第五章微生物概述

第五章

微生物概述

蘇州大學(xué)衛(wèi)生與環(huán)境技術(shù)研究所檢測(cè)中心一、微生物學(xué)基礎(chǔ)微生物廣泛的存在于自然界，可謂是到處有菌。在無(wú)菌醫(yī)療器械的生產(chǎn)過(guò)程中，由于醫(yī)療器械的多樣性與復(fù)雜性，即使在標(biāo)準(zhǔn)制造狀態(tài)下生產(chǎn)的產(chǎn)品，仍可能有微生物的污染。因此，了解和掌握微生物方面的有關(guān)知識(shí)，例如微生物的種類(lèi)、生長(zhǎng)繁殖、生長(zhǎng)條件、自然界分布及檢查等，將有助于生產(chǎn)過(guò)程中微生物的控制和醫(yī)療用品質(zhì)量的提高。第一節(jié)微生物及其種類(lèi)一、微生物在自然界里，有許多肉眼看不到的、需用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能觀察到的微小生物，這類(lèi)生物稱(chēng)為微生物。

回顧人類(lèi)健康史，其實(shí)是一部人類(lèi)與病原微生物（引起人類(lèi)傳染病）進(jìn)行斗爭(zhēng)的歷史。遠(yuǎn)在17世紀(jì)前，人們一直為一種肉眼看不見(jiàn)神秘惡魔所困擾，直至1674年，荷蘭人列文．虎克發(fā)明了顯微鏡，才開(kāi)始逐漸認(rèn)識(shí)微生物。盡管微生物很小，但均有其一定的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理功能，對(duì)外環(huán)境適應(yīng)性極強(qiáng)，生長(zhǎng)繁殖迅速，且廣泛存在于空氣、土壤、水及動(dòng)植物的有機(jī)體中。第一節(jié)微生物及其種類(lèi)根據(jù)其對(duì)人或動(dòng)植物致病性的情況，將微生物分為病原性微生物和非病原性微生物。例如：腸道中的大腸桿菌，是腸道中的正常菌群，它非但對(duì)人不致病，還可合成對(duì)人有利的物質(zhì)及干擾其它病原微生物對(duì)宿主的侵入。但若異位，例如侵入泌尿系統(tǒng)等，則可能引起人類(lèi)疾??；污染醫(yī)療用品而進(jìn)人人體可發(fā)生發(fā)熱反應(yīng)等。故對(duì)醫(yī)療用品的生產(chǎn)來(lái)說(shuō)，重要的是控制一切微生物的污染，包括致病性和非致病性微生物。第一節(jié)微生物及其種類(lèi)二、微生物的種類(lèi)微生物的種類(lèi)有10萬(wàn)種以上。按其結(jié)構(gòu)、組成等差異，可分為3大類(lèi)（一）非細(xì)胞型微生物體積微小，能通過(guò)濾菌器；只能在活細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)繁殖。如病毒。（二）原核細(xì)胞型微生物僅有原始核，無(wú)核仁和核膜；缺乏完整的細(xì)胞器。這類(lèi)微生物有細(xì)菌、衣原體、立克次體、螺旋體和放線菌。(三)真核細(xì)胞型微生物．細(xì)胞核的分化程度較高，有核膜、核仁和染色體；胞漿內(nèi)有完整的細(xì)胞器。真菌是真核型微生物。霉菌屬此類(lèi)型.第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)細(xì)菌的形態(tài)與大小細(xì)菌在一定的條件下，可分為球菌、桿菌、弧菌或螺形菌，：見(jiàn)圖1。其體積微小，但大小不一。通常以μm作為測(cè)量單位。一般球菌的直徑約為0.8～1.2μm，大球菌的直徑可達(dá)2μm；桿菌長(zhǎng)約2～3μm，寬0.3～0.5μm；螺形菌長(zhǎng)1～50μm，寬0.3-1μm。能產(chǎn)生芽胞的菌比一般不產(chǎn)芽胞菌要大些。細(xì)菌大小的測(cè)定：在顯微鏡下使用顯微測(cè)微尺測(cè)定。

