沙門氏菌培訓(xùn)

沙門菌屬

〔Salmonella〕.簡(jiǎn)介沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義的人畜共患病之一。其病原沙門氏菌屬腸道細(xì)菌科，包括引起食物中毒，導(dǎo)致胃腸炎、傷寒和副傷寒的細(xì)菌。除可感染人外，還可感染很多動(dòng)物包括哺乳類、鳥(niǎo)、爬行類、魚(yú)、兩棲類及昆蟲(chóng)。.特性沙門氏菌革蘭氏陰性、兩端鈍圓的短桿菌〔比大腸桿菌細(xì)〕?！?.7～1.5μm〕×〔2～5μm〕散在。無(wú)莢膜和芽孢，都具有周身鞭毛〔除雞白痢沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌外〕，能運(yùn)動(dòng)，大多數(shù)具有菌毛，能吸附于宿主細(xì)胞外表或凝集豚鼠紅細(xì)胞。.培育特性A需氧及兼性厭氧菌。B在普通瓊脂培育基上生長(zhǎng)良好，培育24h后，構(gòu)成中等大小、圓形、外表光滑、無(wú)色半透明、邊緣整齊的菌落，其菌落特征亦與大腸桿菌類似〔無(wú)糞臭味〕。C鑒別培育基〔麥康凱、SS、伊紅美藍(lán)〕：普通無(wú)色菌落。D三糖鐵瓊脂斜面：斜面為紅色，底部變黑并產(chǎn)氣。

.生化特性1〕發(fā)酵葡萄糖，麥芽糖，甘露醇和山梨醇產(chǎn)氣。2〕不發(fā)酵乳糖、蔗糖和側(cè)金盞花醇。3〕不產(chǎn)吲哚、V-P反響陰性。4〕不水解尿素和對(duì)苯丙氨酸不脫氨。傷寒沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌及一部分雞白痢沙門氏菌發(fā)酵糖不產(chǎn)氣，大多數(shù)雞白痢沙門氏菌不發(fā)酵麥芽糖。.血清學(xué)特性沙門氏菌具有復(fù)雜的抗原構(gòu)造。普通沙門氏菌具有菌體(O)抗原、鞭毛(H)抗原和外表抗原(Vi莢膜或包膜抗原)三種抗原。.傳播途徑肉的污染肉及其制品的沙門氏菌檢出率美國(guó)為20%—25%、英國(guó)為9.9%、日本檢查進(jìn)口家禽的污染率為10.3%，國(guó)內(nèi)肉類沙門氏菌檢出率在1.1%—39.5%。蛋的污染蛋及其制品沙門氏菌檢出率為3.9%-43.7%，由于吃蛋引起鼠傷寒病的病例報(bào)告逐漸有添加的趨勢(shì)。環(huán)境污染食品在加工、運(yùn)輸、出賣過(guò)程中往往被沙門氏菌污染。沙門氏菌在糞便、土壤、食品、水中可生存5個(gè)月至2年之久。傳播問(wèn)題恢復(fù)期患者和無(wú)病癥的帶菌者也是常見(jiàn)的傳染源。.沙門氏菌檢測(cè)規(guī)范

