散在無(wú)菌鹽水中。、燒傷創(chuàng)面的分泌物，用滅菌棉拭取多部位創(chuàng)面的膿液或分泌物，置無(wú)菌試管中送檢。、取尿道分泌物必須先清洗、消毒尿道后用擠壓法使分泌物從尿道溢出，用無(wú)菌生理鹽水浸濕拭子直接采集標(biāo)本。如女性做宮頸分泌物細(xì)菌培養(yǎng)，應(yīng)盡量避免雜菌污染。、組織臟器碎片的收集，先要消毒表面的污染菌，后用無(wú)菌刀切開(kāi)，取內(nèi)容物及碎片分散于無(wú)菌生理鹽水中，然后增菌、接種，如活體微量標(biāo)本可直接放人肉湯增菌培養(yǎng)基中增菌。3、檢查環(huán)節(jié)、涂片檢查：膿汁及分泌物標(biāo)本均應(yīng)做涂片檢查。涂片做革蘭氏染色鏡檢，根據(jù)形態(tài)和染色特點(diǎn)，可報(bào)告“找到革蘭氏×性菌，形似××菌”或報(bào)告“未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌”。涂片檢查涉及涂片找細(xì)菌、淋球菌、酵母菌等。、培養(yǎng)普通細(xì)菌培養(yǎng)：標(biāo)本接種血平板、麥康凱平板各一只，35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)，根據(jù)菌落特性和形態(tài)染色，進(jìn)行鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)，如培養(yǎng)48小時(shí)無(wú)菌生長(zhǎng)，即報(bào)告“無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)”4、報(bào)告成果、涂片報(bào)告“找到革蘭氏×性菌”，淋球菌要報(bào)告在白細(xì)胞內(nèi)外與否發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性雙球菌。、對(duì)正常無(wú)菌部位的感染，從膿汁或分泌物分離到細(xì)菌，都有臨床意義，按分離鑒定成果報(bào)告細(xì)菌名稱及藥敏實(shí)驗(yàn)。報(bào)告鑒定、藥敏實(shí)驗(yàn)報(bào)告鑒定、藥敏實(shí)驗(yàn)涂片鏡檢觀察菌落血平板巧克力平板麥康凱平板需氧培養(yǎng)初步報(bào)告涂片染色（革蘭氏染色、抗酸染色等）膿汁、創(chuàng)傷分泌物生殖系統(tǒng)標(biāo)本的解決1、生殖系統(tǒng)標(biāo)本培養(yǎng)的重要病原菌革蘭陽(yáng)性菌革蘭陰性菌葡萄球菌淋病奈瑟菌腸球菌大腸埃希菌化膿性鏈球菌擬桿菌厭氧鏈球菌銅綠假單胞菌結(jié)核分枝桿菌變形桿菌2、標(biāo)本收集：陰道、子宮頸及前列腺等分泌物應(yīng)由臨床醫(yī)師采集，收集于無(wú)菌試管內(nèi)送檢。3、涂片檢查、普通細(xì)菌、淋病奈瑟菌和杜克雷嗜血桿菌：革蘭染色鏡檢作初步報(bào)告。、結(jié)核桿菌：抗酸染色鏡檢后作初步報(bào)告。4、檢查過(guò)程：用棉拭子劃完第一區(qū)后，用接種環(huán)繼續(xù)分區(qū)劃線，35℃革蘭氏染色抗酸染色需氧培養(yǎng)革蘭氏染色抗酸染色需氧培養(yǎng)厭氧培養(yǎng)血平板巧克力平板（CO2環(huán)境）麥康凱平板35℃報(bào)告鑒定、藥敏實(shí)驗(yàn)厭氧血平板、巧克力平板35℃涂片生殖系統(tǒng)標(biāo)本6、成果報(bào)告：報(bào)告細(xì)菌鑒定及藥敏實(shí)驗(yàn)成果?？咕幤访舾袑?shí)驗(yàn)若只根據(jù)與否出現(xiàn)抑菌環(huán)而不考慮抑菌環(huán)的直徑大小，來(lái)判斷細(xì)菌與否對(duì)抗菌藥品敏感的實(shí)驗(yàn)辦法，其成果是不對(duì)的的。而紙片擴(kuò)散法實(shí)驗(yàn)是應(yīng)用原則的辦法學(xué)原理，根據(jù)抑菌環(huán)直徑大小與最低抑菌濃度的有關(guān)性，結(jié)合臨床上已知敏感或耐藥菌株的狀態(tài)，其成果是可靠的。WHO推薦瓊脂擴(kuò)散法敏感實(shí)驗(yàn)(改良Kirby-Bauer法)，簡(jiǎn)稱K-B法，其目的在于技術(shù)的簡(jiǎn)樸和可重復(fù)性。本法特別合用于腸桿菌科細(xì)菌，也可用于快速生長(zhǎng)的致病菌，但不合用于其它細(xì)菌，如嗜血桿菌、奈瑟菌、專性厭氧菌及酵母樣菌等。