細(xì)菌以無(wú)性分裂方式繁殖，1個(gè)細(xì)菌分裂成2個(gè)細(xì)胞，2個(gè)細(xì)胞互相脫離為2個(gè)個(gè)體，再由2個(gè)分裂為4個(gè)，4個(gè)分裂成8個(gè)，如此連續(xù)不斷裂殖。1個(gè)菌在十幾分鐘或1～2h就分裂1次。因此細(xì)菌接種在含有營(yíng)養(yǎng)成分的固體培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)18～24h的生長(zhǎng)繁殖，即有幾十億個(gè)菌云集在一起，出現(xiàn)稱(chēng)為菌落的肉眼可見(jiàn)的群體。第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)圖1各種細(xì)菌的形態(tài)1．葡萄球菌2．各種雙球菌3．鏈球菌4．四聯(lián)球菌5．八疊球菌6．球桿菌7．鏈桿菌8．弧菌9．螺形菌第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)二、細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)細(xì)菌雖小，但有一定構(gòu)造。細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、核質(zhì)等是各種各樣細(xì)菌細(xì)胞均有的基本結(jié)構(gòu)。而莢膜、鞭毛、芽胞、菌毛等僅某些細(xì)菌具有,是細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)。(一)細(xì)胞壁細(xì)胞壁位于菌體的最外層，是一層無(wú)色透明的薄膜，堅(jiān)韌并富有彈性，其總量為細(xì)菌干重的10～25%。其功能是使細(xì)菌保持一定的外形，并起保護(hù)菌體的作用。它的化學(xué)組成主要是肽聚糖等蛋白質(zhì)、類(lèi)脂質(zhì)和多糖等復(fù)合物。但隨菌體不同而有差異。如大腸桿菌的細(xì)胞壁由類(lèi)脂-蛋白質(zhì)組成，金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁由甘油、磷酸、蛋白質(zhì)組成。兩類(lèi)細(xì)胞壁的特征比較

特征G+細(xì)菌G－細(xì)菌肽聚糖層厚層薄類(lèi)脂極少脂多糖外膜缺有壁質(zhì)間隙很薄較厚細(xì)胞狀態(tài)僵硬僵硬或柔韌酸消化的效果原生質(zhì)體原生質(zhì)球?qū)θ玖虾涂股氐拿舾行院苊舾兄卸让舾械诙?jié)細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)(二)細(xì)胞膜細(xì)胞膜又稱(chēng)細(xì)胞質(zhì)膜,位于胞壁之內(nèi)，緊包于細(xì)胞質(zhì)，它由雙層磷脂和蛋白質(zhì)鑲嵌排列而成。其化學(xué)組成主要為脂類(lèi)、蛋白質(zhì)和核糖核酸。它具有半透性，與細(xì)胞壁一起維持細(xì)胞的通透性，具有物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)與營(yíng)養(yǎng)、調(diào)節(jié)菌體內(nèi)外環(huán)境平衡的功能。(三)細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞質(zhì)是細(xì)菌的基礎(chǔ)物質(zhì)，呈溶膠狀態(tài)，為細(xì)菌進(jìn)行新陳代謝的重要場(chǎng)所?；境煞譃樗?細(xì)菌質(zhì)量70%是水)、蛋白質(zhì)、核酸（核糖核酸及去氧核糖核酸）和脂類(lèi)，也含有少量的糖和無(wú)機(jī)鹽。并含有一系列的酶系統(tǒng)。進(jìn)行合成、分解、氧化、還原反應(yīng)，更新細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)和成分，維持菌體的生長(zhǎng)、代謝等活動(dòng)。第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)(四)核質(zhì)細(xì)菌的細(xì)胞核沒(méi)有核膜、核仁，沒(méi)有固定形態(tài)，這是原核生物和真核生物的主要區(qū)別。由于細(xì)菌的核比較原始,故一般細(xì)菌的核稱(chēng)原始形態(tài)的核戓稱(chēng)擬(類(lèi))核。細(xì)菌核物質(zhì)的主要成分是去氧核糖核酸(DNA),它實(shí)際上是與高等生物細(xì)胞核功能相似的核物質(zhì),故又稱(chēng)染色質(zhì)體或細(xì)菌染色體,還有蛋白質(zhì)、磷脂、糖元和酶類(lèi)等。它控制著細(xì)菌的各種遺傳性狀，在繁殖活動(dòng)中起著重要作用，細(xì)菌的裂殖，首先從細(xì)胞核開(kāi)始，然后再形成細(xì)胞膜和細(xì)胞壁。(五)細(xì)胞壁外部結(jié)構(gòu)有些細(xì)菌細(xì)胞壁外有多種結(jié)構(gòu)，主要包括莢膜、菌毛、鞭毛和芽胞等，其功能主要是提供保護(hù)、黏附物體和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)。在無(wú)菌醫(yī)療器械生產(chǎn)中具有意義的是芽胞結(jié)構(gòu)。第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)某些細(xì)菌，生長(zhǎng)到一定時(shí)期或當(dāng)外環(huán)境條件惡劣時(shí)，菌體失去大部分水分，細(xì)胞漿逐漸濃縮，形成圓形或橢圓形的特殊結(jié)構(gòu)，稱(chēng)芽胞(圖3)。芽胞可位于中央或末端，有的比菌體大，有的比菌體小，這些特征在產(chǎn)芽胞的菌中具有鑒別意義。第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)圖3細(xì)菌芽胞的各種形態(tài)第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)芽胞代謝率極低，處于休眠狀態(tài)?？杀Ｗo(hù)細(xì)菌度過(guò)不良環(huán)境。一旦條件適宜(如水分、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、溫度、氧濃度等)，芽胞即可被激活發(fā)芽，開(kāi)始進(jìn)入活躍的生物合成期，回復(fù)形成繁殖體，然后進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖。芽胞不能繁殖,一個(gè)芽胞只能形成一個(gè)菌體。