—GB4789.4-2021.增菌和選擇性培育.25g樣品225mlBPW36℃8~18h培育1mlBPW增菌液+10mlSCTTB增菌液在42℃、SC增菌液在36℃各培育18～24小時(shí)1mlBPW增菌液+10mlTTB分別從TTB和SC增菌液中取1環(huán)，接種到BS和HE瓊脂上培育BS瓊脂在36℃培育40～48小時(shí)HE瓊脂在36℃培育18～24小時(shí)分別從BS和HE瓊脂上挑選可以菌落進(jìn)展TSI初步生化鑒定.可疑菌落斷定HE瓊脂BS瓊脂XLD瓊脂科瑪嘉顯色瓊脂陰性科瑪嘉顯色瓊脂陽(yáng)性.生化實(shí)驗(yàn)1、先從BS、HE或XLD或顯色培育基上挑取可疑菌落。2、接種至TSI，先在斜面上劃線，然后再底層穿刺。4、將TSI和NA至于36℃，18～24h培育3、將接種TSI終了的接種針不要滅菌，直接在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上劃線。.根據(jù)上表中可了解為只需在斜面和底層產(chǎn)堿、不產(chǎn)H2S、不產(chǎn)氣的情況下可不進(jìn)展生化鑒定，直接斷定為非沙門氏菌，其他任何情況均需進(jìn)展生化鑒定。TSI鑒定.三糖鐵生化實(shí)驗(yàn)底層產(chǎn)H2S底層產(chǎn)酸斜面產(chǎn)堿斜面底層產(chǎn)酸產(chǎn)堿底層產(chǎn)酸斜面產(chǎn)堿底層產(chǎn)H2S產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)H2S只在TSI產(chǎn)堿的情況下可斷定無(wú)沙門氏菌，其他任何情況均需進(jìn)展生化鑒定.生化實(shí)驗(yàn)1、預(yù)備一只2ml無(wú)菌生理鹽水試管、酒精燈、接種環(huán)、生化鑒定套裝。2、從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落，接種至生理鹽水中，制成0.5個(gè)麥?zhǔn)蠞岫取?、依次在各個(gè)安瓿〔bu\〕瓶中滴加菌懸液3滴。4、在賴氨酸脫羧酶肉湯及對(duì)照和氰化鉀及對(duì)照中個(gè)滴加無(wú)菌石蠟覆蓋。5、在36℃培育18～24h。.菌懸液制備ORO.5個(gè)麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙阂来卧诿總€(gè)安瓿瓶中滴加菌懸液2～3滴。第一步第二步第三步.生化實(shí)驗(yàn)預(yù)備色氨酸肉湯賴氨酸脫羧酶肉湯氨基酸脫羧酶肉湯尿素酶氰化鉀培育基 氰化鉀培育基對(duì)照甘露醇山梨醇β︱半乳糖苷.色氨酸肉湯經(jīng)36℃，18～24h培育后滴加靛基質(zhì)試劑，片刻察看結(jié)果陽(yáng)性為玫瑰紅色。色氨酸脫羧酶及對(duì)照和氰化鉀及對(duì)照轉(zhuǎn)種終了后需滴加液體石蠟覆蓋實(shí)驗(yàn)管方可進(jìn)展培育。靛基質(zhì)實(shí)驗(yàn)+時(shí)補(bǔ)做甘露醇山梨醇實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性后進(jìn)展血清學(xué)鑒定TSI-時(shí)，進(jìn)展ONPG實(shí)驗(yàn)，ONPG陰性時(shí)進(jìn)展血清學(xué)鑒定。H2S+、靛基質(zhì)-、尿素-、KCN-、賴氨酸+后進(jìn)展血清學(xué)鑒定。生化實(shí)驗(yàn).色氨酸吲哚實(shí)驗(yàn)陰性符合賴氨酸陽(yáng)性對(duì)照陰性0NPG陰性尿素酶陰性KCN及對(duì)照陰性甘露醇山梨醇陽(yáng)性符合符合符合符合符合血清學(xué)鑒定.沙門氏菌的分類沙門氏菌屬分為兩個(gè)種：腸道沙門氏菌(種)腸道亞種、薩拉姆亞種、亞利桑那亞種、雙相亞利桑那沙門氏菌、豪頓沙門氏菌及因迪卡沙門氏菌(6個(gè)亞種)邦戈?duì)柹抽T氏菌(種).沙門氏菌的分類及命名

-沙門氏菌的分類、命名.沙門氏菌

—抗原.O抗原也稱菌體抗原，是細(xì)胞壁的組成成分Vi抗原是一種特殊的菌體抗原，屬于K抗原群〔如傷寒沙門氏菌、丙型副傷寒沙門氏菌和都柏林沙門氏菌都含有Vi抗原〕H抗原〔即鞭毛抗原〕H抗原與抗血清的反響成絮狀或絨狀。大部分沙門氏菌H抗原都具有兩相。第一相被稱為特異性相，第二相為非特異性相。O、H、Vi抗原.—vi抗原

因與毒力有關(guān)而命名為vi抗原。

由聚-n-乙酰-d-半乳糖胺糖醛酸組成。

不穩(wěn)定，經(jīng)60℃加熱、石碳酸處置或人工傳代培育易破壞或喪失。

Vi抗原存在于細(xì)菌外表，可阻止o抗原與其相應(yīng)抗體的反響。vi抗原的抗原性弱。當(dāng)體內(nèi)菌存在時(shí)可產(chǎn)生一定量抗體；細(xì)菌被去除后，抗體也隨之消逝。

故測(cè)定vi抗體有助于對(duì)傷寒帶菌者的檢出。

新從患者標(biāo)本中分別出的傷寒桿菌、丙型副傷寒桿菌等有此抗原。

.—O抗原

為脂多糖，性質(zhì)穩(wěn)定。

比較耐熱，100℃不被破壞，也不易被酒精破壞；

O抗原以阿拉伯?dāng)?shù)字表示，從1排到67，但刪去了9個(gè)抗原，如今有58個(gè)抗原；

凡含有群特異性共同抗原的菌型歸類為一個(gè)O群，以主要抗原來(lái)表示，某些次要抗原可以出如今多個(gè)群中。.-H抗原H抗原存在于鞭毛之中，為蛋白質(zhì)。由肽鏈中氨基酸的陳列順序及空間構(gòu)型決議其特異性。不耐熱，經(jīng)加熱和用乙醇及堿處置易變性。H抗原常有兩相的變異。第一相為特異相，用小寫英文字母表示，如：a、b、I、e、h等。第二相為非特異相，用阿拉伯?dāng)?shù)字表示，如：1、2、5等。但也有少數(shù)菌含有第一相中的抗原e、n、x等成分。.A～F群

對(duì)應(yīng)的O價(jià)抗原.

