中控色譜培訓(xùn)(氣相)

氣相色譜知識培訓(xùn)資料一、氣相色譜法概述 第2頁二、 氣相色譜使用注意事項及常見問題 第4頁三、 氣相色譜柱知識及常見問題 第6頁四、 氣相色譜分析測試常見問題及解決 第10頁第1頁共11頁一、氣相色譜法概述氣相色譜法系采用氣體為流動相（載氣）流經(jīng)裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測定的色譜方法。物質(zhì)或其衍生物氣化后，被載氣帶入色譜柱進(jìn)行分離，各組分先后進(jìn)入檢測器，用記錄儀、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號。氣相色譜的分離機(jī)制主要有吸附、分配等。對儀器的一般要求儀器為氣相色譜儀，氣相色譜儀由氣源、進(jìn)樣部分、色譜柱、檢測器和數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)組成。進(jìn)樣部分、色譜柱和檢測器的溫度均在控制狀態(tài)。溫度控制系統(tǒng)分為恒溫和程序升溫兩種。載氣氣相色譜法的流動相為氣體，稱為載氣，氦、氮和氫可用作載氣，可由高壓鋼瓶或高純度氣體發(fā)生器提供，經(jīng)過適當(dāng)?shù)臏p壓裝置，以一定的流速經(jīng)過進(jìn)樣器和色譜柱；根據(jù)供試品的性質(zhì)和檢測器種類選擇載氣，除另有規(guī)定外，氫火焰和電子捕獲檢測器常用載氣為氮氣，熱導(dǎo)檢測器常用載氣為氫氣。進(jìn)樣器進(jìn)樣方式一般可采用溶液直接進(jìn)樣或頂空進(jìn)樣。溶液直接進(jìn)樣采用微量注射器、微量進(jìn)樣閥或有分流裝置的氣化室進(jìn)樣；采用毛細(xì)管柱時，一般應(yīng)分流以免過載。頂空進(jìn)樣適于對固體和液體供試品中揮發(fā)性組分的分離和測定。色譜柱色譜柱為填充柱或毛細(xì)管柱。毛細(xì)管柱的材質(zhì)為玻璃或石英，內(nèi)壁或載體經(jīng)涂漬或交聯(lián)固定液，內(nèi)徑一般為0.25mm、0.32mm和0.53mm，柱長5?60m，固定液膜厚0.1?5.0“m，常用的固定液有甲基聚硅氧烷、不同比例組成的苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。新柱在使用前需老化以除去殘留溶劑及低分子量的聚合物，色譜柱如長期未用，使用前應(yīng)老化處理，使基線穩(wěn)定。檢測器適合氣相色譜法的檢測器有火焰離子化檢測器（FID）、熱導(dǎo)檢測器（TCD）、氮磷檢測器（NPD）、電子捕獲檢測器（ECD）、質(zhì)譜檢測器（MS）等。氫火焰離子化檢測器對碳?xì)浠衔镯憫?yīng)良好，適合檢測大多數(shù)藥物的分析。氫火焰離子化檢測器，用氫氣作為燃?xì)?，空氣作為助燃?xì)?。在使用氫火焰離子化檢測器時，檢測器溫度一般應(yīng)高于柱溫，并不得低于150°C，以免水氣凝結(jié)，通常為250?350C。數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)可分為記錄儀、積分儀以及計算機(jī)工作站等。色譜條件除檢測器種類、固定液品種及特殊指定的色譜柱材料不得任意改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長度、載體牌號、粒度、固定液涂布濃度、載氣流速、柱溫、進(jìn)樣量、檢測器的靈敏度等，均可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體品種并符合系統(tǒng)適用性試驗的要求。