芽胞對(duì)外環(huán)境的各種因素(低溫、高溫、干燥、輻射、光線及化學(xué)藥品等)具有強(qiáng)大的抵抗力。殺滅芽胞要比殺死細(xì)菌繁殖體困難得多。如桿菌的繁殖體一般在70℃即死亡，而芽胞卻能耐受高溫?？莶輻U菌芽胞在100℃沸水中可存活lh；破傷風(fēng)桿菌和肉毒桿菌芽胞可耐受3h的煮沸。有的芽胞能保持十年或數(shù)十年而不喪其活性。芽胞之所以有較強(qiáng)的抵抗力，除與外面包有致密不透水的外膜，與原生質(zhì)的脫水濃縮以及含有2，6-吡啶二羧酸、豐富的脂類(lèi)物質(zhì)和較多的金屬離子尤其是Ca++等有關(guān)。因此，在日常的消毒滅菌中，均選擇芽胞菌作為生物指示劑。如輻照滅菌中，選擇短小桿菌芽胞；熱力滅菌中，以嗜熱脂肪桿菌芽胞；環(huán)氧乙烷消毒滅菌，采用枯草桿菌黑色變種芽胞，作為判定滅菌效果的指標(biāo)。第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)和基本結(jié)構(gòu)第三節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)條件、代謝與營(yíng)養(yǎng)

一、細(xì)菌的生長(zhǎng)條件，

(一)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是細(xì)菌新陳代謝和生命活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要有水、氮源、碳源、無(wú)機(jī)鹽及生長(zhǎng)因子等，細(xì)菌依靠這些物質(zhì)合成菌體成分，獲得所需能量及調(diào)節(jié)新陳代謝。細(xì)菌是單細(xì)胞生物，營(yíng)養(yǎng)的攝取和吸收，主要依靠細(xì)胞膜的功能來(lái)完成。第三節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)條件、代謝與營(yíng)養(yǎng)(二)酸堿度一般細(xì)菌的生長(zhǎng)最適酸堿度(pH)為7.2～7.6，少數(shù)菌需在較酸或較堿的環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖。(三)溫度溫度是細(xì)菌生長(zhǎng)的重要因素之一，各種細(xì)菌的適宜溫度范圍相差很大，據(jù)此而有嗜熱(52℃)、嗜溫及嗜冷菌之分。大多為嗜溫菌(15～40℃)，一般細(xì)菌的培養(yǎng)采用37℃。(四)氣體與細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖有關(guān)的氣體主要有氧氣和二氧化碳。

