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1260型HPLC操作流程安捷倫HPLC1260操作流程主要內(nèi)容儀器的組成操作前準(zhǔn)備開機(jī)及關(guān)機(jī)工作站使用數(shù)據(jù)分析注意事項安捷倫HPLC1260操作流程儀器的組成主體
安捷倫1260HPLC
流動相瓶、四元泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器附件
電腦、顯示器、打印機(jī)等安捷倫HPLC1260操作流程儀器的組成安捷倫1260HPLC流動相瓶四元泵自動進(jìn)樣器柱溫箱二極管陣列檢測器安捷倫HPLC1260操作流程儀器的組成四元泵自動進(jìn)樣器柱溫箱二極管陣列檢測器排氣閥流動相瓶電源開關(guān)指示燈色譜柱安捷倫HPLC1260操作流程操作前準(zhǔn)備流動相選擇流動相過濾流動相超聲與脫氣流動相冷卻安捷倫HPLC1260操作流程操作前準(zhǔn)備流動相選擇分類:組成分-單組分和多組分
極性-極性、弱極性、非極性常用溶劑:甲醇、水、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、四氯化碳等
(溶劑最好為HPLC級,水為超純水)
其中多采用二元或多元組合溶劑作為流動相,通過調(diào)節(jié)各組分的比例改變流動相的極性,已達(dá)到最佳的分離效果,對于部分情況還可以加入緩沖鹽,調(diào)節(jié)出峰時間和達(dá)到改善峰型的效果。安捷倫HPLC1260操作流程操作前準(zhǔn)備流動相過濾為了除去流動相中的雜質(zhì),保護(hù)系統(tǒng)和色譜柱,在流動相使用完后,裝入新的溶劑前應(yīng)使用抽濾瓶對溶劑進(jìn)行過濾。濾膜濾膜:有機(jī)膜和水系膜,二者不能混用。一般HPLC流動相過濾使用孔徑為0.45m的濾膜。針對混合溶劑首選有機(jī)濾膜過濾。安捷倫HPLC1260操作流程操作前準(zhǔn)備流動相超聲與脫氣
為了除去溶解在流動相中得氣泡,降低基線噪音,在HPLC開機(jī)前應(yīng)把各溶劑瓶在超聲機(jī)中超聲30min左右。
對于溶解在流動相中的極微氣體,安捷倫1260HPLC四元泵中集合了脫氣機(jī),可以進(jìn)一步對混合后的流動相進(jìn)行脫氣處理。安捷倫HPLC1260操作流程操作前準(zhǔn)備流動相冷卻
流動相在超聲機(jī)中長時間超聲后,由于水分子振動摩擦,使水溫上升,因此流動相瓶中的溶劑也會被加熱。加熱后的流動相進(jìn)入液相系統(tǒng)和色譜柱后,會影響基線噪聲的增加,使平穩(wěn)時間延長。安捷倫HPLC1260操作流程開機(jī)及關(guān)機(jī)1260HPLC及化學(xué)工作站開機(jī)使用與關(guān)機(jī)打開計算機(jī)打開主機(jī)電源點擊儀器1聯(lián)機(jī)進(jìn)入工作站排氣(A/B/C/D)調(diào)節(jié)流速與流動相比例關(guān)閉排氣閥打開柱溫箱逐步增大流速檢查壓力穩(wěn)定后打開檢測器跑基線穩(wěn)定后清洗針與管路樣品命名進(jìn)樣檢測保存數(shù)據(jù)沖洗管路及關(guān)機(jī)安捷倫HPLC1260操作流程安捷倫HPLC1260操作流程開機(jī)及關(guān)機(jī)關(guān)機(jī)前,用90%水沖洗柱子和系統(tǒng)0.5-1小時,流量1.0mL/min,再用100%有機(jī)溶劑(甲醇)沖0.5小時,然后保存方法和儀器設(shè)置。退出化學(xué)工作站,及其它窗口,關(guān)閉計算機(jī)。
關(guān)掉液相主機(jī)各模塊電源開關(guān),拔掉電源插頭。做好儀器使用登記。安捷倫HPLC1260操作流程工作站使用進(jìn)入工作站主界面方法和各模塊參數(shù)設(shè)置跑基線樣品命名與進(jìn)樣檢測安捷倫HPLC1260操作流程工作站使用進(jìn)入工作站安捷倫HPLC1260操作流程工作站使用主界面安捷倫HPLC1260操作流程工作站使用方法和各模塊參數(shù)設(shè)置在各模塊中空白處點擊右鍵,選擇“方法”編輯參數(shù)。安捷倫HPLC1260操作流程儀器方法設(shè)置安捷倫HPLC1260操作流程儀器方法設(shè)置1bar≈14.5psi≈0.1MPa=100kPa不同儀器單位不同安捷倫HPLC1260操作流程儀器方法設(shè)置安捷倫HPLC1260操作流程儀器方法設(shè)置安捷倫HPLC1260操作流程工作站使用視圖→在線信號→信號窗口1安捷倫HPLC1260操作流程工作站使用跑基線至少平穩(wěn)30min安捷倫HPLC1260操作流程工作站使用單次樣品:樣品命名安捷倫HPLC1260操作流程工作站使用序列樣品:命名與序列表設(shè)置安捷倫HPLC1260操作流程工作站使用進(jìn)樣檢測樣品色譜圖安捷倫HPLC1260操作流程數(shù)據(jù)分析進(jìn)入儀器1脫機(jī)打開數(shù)據(jù)文件夾打開樣品色譜圖色譜峰編輯色譜峰數(shù)據(jù)打印報告色譜峰實例安捷倫HPLC1260操作流程數(shù)據(jù)分析打開儀器1脫機(jī)安捷倫HPLC1260操作流程數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)文件夾序列樣品數(shù)據(jù)單次樣品數(shù)據(jù)樣品數(shù)據(jù)色譜圖色譜圖編輯色譜峰數(shù)據(jù)安捷倫HPLC1260操作流程數(shù)據(jù)分析色譜峰手動積分安捷倫HPLC1260操作流程數(shù)據(jù)分析報告→打印報告主峰數(shù)據(jù)主峰要求:分離度﹥1.50.95≤對稱因子≤1.05塔板數(shù)8000以上安捷倫HPLC1260操作流程數(shù)據(jù)分析患者丙戊酸鈉血藥濃度檢測色譜圖環(huán)己烷羧酸丙戊酸鈉空白標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰實例安捷倫HPLC1260操作流程注意事項氘燈是易耗品,分析前應(yīng)最后開燈,不分析樣品應(yīng)及時關(guān)閉氘燈;安捷倫HPLC1260操作流程注意事項流動相不要使用多日存放的蒸餾水,一般不易超過三天(易長菌),影響基線平衡;儀器使用后,應(yīng)用90%水沖洗柱子和系統(tǒng)0.5-1h,流量1.0mL/min,再用100甲醇沖洗0.5h;安捷倫HPLC1260操作流程注意事項開機(jī)時,打開排氣閥,設(shè)置流動相為100%水,泵流量5.0mL/min,若此時顯示壓力>10bar,則應(yīng)更換排氣閥里的過濾白頭。安捷倫HPLC1260操作流程注意事項
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