一般色譜圖約于30分鐘內(nèi)記錄完畢。測定法：（1） 內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量；（2） 外標(biāo)法測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量；（3） 面積歸一化法；（4） 標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量。第2頁共11頁二、氣相色譜使用注意事項及常見問題☆進(jìn)樣應(yīng)注意問題不要有氣泡，吸樣時要慢、快速排出再慢吸，反復(fù)幾次，10ul注射器金屬針頭部分體積0.6ul,有氣泡也看不到，多吸1-2ul把注射器針尖朝上氣泡上走到頂部再推動針桿排除氣泡，進(jìn)樣速度要快，但不易特快，每次進(jìn)樣保持相同速度，針尖到汽化室中部開始注射樣品?！畎惭b色譜柱安裝拆卸色譜柱必須在常溫下。2?毛細(xì)管色譜柱安裝插入的長度要根據(jù)儀器的說明書而定，不同的色譜汽化室結(jié)構(gòu)不同，所以插進(jìn)的長度也不同。我們?nèi)_色譜插進(jìn)的長度約為4cm?！顨錃夂涂諝獾谋壤龑ID檢測器的影響：氫氣和空氣的比例應(yīng)1：10，當(dāng)氫氣比例過大時FID檢測器的靈敏度急劇下降，在使用色譜時別的條件不變的情況下，靈敏度下降要檢查一下氫氣和空氣流速。氫氣和空氣有一種氣體不足點火時發(fā)出“砰”的一聲，隨后就滅火，一般當(dāng)你點火點著就滅，再點著隨后又滅是氫氣量不足。☆如何判斷FID檢測器是否點著火不同的儀器判斷方法不同，最有效的辦法是通過點火前后基流變化來判斷，點著火后，基流大小與點火前相比會有明顯變化，而且調(diào)節(jié)氫氣流量，基流也會跟著變化，也可用帶拋光面的扳手湊近檢測器出口，觀察其表面有無水汽凝結(jié)來判斷?！钊绾闻袛噙M(jìn)樣口密封墊是否該換進(jìn)樣時插針感覺特別松;用FID檢測器在相同的進(jìn)樣量進(jìn)樣后，出峰面積會比正常時明顯變小，說明密封墊漏氣該更換。更換密封墊不要擰的太緊，一般更換時都是在常溫，溫度升高后會更緊，密封墊擰的太緊會造成進(jìn)樣困難，常常會把注射器針頭弄彎?！钊绾芜x擇合適的密封墊密封墊分一般密封墊和耐高溫密封墊，汽化室溫度超過300°C時用耐高溫密封墊，耐高溫密封墊的一面有一層膜，使用時帶膜的面朝下?！钤鯓臃乐惯M(jìn)樣針彎很多做色譜分析工作的新手常常會把注射器的針頭和注射器桿弄彎，原因是：1?進(jìn)樣口擰的太緊，室溫下擰的太緊當(dāng)汽化室溫度升高時硅膠密封墊膨脹后會更緊，這時注射器很難扎進(jìn)去。2?位置找不好針扎在進(jìn)樣口金屬部位或針頭碰到進(jìn)樣器的襯管上。3?注射器桿彎是進(jìn)樣時用力太猛，進(jìn)口色譜帶一個進(jìn)樣器架，用進(jìn)樣器架進(jìn)樣就不會把注射器桿弄彎。因為注射器內(nèi)壁有污染，注射時將針桿推彎。注射器用一段時間就會發(fā)現(xiàn)針管內(nèi)靠近頂部有一小段黑的東西，這時吸樣注射感到吃力。清洗方法將針桿拔出，注入一點水，將針桿插到有污染的位置反復(fù)推拉，一次不行再注入水直到將污染物弄掉，這時你會看到注射器內(nèi)的水變的渾濁，將針桿拔出用濾紙擦一下，再用酒精洗幾次。