第三節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)條件、代謝與營(yíng)養(yǎng)根據(jù)細(xì)菌對(duì)氧氣的需求不同，將其分為3類(lèi)：專(zhuān)性需氧菌：這類(lèi)細(xì)菌必須在有氧的環(huán)境中才能生長(zhǎng)繁殖。專(zhuān)性厭氧菌：此類(lèi)細(xì)菌必須在無(wú)氧條件下才能生長(zhǎng)；有氧情況則生長(zhǎng)反受抑制，如破傷風(fēng)桿菌。兼性厭氧菌：這類(lèi)細(xì)菌有氧無(wú)氧均可生長(zhǎng)．，但在有氧情況下更為有利，如葡萄球菌、大腸桿菌和綠膿桿菌。第三節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)條件、代謝與營(yíng)養(yǎng)

二、細(xì)菌的新陳代謝及其產(chǎn)物細(xì)菌和其它生物一樣，為了維持它們的生命活動(dòng)，亦必須進(jìn)行新陳代謝，即進(jìn)行同化作用和異化作用。前者將吸收的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)合成菌體成分，是需要能量的過(guò)程。后者將菌體或培養(yǎng)基中各種物質(zhì)分解，是生成能量和各種代謝產(chǎn)物的過(guò)程。細(xì)菌在生長(zhǎng)繁殖(新陳代謝)過(guò)程中可產(chǎn)生大量的代謝產(chǎn)物；分解糖類(lèi)產(chǎn)生酸和氣體(乳酸和CO2、H2)；分解蛋白質(zhì)產(chǎn)生吲哚、硫化氫等；有的細(xì)菌可產(chǎn)生酶，像金黃色葡萄球菌產(chǎn)生血漿凝固酶；第三節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)條件、代謝與營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)氣莢膜桿菌產(chǎn)生卵磷脂酶；有的細(xì)菌產(chǎn)生色素，如綠膿桿菌產(chǎn)生熒光綠色素，葡萄球菌產(chǎn)生金黃色、白色、檸檬色色素。利用這些可以鑒別細(xì)菌種類(lèi)；細(xì)菌還可合成毒性物質(zhì)即毒素。毒素又分內(nèi)毒素和外毒素；外毒素是細(xì)菌(主要是革蘭陽(yáng)性細(xì)菌)在存活過(guò)程中分泌于體外的一種蛋白質(zhì)，有強(qiáng)烈的毒性作用。如白喉?xiàng)U菌、破傷風(fēng)桿菌都能產(chǎn)生外毒素。第三節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)條件、代謝與營(yíng)養(yǎng)內(nèi)毒素一般指革蘭陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁外膜的特有成分磷脂多糖和蛋白的復(fù)合物。這些成分在細(xì)菌存活時(shí)不分泌至體外，只有當(dāng)菌體自溶或人工破壞(如消毒滅菌)裂解后才釋放出來(lái)。內(nèi)毒素性質(zhì)穩(wěn)定，耐熱。如大腸桿菌、傷寒桿菌、綠膿桿菌等均具有內(nèi)毒素。熱原質(zhì)是細(xì)菌在代謝過(guò)程中合成的一種脂多糖，存在于細(xì)菌的細(xì)胞壁中，當(dāng)這種物質(zhì)注入人體或動(dòng)物體內(nèi)，即能引起發(fā)熱反應(yīng)，故名熱原質(zhì)。