沙門氏菌抗原表中符號(hào)意義：__指溶原形狀下O因子可以并存，和平共處。{}指O因子不相容，只能有一種。

[]指O或H因子有存在或不存在的能夠性。.O10、O15、O15，O34價(jià)抗原不相容只存在一種。都柏林沙門氏菌存在或不存在外表Vi抗原。西翰普頓沙門氏菌、都柏林沙門氏菌屬于單相菌，H抗原只存在第一項(xiàng)。H抗原第二項(xiàng)H1和H2價(jià)抗原存在或不存在O1價(jià)抗原與其他抗原和平共處，O5、O27價(jià)抗原存在或不存在。.沙門氏菌菌型的表示方法血清型以數(shù)字和字母表示.例如:查考夫曼-懷特沙門氏菌屬抗原表.鼠傷寒沙門氏菌:O抗〔1，4，[5]，12〕，第Ⅰ相H抗原〔i〕第Ⅱ相H抗原(1,2)。它的血清型應(yīng)表示為:鼠傷寒沙門氏菌〔1，4，[5]，12：i：1，2〕.沙門氏菌的斷定原那么采用血清學(xué)的方法,按照考夫曼-懷特沙門氏菌屬抗原表解斷定菌型..考夫曼-懷特沙門氏菌屬抗原表[]內(nèi)的O抗原能夠存在或不存在。[]內(nèi)的H抗原能夠是稀有的，正常情況下普通不存在。

菌名

原名

O抗原

H抗原

第1相

第2相

基桑加尼沙門氏菌S.kisangani1,4,[5],12a1,2

維也納沙門氏菌S.wien1,4.12,27b1,w埃森沙門氏菌S.essen4,12g,m-金斯敦沙門氏菌S.kingston1,4,[5],12,27g,s,t[1,2]鼠傷寒沙門氏菌S.typhimurium1,4,[5],12i1,2

印地安納沙門氏菌S.indiana1,4,12z1,7.沙門氏菌的血清鑒定的方法用O、H和Vi因子血清與待檢的菌株作玻片凝聚實(shí)驗(yàn)。1.先用O因子血清確定菌株所屬的O群及O抗原的各種成分。2.再用H因子血清檢查其第1相和第2相的H抗原以確定血清型。3.必要時(shí)還要用Vi血清檢查(目前有3種)。.1.先用A~F多價(jià)O血清檢查，確定菌株能否在A~F六個(gè)O群的范圍內(nèi)。2.再用代表六個(gè)O群的O因子血清檢查，即O2〔A〕、O4〔B〕、O7〔C1〕、O8〔C2〕、O9〔D〕、O3，10〔E〕、O11〔F〕。3.確定O群之后，分別用HA(a、b、c、d、i、z10、z29〕HB、HC、HD四種多價(jià)H血清檢查。4.用3.所確定的多價(jià)H血清所包括的一切H因子血清逐一檢查定為第1相或第2相H抗原。5.檢出第1相H抗原而未檢出第2相H抗原，或檢出第2相H抗原而未檢出第1相H抗原的，要用位相變異的方法再檢查其另一個(gè)相。單相菌不用作位相變異檢查。6.綜合O和H因子血清以及Vi因子血清的檢查結(jié)果，按照考夫曼-懷特沙門氏菌屬抗原表解斷定沙門氏菌的菌型。沙門氏菌的血清型鑒定步驟.位相變異的解釋將一個(gè)雙相沙門氏菌的菌株在瓊脂平板上劃線分別，所得的菌落中，有的有第1相H抗原，有的那么有第2相H抗原。假設(shè)恣意挑取一個(gè)菌落在培育基上多次傳代，其后代又可出現(xiàn)部分是第1相而另一部分是第2相的菌落。這種兩個(gè)相的H抗原可以交相產(chǎn)生的景象稱為位相變異。雙相菌初次分別時(shí)，單個(gè)菌落的純培育往往只需一個(gè)相H抗原，鑒別時(shí)常只能檢出一個(gè)相，而測(cè)不出另一相。此時(shí)，可用知相血清誘導(dǎo)的位相變異實(shí)驗(yàn)來(lái)獲得未知的另一個(gè)相H抗原。.位相變異實(shí)驗(yàn)的方法簡(jiǎn)易平板法1.配制0.7~0.8%的半固體瓊脂培育基。2.在平板內(nèi)滴上一滴知的第1相或第2相血清因子，并作好標(biāo)志。3.然后傾注平板并烘干外表水分，在標(biāo)志部位的中間點(diǎn)種知第1相或第2相的新穎待檢菌株。4.培育后，其知相細(xì)菌的動(dòng)力遭到抑制，解離出另一相的細(xì)菌，并向周圍蔓延生長(zhǎng)，構(gòu)成一個(gè)大的菌落。5.檢查其菌落的邊緣部分，即可確定該菌株的另一相H抗原。6.該方法通常1~3天內(nèi)可以有結(jié)果。.位相變異實(shí)驗(yàn)的其他方法U形管法小玻管法小套管法軟瓊脂斜面法.59種沙門氏菌的血清列表

O1O2O4O5O7O8O9O10O11O14O15O19O20O27O34O46O3,19HaHbHcHdHf