蛋氨酸對(duì)反芻動(dòng)物血漿總蛋白的影響

蛋氨酸對(duì)反芻動(dòng)物血漿總蛋白的影響

提高動(dòng)物飼料的利用率，減少糞便中氮的排放，是獸醫(yī)生產(chǎn)的一個(gè)重要問(wèn)題。限制性氨基酸對(duì)動(dòng)物的維持、生長(zhǎng)、繁殖和泌乳等生命活動(dòng)極為重要。蛋氨酸和賴氨酸被認(rèn)為是反芻動(dòng)物的第一和第二限制性氨基酸。日糧氨基酸被吸收進(jìn)入肝臟后,一部分用于合成血漿蛋白,一部分轉(zhuǎn)化為尿素氮排泄出去,因此血漿蛋白的合成效率體現(xiàn)了日糧蛋白質(zhì)的利用效率。日糧氨基酸平衡和限制性氨基酸的水平是影響血漿蛋白合成效率的重要因素。研究表明,蛋氨酸對(duì)反芻動(dòng)物血漿氨基酸總量有重要影響,但也有研究表明,蛋氨酸對(duì)血清總蛋白沒(méi)有影響。因此蛋氨酸對(duì)反芻動(dòng)物血漿總蛋白的影響并不十分清楚。1材料和方法1.1試驗(yàn)動(dòng)物及分組購(gòu)買4只體重為(25.0±1.1)kg,膘情一致,身體健康的3～4月齡生長(zhǎng)期夏洛萊×無(wú)角陶賽特雜交公羊,分別安裝瘤胃瘺管和真胃瘺管,恢復(fù)20d后,用于試驗(yàn)研究,試驗(yàn)過(guò)程中綿羊在代謝籠內(nèi)進(jìn)行全消化道灌注。1.2氨基酸的配制試驗(yàn)動(dòng)物每天代謝所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)全部通過(guò)瘤胃和真胃灌注。灌注液中將混合氨基酸作為蛋白質(zhì)來(lái)源,混合氨基酸溶液按照Fraser等提出的反芻動(dòng)物必需氨基酸最佳組成進(jìn)行配制,以混合氨基酸中不同比例的蛋氨酸作為試驗(yàn)處理。使用非必需氨基酸———甘氨酸來(lái)調(diào)節(jié)各處理的氨基酸氮水平,以使各處理的氨基酸氮水平相等。本試驗(yàn)采用4×3不完全拉丁方設(shè)計(jì)。將綿羊分配到I、II、III和IV4個(gè)試驗(yàn)處理中,4個(gè)處理的蛋氨酸水平分別為0、1.76、3.52、7.04g/16gN。試驗(yàn)共進(jìn)行3期,各處理混合氨基酸的比例見(jiàn)表1。1.3混合氨基酸儲(chǔ)備液的成分除了酪蛋白溶液改為混合氨基酸儲(chǔ)備液以外,揮發(fā)性脂肪酸(VFA)、緩沖液、維生素、微量元素和礦物質(zhì)各儲(chǔ)備液中各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的成分和比例以及灌注液儲(chǔ)備液的稀釋與灌注量的計(jì)算方法均與Sun等相同。各處理混合氨基酸儲(chǔ)備液的成分見(jiàn)表1?；旌习被醿?chǔ)備液灌注量的計(jì)算方法為灌注量(g/d)=350×kgW0.75×1.43/0.0122×0.001(綿羊維持氮需要為350mg/kgW0.75/d,混合氨基酸提供1.43倍維持氮需要,氨基酸儲(chǔ)備液氮含量為0.0122gN/g)。1.4灌排并進(jìn)行試驗(yàn)采用多通道蠕動(dòng)泵進(jìn)行灌注。將揮發(fā)性脂肪酸(VFA)溶液和緩沖液(其中含有礦物質(zhì)溶液)通過(guò)瘤胃瘺管灌入瘤胃?；旌习被崛芤?其中含有維生素和微量元素溶液)通過(guò)真胃瘺管灌入真胃。每個(gè)試驗(yàn)期灌注10d,前7d為預(yù)試驗(yàn)期,后3d為正試期。每天從08:30開始灌注,20:30結(jié)束灌注。綿羊在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中不飼喂任何飼料,可以自由飲水。1.5抗凝采血管檢測(cè)在試驗(yàn)期的最后1d08:00灌注前和16:30,分別使用抗凝采血管(奧地利GreinerBio-one公司制造,抗凝劑為K2EDTA)采集15mL血液樣品,高速離心(2100g×15min)制備成血漿,保存在-20℃冰柜中。