無(wú)論用哪種辦法接種，只要質(zhì)控菌株的抑菌環(huán)在預(yù)期范疇內(nèi)，均可按同一解釋原則報(bào)告成果。但并非從感染患者分離到的微生物都必須做敏感實(shí)驗(yàn)，對(duì)于污染、機(jī)體共生的正常細(xì)菌群和那些與感染無(wú)關(guān)的細(xì)菌，可不必做敏感實(shí)驗(yàn)，只有那些被認(rèn)為引發(fā)感染的微生物，應(yīng)先分純、鑒定菌種后再做敏感實(shí)驗(yàn)。1、實(shí)驗(yàn)用材料、培養(yǎng)基Kirby-Bauer法指定用Mueller-Hinton瓊脂。數(shù)年大量的有關(guān)敏感實(shí)驗(yàn)的辦法學(xué)研究，均采用該培養(yǎng)基，維持細(xì)菌正常發(fā)育，絕大多數(shù)細(xì)菌在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。此培養(yǎng)基不拮抗抗菌藥品活性以及商品的批間差別等方面均優(yōu)于其它培養(yǎng)基。若檢測(cè)肺炎鏈球菌的敏感性時(shí)，在培養(yǎng)基中加5％的脫纖維羊血，制成血平板。測(cè)嗜血桿菌及淋病奈瑟菌的敏感性時(shí)，在培養(yǎng)基中須加入1％血紅素和ml輔酶I后應(yīng)校正pH～。制備MH瓊脂平板應(yīng)用直徑90cm平皿。在水平的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上傾制。瓊脂厚為4mm，允許誤差為土lmm。瓊脂凝固后，應(yīng)測(cè)一下pH與否對(duì)的。瓊脂于板應(yīng)放4℃保存，在7日內(nèi)用完。、藥品紙片抗菌藥品紙片直徑約為～6.35mm，每片的吸水量約20μl。采用K-B法，紙片的藥品含量必須與該法規(guī)定的一致，不得任意更改。藥品紙片能夠購(gòu)置，也可自制，用前必須做質(zhì)量鑒定。用下列兩個(gè)指標(biāo)鑒定紙片的質(zhì)量：①片間差：是衡量不同紙片含藥與否均一的指標(biāo)。測(cè)定辦法：以質(zhì)控菌株接種M-H瓊脂平板，一塊平板上貼6張相似的紙片。35C過(guò)夜，培養(yǎng)后，統(tǒng)計(jì)6個(gè)抑菌直徑，其最大和最小之差不應(yīng)不小于1～2mm。②精確度：鑒定紙片的實(shí)際含藥量與標(biāo)量與否一致。紙片的合理保存十分重要。藥品紙片必須在有干燥劑的容器內(nèi)低溫(-10℃下列)保存。只拿出少量放4℃?zhèn)淙粘９ぷ饔?。裝紙片的容器從冰箱取出后，必須在室內(nèi)溫暖l0分鐘以上才可打開(kāi)。如立刻打開(kāi)，空氣中的水分會(huì)冷凝在紙片上，容易潮解。細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按臨床的需要，決定敏感實(shí)驗(yàn)抗菌藥品的種類。同類抗菌藥品僅選用一種代表。應(yīng)根據(jù)測(cè)定細(xì)菌的屬種選藥。、質(zhì)控菌株K-B法質(zhì)量控制用菌株常規(guī)用：金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853。測(cè)定MH瓊脂與否適合做磺胺類實(shí)驗(yàn)，須用糞鏈球菌ATCC29212或33186。上述質(zhì)控菌株應(yīng)由衛(wèi)生部臨床檢查中心供應(yīng)。實(shí)驗(yàn)室保存菌株可用凍干法或保存在高層瓊脂中。常規(guī)質(zhì)量控制菌株應(yīng)每月更換1次。質(zhì)控菌株簡(jiǎn)便保存辦法：將新得到的凍干菌株接種含血的M-H平板復(fù)活。然后每株細(xì)菌接種10支高層瓊脂管，放置冰箱保存。每月取1支，傳種細(xì)菌供常規(guī)使用。待用剩至最后1支，再傳代在M-H平板上，接種一批高層瓊脂管備用。如此持續(xù)可避免原始菌種不接觸抗生素，以防變異。、菌液比濁管為確保敏感實(shí)驗(yàn)的精確度和精密度，必須對(duì)接種菌液的濃度做對(duì)應(yīng)控制。采用比濁的措施控制菌懸液濃度。接種菌液濃度為×l08/m1，濁度相稱于麥?zhǔn)显瓌t比濁管第1號(hào)管的1/2。比濁管配法以下：LBaCl2 LH2SO4 將二液置冰水浴中冷卻后混合，置螺口試管中，放室溫暗處保存。用前混勻。使用期為6個(gè)月。2、操作辦法、制備接種菌液：臨床標(biāo)本中分離的細(xì)菌做藥敏實(shí)驗(yàn)，應(yīng)挑取已分純的菌落4～5個(gè)制備菌懸液。