分析的樣品為溶劑溶解的固體樣時，進(jìn)完第3頁共11頁樣要及時用溶劑洗注射器。5?進(jìn)樣時一定要穩(wěn)重，急于求快會把注射器弄彎的，只要你進(jìn)樣熟練了自然就快了?！钐岣叻蛛x度的幾種方法增加柱長可以增加分離度。減少進(jìn)樣量（固體樣品加大溶劑量）。提高進(jìn)樣技術(shù)防止造成兩次進(jìn)樣。4?降低載氣流速。降低色譜柱溫度。提高汽化室溫度。減少系統(tǒng)的死體積，主要是色譜柱連接要插到位，不分流進(jìn)樣要選擇不分流結(jié)構(gòu)的汽化室。毛細(xì)管色譜柱要分流，選擇合適的分流比。綜上所訴要根據(jù)具體情況在實驗中摸索，比如降低載氣流速、降低色譜柱溫度又會使色譜峰變寬，因此要看色譜峰型來改變條件。最終目的是達(dá)到分離好，出峰時間快?！钊绾吻逑次廴镜臍庀嗌V儀檢測器在色譜操作過程中，檢測器有時受固定相流失及樣品中的高沸點成分、易分解及腐蝕性物質(zhì)的作用而被玷污，以至不能正常進(jìn)行工作，因而提出了如何清洗檢測器的問題。當(dāng)玷污不太嚴(yán)重時，可不必卸下清洗，此時只需要將色譜柱取下，用一根管子將進(jìn)樣口與檢測器聯(lián)接起來，然后通載氣并將檢測器爐溫升至120度以上，從進(jìn)樣口先注入20微升左右的蒸餾水，再用幾十微升丙酮或氟里昂（Freonll3等）溶劑進(jìn)行清洗。在此溫度下保持1—2小時檢查基線是否平穩(wěn)，若仍不滿意可重復(fù)上述操作或卸下清洗。當(dāng)玷污比較嚴(yán)重時，必須卸下清洗。先卸下收集極，正極，噴嘴等，若噴嘴是石英材料制成的，先將其放在水中進(jìn)行浸泡過夜。若噴嘴是不銹鋼等材料做成，則可與電極等一起，先小心用細(xì)砂紙（300—400#）打磨，再用適當(dāng)溶劑浸泡（如甲醇與苯1：1），也可以用超聲波清洗，最后用甲醇洗凈，放置于烘箱中烘干。注意勿用含鹵素的溶劑（如氯仿、二氯甲烷等）。以免與聚四氟乙烯材料作用，導(dǎo)致噪聲增加。洗凈后的各個部件，要用鑷子取，勿用手摸。烘干后裝配時也要小心，否則會再度玷污。裝入儀器后，先通載氣30分鐘，再點火升高檢測室溫度，最好先在、120度保持?jǐn)?shù)小時之后，再升至工作溫度?！疃恐貜?fù)性差故障排除引起定量不重復(fù)的原因是多方面的，一般可以歸結(jié)為兩大類：一類為單純性靈敏度變化型，即除了定量重復(fù)性不合格外，其它指標(biāo)未發(fā)現(xiàn)異常；另一類為伴隨性靈敏度變化型，即除靈敏度變化之外還伴隨有其它異?，F(xiàn)象出現(xiàn)，包括基線不穩(wěn)定性、峰保留時間變化及產(chǎn)生峰形畸變等異?，F(xiàn)象。屬于第一類型故障的原因，主要是：進(jìn)樣技術(shù)不佳，注射器有堵漏，樣品制備不均勻，進(jìn)樣口污染物堆積以及氣路存在漏氣現(xiàn)象等。屬于第二類型故障的原因，主要是：載氣流量變化，檢測器玷污、過載，柱溫變化以及檢測器操作條件（如氫氣、極化電壓、脈沖電壓等）發(fā)生變化?？紤]到各種故障產(chǎn)生可能性的大小以及故障鑒別的方便性，制定出下述檢測方案：第4頁共11頁（1） 進(jìn)樣技術(shù)檢查：進(jìn)樣技術(shù)不佳是造成色譜峰不重復(fù)的最可能原因。它通常表現(xiàn)為峰高/峰面積忽大忽小，峰高/峰面積大小變化無規(guī)則。