1.6樣品指標(biāo)的測(cè)定血漿總蛋白濃度由北京華英生物技術(shù)研究所利用雙縮脲比色法測(cè)定,試劑盒由北京華英生物技術(shù)研究所生產(chǎn),利用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行分析測(cè)定。1.7統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel進(jìn)行整理,采用SASv8.02軟件的GLM過(guò)程進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。2結(jié)果2.1灌注期間血漿總蛋白濃度的變化從表2可以看出,上午灌注前采集的血漿樣品中不同處理組的血漿總蛋白差異不顯著(P>0.05)。而在下午灌注過(guò)程中采集的血漿樣品中,隨著蛋氨酸水平的提高,血漿總蛋白濃度逐漸升高,其中處理IV與處理I差異顯著(P<0.05)。另外下午的血漿總蛋白與上午的血漿總蛋白相比,除了處理I外,血漿總蛋白均有所上升,但沒(méi)有達(dá)到顯著水平(P>0.05)。2.2相關(guān)關(guān)系與相關(guān)關(guān)系08:00灌注前采集的血漿樣品的血漿總蛋白濃度與蛋氨酸水平?jīng)]有顯著的相關(guān)關(guān)系。而下午灌注過(guò)程中,蛋氨酸水平(g/16gN)與血漿總蛋白濃度(g/L)之間呈現(xiàn)顯著的相關(guān)關(guān)系:y=3.302x2-0.298x+50.725(n=12,r2=0.593,P=0.019),見(jiàn)圖1。3討論3.1灌注前后血漿總蛋白的變化有研究表明,山羊日糧中添加過(guò)瘤胃保護(hù)蛋氨酸可以提高血漿總氨基酸的濃度,而也有研究表明,在飼喂基礎(chǔ)日糧的條件下灌注蛋氨酸對(duì)血漿或血清總蛋白沒(méi)有顯著影響。本試驗(yàn)從08:30至20:30連續(xù)12h灌注蛋氨酸,結(jié)果表明,灌注前不同處理組的血漿總蛋白濃度之間沒(méi)有顯著差異,而下午灌注過(guò)程中(16:30)不同處理組的血漿總蛋白濃度之間存在差異顯著,這可能是機(jī)體對(duì)血漿總蛋白濃度的自我調(diào)節(jié)平衡作用造成的。機(jī)體蛋白質(zhì)的代謝是蛋白質(zhì)合成與分解的動(dòng)態(tài)過(guò)程。據(jù)Davis等報(bào)道,一只40kg的綿羊每天的體蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)量為200～600g。綿羊吸收的氨基酸可以被利用,合成血漿蛋白,同時(shí)體蛋白被分解產(chǎn)生的氨基酸也可以被利用合成血漿蛋白,因此血漿蛋白的濃度同時(shí)受到日糧氨基酸吸收量和機(jī)體蛋白質(zhì)分解量的影響。肝臟是合成血漿蛋白的場(chǎng)所,有研究表明,營(yíng)養(yǎng)水平會(huì)影響到體蛋白分解,進(jìn)而會(huì)對(duì)血漿蛋白產(chǎn)生調(diào)控作用。低營(yíng)養(yǎng)水平條件下,體蛋白的分解量增加。因此,在本試驗(yàn)中,晚上停止灌注蛋氨酸以后,低蛋氨酸水平處理組機(jī)體的自我調(diào)節(jié)作用促使體蛋白分解上升,從而對(duì)血漿總蛋白起到平衡作用,導(dǎo)致早晨灌注前各組的血漿總蛋白水平?jīng)]有顯著差異。而在灌注蛋氨酸期間,雖然機(jī)體也存在著對(duì)血漿總蛋白濃度的自我調(diào)節(jié)作用,但與肝臟直接利用所吸收的游離氨基酸相比,這種調(diào)節(jié)作用相對(duì)較慢,因此血漿總蛋白濃度隨著蛋氨酸灌注水平的提高而上升。3.2影響血漿總蛋白濃度的因素本試驗(yàn)中,上午灌注蛋氨酸之前的血漿總蛋白濃度與蛋氨酸水平之間不存在顯著的相關(guān)關(guān)系。而在灌注蛋氨酸的過(guò)程中,蛋氨酸水平與血漿總蛋白濃度之間存在顯著的二次曲線相關(guān)關(guān)系。一方面,這進(jìn)一步說(shuō)明,綿羊機(jī)體對(duì)血漿總蛋白濃度具有一定的自我調(diào)節(jié)作用。其調(diào)節(jié)作用的