制備菌液的辦法是挑選瓊脂平板上、形態(tài)相似的菌落移種于M-H液體培養(yǎng)基中，置35℃水箱中孵育4小時(shí)，校正濁度，或用接種環(huán)挑取菌落，懸浮于生理鹽水中，振蕩混勻后與原則比濁管比濁，以有黑字的白紙為背景，調(diào)節(jié)濁度與比濁管相似。此法制備接種菌液合用于任何細(xì)菌。、接種平板：制備好的接種菌液必須在15min內(nèi)使用。用滅菌的棉拭子蘸取菌液；在管壁上旋轉(zhuǎn)擠壓幾次，去掉過(guò)多的菌液。用拭子涂布整個(gè)培養(yǎng)基表面，重復(fù)幾次，每次將乎板旋轉(zhuǎn)60°，最后沿平皿周邊繞兩圈，確保涂布均勻。、貼紙片：須待平板上的水分被瓊脂完全吸取后再貼紙片。用鑷子取紙片一張，貼在瓊脂平板表面，用鑷尖壓一下，使其貼平，紙片一貼就不可再拿起，因紙片中的藥品已擴(kuò)散到瓊脂中。每張紙片間距不少于24mm，紙片中心距平皿邊沿不少于15mm。直徑為90mm的平板最佳貼6張。貼上紙片后，須在15min內(nèi)放35℃孵箱培養(yǎng)。不可放在CO2環(huán)境中。、孵育：必須用35℃孵箱，平板在孵箱內(nèi)最佳單獨(dú)擺放，不超出二個(gè)疊在一起，否則中間的平板，達(dá)不到孵箱溫度而產(chǎn)生預(yù)擴(kuò)散的作用，平板孵育18～24h后，讀取成果。、鑒定成果：培養(yǎng)后取出平板，測(cè)量抑菌環(huán)的直徑。抑菌環(huán)的邊沿以肉眼見(jiàn)不到細(xì)菌明顯生長(zhǎng)為限。有的菌株可出現(xiàn)蔓延生長(zhǎng)，進(jìn)入抑菌環(huán)，磺胺藥在抑菌環(huán)內(nèi)會(huì)出現(xiàn)輕微生長(zhǎng)，這些都不作為抑菌環(huán)的邊沿。按抑菌環(huán)直徑判斷細(xì)菌的敏感性。消毒滅菌效果監(jiān)測(cè)醫(yī)院必須對(duì)消毒、滅菌效果定時(shí)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。滅菌合格率必須達(dá)成100％；不合格物品不得進(jìn)入臨床使用部門。1、使用中的消毒劑、滅菌劑：應(yīng)進(jìn)行生物和化學(xué)監(jiān)測(cè)。生物監(jiān)測(cè)：消毒劑每季度一次，其細(xì)菌含量必須<100cfu/ml，不得檢出致病性微生物：滅菌劑每月監(jiān)測(cè)一次，不得檢出任何微生物?；瘜W(xué)監(jiān)測(cè)：應(yīng)根據(jù)消毒、滅菌劑的性能定時(shí)監(jiān)測(cè)，如含氯消毒劑、過(guò)氧乙酸等應(yīng)每日監(jiān)測(cè)，對(duì)戊二醛的監(jiān)測(cè)應(yīng)每七天不少于一次。應(yīng)同時(shí)對(duì)消毒、滅菌物品進(jìn)行消毒、滅菌效果監(jiān)測(cè)，消毒物品不得檢出致病性微生物，滅菌物品不得檢出任何微生物。2、紫外線消毒：應(yīng)進(jìn)行日常監(jiān)測(cè)、紫外燈管照射強(qiáng)度監(jiān)測(cè)和生物監(jiān)測(cè)。日常監(jiān)測(cè)涉及燈管應(yīng)用時(shí)間、累計(jì)照射時(shí)間和使用人簽名。對(duì)新的和使用中的紫外燈管內(nèi)進(jìn)行照射強(qiáng)度監(jiān)測(cè)，新燈管的照射強(qiáng)度不得低于100uW/cm2。使用中燈管不得低于70uw/cm2照射強(qiáng)度監(jiān)測(cè)應(yīng)每六個(gè)月一次、生物監(jiān)測(cè)必要時(shí)進(jìn)行，經(jīng)消毒后的物品或空氣中的自然菌應(yīng)減少%以上，人工染菌殺滅率應(yīng)達(dá)成％。五、多個(gè)消毒后的內(nèi)窺鏡(如胃鏡、腸鏡、喉鏡、氣管鏡等)及其它消毒物品：應(yīng)每季度進(jìn)行監(jiān)測(cè)，不得檢出致病微生物。3、多個(gè)消毒后的內(nèi)窺鏡(如胃鏡、腸鏡、喉鏡、氣管鏡等)及其它消毒物品：應(yīng)每季度進(jìn)行監(jiān)測(cè)，不得檢出致病微生物。4、多個(gè)滅菌后的內(nèi)窺鏡(如腹腔鏡、關(guān)節(jié)鏡、膽道鏡、膀胱鏡、胸腔鏡等)、活檢鉗和滅菌物品：必須每月進(jìn)行監(jiān)測(cè)，不得檢出任何微生物。5、血液凈化系統(tǒng)；必須每月對(duì)入、出透析器的透析液進(jìn)行監(jiān)測(cè)。