提高進(jìn)樣重復(fù)性的關(guān)鍵，在于始終保持進(jìn)樣操作各個步驟的重復(fù)性。這包括取樣操作，取樣到進(jìn)樣期間的空閑時間，進(jìn)針快慢及拔出注射器的早晚。通常操作人員在經(jīng)過較多地進(jìn)樣重復(fù)性訓(xùn)練之后，可以達(dá)到所需的要求。（2） 注射器檢查：操作人員進(jìn)樣技術(shù)提高后，色譜峰靈敏度仍然無顯著改觀，需認(rèn)真檢查注射器本身是否有堵塞或泄漏現(xiàn)象。必要時更換一個好的注射器重新進(jìn)樣試驗。（3） 樣品均勻性檢查：制備的樣品在樣品瓶中混合不均勻或每次取樣時注射器對樣品產(chǎn)生玷污以及樣品揮發(fā)等都會影響出峰靈敏度的重復(fù)性（不能漏過此項檢查）。定量不重復(fù)由上述三種原因引起的可能性很大，而且都和進(jìn)樣操作密切相關(guān)，因此可一起進(jìn)行檢查。只有在上述檢查后無異常發(fā)現(xiàn)時才轉(zhuǎn)入接下的檢查步驟。（4） 伴隨現(xiàn)象觀察：在檢查靈敏度情況的同時注意是否有下述異?，F(xiàn)象發(fā)生，包括基線是否穩(wěn)定，出峰保留時間是否重復(fù)，峰形是否有畸變?nèi)N情況，如果出現(xiàn)其中一種，應(yīng)先按所出現(xiàn)的故障進(jìn)行排除，再重新進(jìn)行定量重復(fù)性測試。沒發(fā)現(xiàn)伴隨異?，F(xiàn)象時，應(yīng)轉(zhuǎn)入下面的檢查步驟。（5） 進(jìn)樣口污染及系統(tǒng)漏氣檢查：取下進(jìn)樣口隔墊，觀察進(jìn)樣口內(nèi)是否有污染或堆積物，如果有，需進(jìn)行清除和清洗。在確信進(jìn)樣口無嚴(yán)重污染及氣路無漏氣的情況下進(jìn)行（6）的檢查。（6） 特種原因檢查：對有些檢測器而言，某些原因所伴隨的故障異常不太明顯，易被忽略掉,因此應(yīng)按照此項進(jìn)行檢查，以便不漏過可能發(fā)生故障的因素。a） 對FID來說，極化電壓較低及氫氣流量不穩(wěn)，有可能導(dǎo)致靈敏度變化而無其它明顯異常。對此可首先測試極化電壓大小以確定極化電壓是否太低，過低的極化電壓以及無極化電壓都屬于故障。正常時極化電壓為150~300V。如極化電壓正常，則應(yīng)轉(zhuǎn)入放大器的靈敏檔觀察氫焰基始電流的變動情況，在氫氣流不穩(wěn)定時基流應(yīng)能呈現(xiàn)出擺動和漂移現(xiàn)象。b） 對于任何檢測器，樣品中的某些組分在檢測器中逐漸冷凝并累積，將會影響下一次進(jìn)樣后的靈敏度，情況嚴(yán)重時還會造成氣路堵塞。通常的解決方法也是適當(dāng)提高檢測器的溫度，以減少或消除樣品室的冷凝現(xiàn)象.☆小結(jié)氣相色譜種類很多，性能也各有差別。主要包括兩個系統(tǒng)。即氣路系統(tǒng)和電路系統(tǒng)。氣路系統(tǒng)主要有壓力表、凈化器、穩(wěn)壓閥、穩(wěn)流閥、轉(zhuǎn)子流量計、六通進(jìn)樣閥、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器等；電子系統(tǒng)包括各用電部件的穩(wěn)壓電源、溫控裝置、放大線路、自動進(jìn)樣和收集裝置、數(shù)據(jù)處理機(jī)和記錄儀等電子器件。要分析和判斷色譜儀的故障所在，就必須要熟悉氣相色譜的流程和氣、電路這兩大系統(tǒng)，特別是構(gòu)成這兩個系統(tǒng)部件的結(jié)構(gòu)、功能。