如筆者80年代曾報(bào)導(dǎo)了一起一次性使用輸液器霉菌污染引起熱原反應(yīng)的醫(yī)療亊件(張同成等,一次性使用輸液器污染原因調(diào)查,中國(guó)消毒學(xué)雜志,1995年12卷4期246頁(yè))。一次性使用輸液器管內(nèi)及滴斗內(nèi)生長(zhǎng)了大量的霉菌菌絲（霉菌的生長(zhǎng)繁殖，營(yíng)養(yǎng)條件要求不高，只需水分和氮源即可滋生繁殖，我們平時(shí)看到的墻壁漏雨霉菌生長(zhǎng)，布匹受潮霉變等都屬此類(lèi)）。詳見(jiàn)圖6-1、圖6-2。造成這次污染事件的主要原因是廠址選擇不當(dāng)，廠附近有一超大垃圾場(chǎng)，大氣中漂浮著大量的霉菌孢子，廠區(qū)車(chē)間凈化系統(tǒng)運(yùn)行不規(guī)范，生產(chǎn)后成品又長(zhǎng)時(shí)間保存，未及時(shí)滅菌。后雖經(jīng)輻射滅菌，但霉菌尸體、毒素依然存在，放行時(shí)也未做熱原試驗(yàn)等監(jiān)測(cè)，就直接應(yīng)用于臨床，致使輸液的20余例病人發(fā)生了嚴(yán)重的熱原反應(yīng)。

圖6-1一次性使用輸液器污染的霉菌菌絲(10×20)

圖6-2一次性使用輸液器污染的霉菌菌絲(10×40)第三節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)條件、代謝與營(yíng)養(yǎng)細(xì)菌的人工培養(yǎng)了解了細(xì)菌生長(zhǎng)的條件，即可采用人工的方法培養(yǎng)細(xì)菌，以利更好地研究、控制微生物。如車(chē)間內(nèi)空氣中微生物的測(cè)定，醫(yī)療用品初始污染菌的計(jì)數(shù)，生產(chǎn)人員手等衛(wèi)生學(xué)調(diào)查以及制造環(huán)境的菌譜調(diào)查，即是利用細(xì)菌的生長(zhǎng)條件和特性，進(jìn)行的人工培養(yǎng)。微生物的分離和純培養(yǎng)無(wú)菌技術(shù)微生物通常是肉眼看不到的微小生物，而且無(wú)處不在。因此，在微生物的研究及應(yīng)用中，不僅需要通過(guò)分離純化技術(shù)從混雜的天然微生物群中分離出特定的微生物，而且還必須隨時(shí)注意保持微生物純培養(yǎng)物的“純潔”，防止其他微生物的混入。在分離、轉(zhuǎn)接及培養(yǎng)純培養(yǎng)物時(shí)防止其被其他微生物污染的技術(shù)被稱(chēng)為無(wú)菌技術(shù)(aseptictechnique)它是保證微生物學(xué)研究正常進(jìn)行的關(guān)鍵。微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌試管、玻璃燒瓶、平皿(culturedish，petridish)等是最為常用的培養(yǎng)微生物的器具，在使用前必須先行滅菌，使容器中不合任何生物。