當(dāng)疑有透析液污染或有嚴(yán)重感染病例時(shí)，應(yīng)增加采樣點(diǎn)，如原水口、軟化水出口、反滲水出口。透析液配液口等，并及時(shí)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。當(dāng)檢查成果超出規(guī)定原則值時(shí)，須再?gòu)?fù)查。原則值為：透析器入口液的細(xì)菌菌落總數(shù)必須≤200cfu/ml，出口液的細(xì)菌的落總數(shù)必須≤cfIu/ml，并不得檢出致病微生物。環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)：涉及對(duì)空氣、物體表面和醫(yī)護(hù)人員手的監(jiān)測(cè)。醫(yī)院應(yīng)每月對(duì)手術(shù)室、重癥監(jiān)護(hù)病房/室(ICU)、產(chǎn)房、母嬰室、新生兒病房、骨髓移植病房、血液病房、血液透析室、供應(yīng)室無(wú)菌區(qū)、治療室、換藥室等重點(diǎn)部門進(jìn)行環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)。當(dāng)有醫(yī)院感染流行，懷疑與醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)因素有關(guān)時(shí)，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。環(huán)境類別范圍標(biāo)準(zhǔn)空氣cfu/m3物體表面Cfu/cm2醫(yī)護(hù)人員手cfu/cm2Ⅰ類層流干凈手術(shù)室、層流干凈病房≤10≤5≤5Ⅱ類普通病房、產(chǎn)房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室無(wú)菌室、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房≤200≤5≤5Ⅲ類兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應(yīng)室清潔室、急診室、化驗(yàn)室、各類普通病房和房間≤500≤10≤10Ⅳ類傳染病科及病房—≤15≤151、進(jìn)入人體無(wú)菌組織、器官或接觸破損皮膚、粘膜的醫(yī)療用品必須無(wú)菌。2、接觸粘膜的醫(yī)療用品：細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20cfu/g或100cm2；致病性微生物不得檢出。3、接觸皮膚的醫(yī)療用品：細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20cfu/g或100cm2；致病性微生物不得檢出。4、使用中消毒劑：細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤100cfu/ml；致病性微生物不得檢出。5、無(wú)菌器械保存液：必須無(wú)菌。污物解決衛(wèi)生原則：污染物品無(wú)論是回收再使用的物品，或是廢棄的物品，必須進(jìn)行無(wú)害化解決。不得檢出致病性微生物。在可疑污染狀況下，進(jìn)行對(duì)應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)。采樣及檢查原則采樣后必須盡快對(duì)樣品進(jìn)行對(duì)應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)：送檢時(shí)間不得超出6h，若樣品保存于0～4℃1、空氣采樣及檢查辦法、采樣時(shí)間選擇消毒解決后與進(jìn)行醫(yī)療活動(dòng)之前期間采樣。、采祥高度與地面垂直高度80～150cm。、布點(diǎn)辦法室內(nèi)面積≤30M2，設(shè)一條對(duì)角線上取3點(diǎn)，即中心一點(diǎn)、兩端各距墻lm處各取一點(diǎn)；室內(nèi)面積>30m2，設(shè)東、西、南、北、中5點(diǎn)，其中東、西、南、北點(diǎn)均距墻、采樣辦法用9cm直徑普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)暴露5min后立刻送檢培養(yǎng)。、成果