色譜儀的故障是多種多樣的，而且某一故障產(chǎn)生的原因也是多方面的，必須采用部分檢查的方法，即排除法，才可能縮小故障的范圍。對于氣路系統(tǒng)出的故障，不外乎是各種氣體（特別是載氣）有漏氣的現(xiàn)象、氣體不好、氣體穩(wěn)壓穩(wěn)流不好等等。例如：基線若始終向下漂移，即“電平”值逐漸變小至負(fù)數(shù)，這極有可能是載氣泄漏，那么就要查找各個接頭部件是否有漏的現(xiàn)象，若不漏而基線仍漂移，則可能是電路系統(tǒng)的故障。第5頁共11頁三、氣相色譜柱知識及常見問題☆毛細(xì)管柱常見問答毛細(xì)管柱固定相有那幾種？他們的特點是什么？聚硅氧烷聚硅氧烷在用途的多用性，性質(zhì)的穩(wěn)定性上都有優(yōu)良的表現(xiàn)，所以也是目前最為常用的固定相。標(biāo)準(zhǔn)的聚硅氧烷是由許多單個的硅氧烷重復(fù)連接構(gòu)成。每個硅原子與兩個官能團(tuán)相連，官能團(tuán)的類犁和數(shù)量決定了同定相總體類型和性質(zhì)。常見的四種官能團(tuán)為甲基，氰丙基，三氟丙基和苯基。聚乙二醇聚乙二醇是另外一種廣泛應(yīng)用的固定相，不像聚硅氧烷那樣有多種取代基團(tuán)，聚乙二醇類固定相都是由100%固定聚合物組成。相對于聚硅氧烷，聚乙二醇的穩(wěn)定性、使用溫度范圍等都稍遜一籌。氣固固定相氣固固定相就是在管壁表面粘合一層很薄的小顆粒物質(zhì)，通常叫多孔層開口管柱(PLOT)。鍵合和交聯(lián)固定相交聯(lián)是將多個聚合物單體通過共價鍵進(jìn)行聯(lián)接，鍵合是將其再通過共價鍵與管壁表面相連。這樣處理的結(jié)果，使得固定相的熱穩(wěn)定性和溶劑穩(wěn)定性都有較大的提高。為什么會出現(xiàn)柱流失現(xiàn)象？所有的色譜柱都有柱流失的現(xiàn)象，來源于固定相由于各種原因降解而產(chǎn)生的被洗脫物質(zhì)。柱流失會隨著溫度的升高而加劇。一般，我們會在程序升溫的條件下做一次空白試驗，溫度要升至色譜柱的溫度上限，并持續(xù)該溫度10—15分鐘，這樣就可以得到該色譜柱的正常流失曲線圖。一般來說，極性固定相的流失率較高，較低溫度下，它們的流失就很明顯。隨著色譜柱的使用，柱流失會不斷的升高。色譜柱暴露于有氧環(huán)境(空氣)中或者持續(xù)在等于或接近色譜柱的上限溫度條件下被使用，都會加速色譜柱的流失。柱流失突然或快速的升高則可能是色譜柱有損壞或GC系統(tǒng)有問題出現(xiàn)。而持續(xù)在高于色譜柱上限溫度下操作使用，持續(xù)使色譜柱暴露在有氧環(huán)境中(通常由于泄漏)，或者不斷分析的樣品中有破壞性物質(zhì)，這些都有可能是問題的原因。溫度極限對色譜柱的使用有哪些影響？一根色譜柱通常有兩個溫度極限，溫度上限和溫度下限。如果在低于溫度下限的條件下實驗，得到的色譜峰又圓又寬(柱效降低)，雖然色譜柱并不會受到什么損壞，但這樣不能發(fā)揮色譜柱的正常功能。在達(dá)到下限溫度或是高于下限溫度時，得到的色譜峰會有明顯的好轉(zhuǎn)。溫度上限一般有兩個固定的數(shù)值。較低的是恒溫極限，在該溫度下色譜柱可以正常的使用，柱流失的壽命不會受到太大的影響。較高的數(shù)值是程序升溫的極限，在此溫度下色譜柱使用時間如果在10—15分鐘內(nèi)，色譜柱的流失和壽命不會受到太大的影響。但如果持續(xù)時間過長，則會增加色譜柱的流失，縮短色譜柱的壽命，固定相和熔融石英管的惰性都有可能被破壞。