接種操作用接種環(huán)或接種針?lè)蛛x微生物，或在無(wú)菌條件下把微生物由一個(gè)培養(yǎng)器皿轉(zhuǎn)接到另一個(gè)培養(yǎng)容器進(jìn)行培養(yǎng)，是微生物學(xué)研究中最常用的基本操作。微生物檢測(cè)驗(yàn)證技術(shù)概述1、眾所周知，一個(gè)實(shí)驗(yàn)室在建立一個(gè)新方法或第一次使用一個(gè)新方法時(shí)，都要對(duì)該方法的適用性和可靠性進(jìn)行測(cè)定，這就是驗(yàn)證。大量的實(shí)踐證明，驗(yàn)證技術(shù)使藥廠GMP的實(shí)施水平躍上一個(gè)新的臺(tái)階。同時(shí)驗(yàn)證技術(shù)（方法）也逐步深入到藥典的各種檢測(cè)方法中，雖然現(xiàn)在GMP認(rèn)證在藥廠以外行業(yè)尚沒(méi)有全面推行實(shí)施，但驗(yàn)證技術(shù)（方法）的思想與體系同樣適用于其他行業(yè)，它對(duì)保證質(zhì)量起著重要作用。、2、驗(yàn)證的概念與內(nèi)涵WHO的GMP中，對(duì)驗(yàn)證的定義為：“能證明任何程序、工藝、設(shè)備、物料、活動(dòng)、或系統(tǒng)確實(shí)能導(dǎo)致預(yù)期結(jié)果的文件證明的行為”。驗(yàn)證的類(lèi)型1、前瞻性驗(yàn)證就是在方法正式投入使用前按照預(yù)定的方案進(jìn)行研究，并收集實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，以證實(shí)檢定方法是否達(dá)到預(yù)期要求的行為。2、同步驗(yàn)證就是已經(jīng)在生產(chǎn)中實(shí)施的某項(xiàng)工藝運(yùn)行中同時(shí)進(jìn)行的驗(yàn)證。3、回顧性驗(yàn)證如果某一產(chǎn)品已經(jīng)生產(chǎn)了很長(zhǎng)一段時(shí)間，但沒(méi)有按照前瞻性驗(yàn)證的要求進(jìn)行過(guò)驗(yàn)證，而又不能進(jìn)行同步驗(yàn)證（如儲(chǔ)備的原液可以使用幾年或設(shè)備正用于其他的用途），此時(shí)可以采用回顧性驗(yàn)證。4、再驗(yàn)證系指一項(xiàng)生產(chǎn)工藝、一個(gè)系統(tǒng)或設(shè)備或者一種原材料經(jīng)過(guò)驗(yàn)證并在使用一個(gè)階段以后，旨在證實(shí)其“驗(yàn)證狀態(tài)”沒(méi)有發(fā)生漂移而進(jìn)行的驗(yàn)證。第三節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)條件、代謝與營(yíng)養(yǎng)(一)培養(yǎng)方法．細(xì)菌的培養(yǎng)只需提供充分的營(yíng)養(yǎng)，合適的pH、溫度和必要的氣體環(huán)境，細(xì)菌即可生長(zhǎng)繁殖。通常培養(yǎng)的方法是將細(xì)菌接種適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上，37℃溫箱培養(yǎng)18～24h，即可用肉眼觀察細(xì)菌生長(zhǎng)的情況。用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)1、稀釋倒平板法(pourplatemethod)2、涂布平板法(spreadplatemethod)3、平板劃線分離法(streakplatemethod)4、稀釋搖管法(dilutlonshakeculturemethod)第三節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)條件、代謝與營(yíng)養(yǎng)(二)培養(yǎng)基按其用途可分為下列4大類(lèi)。1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含細(xì)菌所需要的基本營(yíng)養(yǎng)成分，可供多數(shù)細(xì)菌使用。主要有牛肉膏(0.3％)、蛋白胨(1％)、氯化鈉(0.5％)、磷酸鹽和水等配制而成，pH7.2～7.6，此為液體培養(yǎng)基。若加入凝固劑，如2～3％瓊脂，使其固態(tài)化，即為固體培養(yǎng)基，細(xì)菌經(jīng)接種后可形成肉眼可見(jiàn)的菌落。如營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。若加0.1～0.5％瓊脂，則為半固體培養(yǎng)基。常用于觀察細(xì)菌動(dòng)力或保存菌種；如普通肉湯半固體培養(yǎng)基。第三節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)條件、代謝與營(yíng)養(yǎng)2、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如血液、腹水、葡萄糖等，以供某些細(xì)菌的特殊營(yíng)養(yǎng)要求。如血平板等。3、選擇培養(yǎng)基：利用細(xì)菌對(duì)某類(lèi)化學(xué)物質(zhì)敏感性不同，選擇性抑制某些細(xì)菌，而有利于欲選細(xì)菌的生長(zhǎng)，從而達(dá)到分離的目的。