第6頁共11頁4?什么是色譜柱容量？與哪些參數(shù)有關(guān)？色譜柱容量是指色譜柱對一種溶質(zhì)可容納的最大量值，一旦超過此數(shù)值，該溶質(zhì)的色譜峰就會發(fā)生畸變，也就是說該溶質(zhì)超載。超載的色譜峰并不均衡，而且延固定方向變化。一般我們稱之為“鯊鰭”峰。柱容量與固定相的極性，膜的厚度，枉內(nèi)徑和溶質(zhì)的保留度等有關(guān)。如果色譜柱對一種溶質(zhì)的容量很高，則表明該溶質(zhì)與固定相的極性很相似（相似相溶）。如毛細(xì)管柱被污染，柱效和分辨率降低，有何方法使它恢復(fù)?是否可通過老化來解決？根據(jù)柱污染程度可采取不同的方法來解決，如果污染不嚴(yán)重，污染物沸點不是太高，可通過老化來解決，但老化溫度不可超過柱子的最高使用溫度，且一般要較長時間（8—30小時），如果污染較嚴(yán)重，或通過老化仍不能使柱性能恢復(fù)，那就必須采用溶劑清洗，清洗溶劑用的越多，對柱性能的損壞越大，清洗完后，在通載氣老化一定時間，如果柱性能恢復(fù)，便可繼續(xù)使用。必須指出：只有交聯(lián)柱才能清洗，對于非交聯(lián)柱，清洗柱會徹底失效，因為固定液被洗掉了，至于清洗用溶劑的選擇，可參考說明書。毛細(xì)管色譜分流進(jìn)樣時，非線性分流的主要原因是什么？1、 進(jìn)樣器溫度太低，樣品汽化不完全，發(fā)生分級分流。2、 進(jìn)樣器溫度太高，某些組分可能發(fā)生熱分解，也有的樣品可能發(fā)生催化分解，或樣品部分地被吸附在進(jìn)樣器內(nèi)表面上。3、 在分流點以前樣品沒有混合均勻或混合不充分。4、 系統(tǒng)的進(jìn)樣墊，柱接頭等地方漏氣。高溫毛細(xì)柱的使用壽命一般為多長？毛細(xì)柱壽命除決定于柱子本身的性能外，在很大程度上取決于使用情況，比如使用溫度、樣品狀態(tài)，進(jìn)樣量等，如果在其使用溫度范圍內(nèi)，樣品干凈，色譜柱不被污染的情況下，柱子壽命一般在2—3年之間。☆毛細(xì)管色譜柱的安裝和使用毛細(xì)管色譜柱只有正確的安裝，才能保證發(fā)揮其最佳的性能和延長使用壽命。正確安裝請參考以下步驟。步驟1：檢查氣體過濾器、載氣、進(jìn)樣墊和襯管等。檢查氣體過濾器和進(jìn)樣墊，保證輔助氣和檢測器的通氣暢通，如果以前做過較臟樣品或活性較高的化合物，需要將進(jìn)樣口的襯管清洗或更換。步驟2：將螺母和密封墊裝在色譜柱上，并將色譜柱兩端小心切平，切面要平滑整齊。步驟3：將色譜柱連接于進(jìn)樣口上。色譜柱在進(jìn)樣口中插入的深度應(yīng)根據(jù)所使用的GC儀器不同而定，正確合適的插入能最大可能地保證試驗結(jié)果的重現(xiàn)性。通常，色譜柱的入口應(yīng)保持在進(jìn)樣口的中下部，即處于進(jìn)樣針穿過隔墊完全插入進(jìn)樣口后針尖與色譜柱入口相距1?2cm，（具體的插入程度和方法參考所使用GC的隨機(jī)手冊）。避免用力彎曲擠壓毛細(xì)管柱，并小心不要讓標(biāo)記牌等帶有鋒利邊緣的物品與毛細(xì)管柱接觸摩擦，第7頁共11頁以防毛細(xì)管柱斷裂受損。色譜柱正確插入進(jìn)樣口后，將連接螺母擰上，擰緊后（用手?jǐn)Q不動了）用扳手再多擰1/4—1/2圈，保證安裝的密封程度。不緊密的安裝，不僅會引起裝置的泄漏，而且有可能對色譜柱造成永久損壞。步驟4：接通載氣。當(dāng)色譜柱與進(jìn)樣口接好后，通入載氣，調(diào)節(jié)柱前壓以得到合適的載氣流速。將色譜柱的出口端插入裝有已烷的樣口瓶中，正常情況下可以看見瓶中穩(wěn)定持續(xù)的氣泡。如果沒有氣泡就要重新檢查載氣裝置和流量控制器等是否設(shè)置正確，并檢查整個氣路有無泄漏，待所有問題解決后，將色譜柱出口從瓶中取出，保證柱端口無溶劑殘留，再進(jìn)行下一步的安裝。步驟5：將色譜柱連接于檢測器上。色譜柱與檢測器的連接安裝和所需注意的事項和色譜柱與進(jìn)樣口連接大致相同。步驟6：確定載氣流量，再對色譜柱的安裝進(jìn)行檢查。注意：如果不通入載氣就對色譜柱進(jìn)行加熱，會快速且永久性的損壞色譜柱。步驟7:色譜柱的老化。色譜柱安裝和系統(tǒng)檢漏工作完成后，就可以對色譜柱進(jìn)行老化，對色譜柱加熱至一恒定溫度，通常取其溫度上限。特殊情況下，可加熱至高于最高使用溫度10?20°C左右，但是一定不能超過色譜柱的溫度上限否則極易損壞色譜柱。當(dāng)達(dá)到老化溫度后，記錄并觀察基線，初始階段基線應(yīng)持續(xù)上升，在達(dá)到老化溫度后5?10min開始下降，并且會持續(xù)分鐘，當(dāng)達(dá)到一個固定的值后就會穩(wěn)定下來。如果在1小時后基線仍無法穩(wěn)定，或者在15?20分鐘后仍無明顯的下降趨勢，那么有可能系統(tǒng)裝置有泄漏或者污染。遇到這樣的情況，應(yīng)立即將柱溫降到40C以下，盡快地檢查系統(tǒng)并解決相關(guān)的問題，如果還是繼續(xù)老化，不僅對色譜柱有損壞而且始終得不到正常穩(wěn)定的基線。一般來說，涂有極性固定相和較厚涂層的色譜柱老化時間較長，而弱極性固定和較薄涂層的色譜柱所需時間較短。步驟8：設(shè)置確認(rèn)載氣流速。對于毛細(xì)管色譜柱使用載氣首選高純度氮氣或氫氣，載氣的純度最好大于99.95%，而其中的含氧量越小越好。一般參照廠家提供的壓力數(shù)據(jù)，可得到對應(yīng)流量。步驟9：柱流失檢測。在色譜柱老化過程結(jié)束后，采用程序升溫作一次空白試驗（不進(jìn)樣），一般是以10C/min從50C升到最高使用溫度，達(dá)到最高使用溫度后保持10min，這樣我們就會得到一張流失圖。這些數(shù)值可以后作對比試驗，并且對實驗問題的解決有幫助。在空白試驗的色譜圖中，不應(yīng)該有色譜峰出現(xiàn)，如果出現(xiàn)了色譜峰，通常可能是從進(jìn)樣口帶來的污染物。第8頁共11頁內(nèi)部資料如果在正常的使用狀態(tài)下，色譜柱的性能開始下降，基線的信號值會增高。另外，如果在較低的溫度下，基線信號值明顯大于初始值，那么有可能是色譜柱和系統(tǒng)有污染?！钍褂妹?xì)管色譜柱時的注意事項毛細(xì)管色譜柱在氣相色譜儀分析中是一個核心部分，正確使用毛細(xì)管色譜柱對氣相色譜儀分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和延長毛細(xì)管色譜柱的使用壽命至關(guān)重要，現(xiàn)根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)整理如下資料供氣相色譜儀分析工作者參考：1?在沒有載氣通過時，柱的固定液熱分解較迅速，所以在柱箱（爐）升溫前總是應(yīng)該先通上載氣（這與TCD操作要求相似），柱箱冷卻后才能把載氣關(guān)上。載氣中若夾帶灰塵或其它顆粒狀物體就會導(dǎo)致柱迅速損壞，因此在載氣進(jìn)入儀器管線前需加凈化器。