如水質(zhì)檢查中的品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基，伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基等。4、鑒別培養(yǎng)基：各細(xì)菌具不同的生化反應(yīng)特性，可利用鑒別培養(yǎng)基加以區(qū)別，如糖發(fā)酵試驗(yàn)用的含糖含指示劑培養(yǎng)基，硫化氫生成試驗(yàn)用的醋酸鉛培養(yǎng)基等。1、固體培養(yǎng)基(so1idmedium)在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使其成為固體狀態(tài)即為固體培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基常用來(lái)進(jìn)行微生物的分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)及菌種保藏等。2、半固體培養(yǎng)基(semisolidmedium)半固體培養(yǎng)基中凝固劑的含量比固體培養(yǎng)基少，培養(yǎng)基中瓊脂含量一般為0.2%～0.7%。半固體培養(yǎng)基常用來(lái)觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征、分類(lèi)鑒定及噬菌體效價(jià)滴定等。3、液體培養(yǎng)基(1iquidmedium)液體培養(yǎng)基中未加任何凝固劑。在用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物時(shí)，通過(guò)振蕩或攪拌可以增加培養(yǎng)基的通氣量，同時(shí)使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)分布均勻。液體培養(yǎng)基常用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)以及在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物的基礎(chǔ)理論和應(yīng)用方面的研究。第三節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)條件、代謝與營(yíng)養(yǎng)(三)細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況將細(xì)菌接種到液體培養(yǎng)基中，大多數(shù)的細(xì)菌生長(zhǎng)呈現(xiàn)均勻渾濁的狀態(tài)，少數(shù)呈鏈狀的細(xì)菌可呈沉淀生長(zhǎng)，專(zhuān)性需氧菌多生長(zhǎng)在液體表面，形成菌膜。在半固體培養(yǎng)基上，無(wú)動(dòng)力(無(wú)鞭毛)的細(xì)菌少可沿穿刺線生長(zhǎng)，呈明顯的線形，周?chē)囵B(yǎng)基仍透明澄清。有鞭毛的細(xì)菌可向穿刺線四周運(yùn)動(dòng)彌散，呈羽狀或云霧狀渾濁生長(zhǎng)，穿刺錢(qián)模糊不清。故半固體培養(yǎng)基可用于檢查細(xì)菌有無(wú)動(dòng)力。第三節(jié)細(xì)菌的生長(zhǎng)條件、代謝與營(yíng)養(yǎng)將細(xì)菌劃線接種于固體培養(yǎng)基表面，由于劃線的分散作用，使許多混雜的細(xì)菌可在培養(yǎng)基表面散開(kāi)，經(jīng)一定時(shí)間培養(yǎng)，可繁殖成一個(gè)個(gè)肉眼可見(jiàn)的菌落。一般情況下，1個(gè)菌落由1個(gè)單獨(dú)細(xì)菌經(jīng)不斷分裂繁殖堆積而成，故1個(gè)菌落屬1個(gè)細(xì)菌的后代，是純種。由于細(xì)菌種類(lèi)、菌齡以及培養(yǎng)基的成分等因素的不同，菌落的形態(tài)、大小、色澤也不一樣．因此，菌落的形態(tài)特征是識(shí)別各種細(xì)菌的主要依據(jù)之一。另外，根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的數(shù)目，也可計(jì)算樣品(水、物體表面、空氣等)中的活細(xì)菌數(shù)。第四節(jié)細(xì)菌形態(tài)的檢查根據(jù)細(xì)菌形態(tài)、結(jié)構(gòu)和染色反應(yīng)性可大致決定其種屬，因此，細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查是細(xì)菌分類(lèi)和鑒定的基礎(chǔ)。如革蘭染色后，可分辨出細(xì)菌是革蘭陽(yáng)性菌和陰性菌，是球菌還是桿菌，能否形成芽胞(因芽胞壁厚、折光性強(qiáng)、不易著色等，故可在顯微鏡下加以識(shí)別)。所以，此法可協(xié)助查明車(chē)間、醫(yī)療用品及各種操作環(huán)節(jié)的常見(jiàn)污染菌。如污染多量的革蘭陰性桿菌，則發(fā)生熱原反應(yīng)的可能性亦大，提示應(yīng)及時(shí)查明原因，加以防范；如污染了