（帶填充劑的汽化室玻璃襯管必須注意不能帶有微?；蚧覊m吹出）3?載氣中的水分通過固定液的液膜吸附在柱管表面上，將取代或破壞固定液液膜，所以，固定液極性越強(qiáng)，越需要采用干燥的載氣，例如：象OV-1、SE-30、SE-54、OV-101對載氣干燥要求不高，而PEG20M、FFAP和SP1000對載氣要求就很高。但在涂布于碳酸鋇沉積層上的柱子情況就恰恰相反，涂極性固定液的柱子能經(jīng)受含水樣品的直接進(jìn)樣，而涂非極性固定液的柱反而不能經(jīng)受含水樣品。4?對于那些能被氧化的固定液（如PEG20M、Caxbowax、FFAP等）對載氣除氧也很重要，停機(jī)使用時，應(yīng)將排空端密封住，以防止空氣中的02對柱固定液的氧化作用。5?在大多數(shù)情況下，柱的壽命與它的使用溫度成反比。采用稍低些的溫度上限，可顯著提高柱的壽命，程序升溫到較高溫度所維持的時間短對柱的壽命影響較小。SE54在280時穩(wěn)定性很好，常用于GC/MS分析，并能容納超負(fù)荷的大進(jìn)樣量。6?水、醇（尤其是甲醇）、二硫化碳這類的溶劑，有著非常強(qiáng)的置換固定液的能力，因此應(yīng)根據(jù)它們對柱壁的吸附親和力（或固定液被置換的可能性）小心的加以選擇。（例如：甲醇不宜用于PEG20M，丙酮往往會引起硅酮降解。）毛細(xì)管柱最大特點是高的柱效，但是必須清楚一般所測得的柱效不僅反映了柱的質(zhì)量，而且還包括進(jìn)樣過程的整個系統(tǒng)的效率的總質(zhì)量，也就是說，自樣品進(jìn)入系統(tǒng)的一瞬間開始到記錄筆繪出色譜峰為止，每一個能影響峰的加寬或分離的因素，如進(jìn)樣器、柱的連接、輔助氣引入位置、管路死體積、進(jìn)樣器內(nèi)襯的毛病等等，都一定會影響柱效?！玫闹?，由于安裝不當(dāng)，可以造成理論塔板數(shù)降低，峰形增寬或拖尾、活性物質(zhì)的吸附性拖尾或消失、靈敏度降低或組分分離不佳等等。進(jìn)樣器與色譜柱連接方式：?分流進(jìn)樣方式：分流點要求位于載氣流速較高的區(qū)域。不分流進(jìn)樣方式：色譜柱最好不伸進(jìn)進(jìn)樣器內(nèi)，避免造成氣流掃不到的區(qū)域，通常直接連接到進(jìn)樣器的末端。檢測器與色譜柱出口端連接：對FID不僅插入深度要超過尾吹和H2氣的進(jìn)口，而且應(yīng)盡可能將柱出口端插到FID的噴嘴下面1mm處為佳。四、氣相色譜分析測試常見問題及解決一、 標(biāo)定時有峰丟失可能的原因及應(yīng)采用的排除方法1.注射器有毛病，用新注射器驗證。2?未接入檢測器，或檢測器不起作用，檢查設(shè)定值3?進(jìn)樣溫度太低，檢查溫度，并根據(jù)需要調(diào)整4?柱箱溫度太低，檢查溫度，并根據(jù)需要調(diào)整5?無載氣流，檢查壓力調(diào)節(jié)器，并檢查泄漏，驗證柱進(jìn)品流速6?柱斷裂，如果柱斷裂是在柱進(jìn)口端或檢測器末端，是可以補(bǔ)救的，切去柱斷裂部分，重新安裝二、 前沿峰1?柱超載，減少進(jìn)樣量2?兩個化合物共洗脫，提高靈敏度和減少進(jìn)樣量，使溫度降低10~20度，以使峰分開3?樣品冷凝，檢查進(jìn)樣口和柱溫，如有必要可升溫4?樣品分解，采用失活化進(jìn)樣器襯管或調(diào)低進(jìn)樣器溫度三、 拖尾峰1?進(jìn)樣器襯套或柱吸附活性樣品：更換襯套。如不能解