設(shè)備的清潔驗證

-.z.第四節(jié)設(shè)備的清潔驗證關(guān)于清潔驗證的原理及方法將在第三篇第二章詳細(xì)介紹，制劑生產(chǎn)驗證各章亦對相應(yīng)設(shè)備的清洗驗證要點進(jìn)展介紹，可以參閱這些章節(jié)的容?？紤]到制藥設(shè)備驗證的完整性，應(yīng)包括設(shè)備確實認(rèn)，變動控制程序、儀器儀表的校準(zhǔn)和清洗驗證。在此對設(shè)備的清潔驗證從方法上作簡單介紹。設(shè)備清洗有自動清洗和人工清洗兩種方法，或者兩種方法的結(jié)合。所謂清洗是從工藝設(shè)備或貯存設(shè)備中去除污染物的工藝過程，以保證設(shè)備能夠平安地進(jìn)展下一步的產(chǎn)品生產(chǎn)，它包括清洗、消毒和貯存。設(shè)備清潔驗證的目的是通過測試證明該設(shè)備的自動清洗程序(CIP)或人工清洗程序能夠去除設(shè)備部件上的活性藥物殘留物，并到達(dá)可承受的合格標(biāo)準(zhǔn)，并證明此清潔程序具有穩(wěn)定性和重演性。一、設(shè)備清潔驗證中常用的術(shù)語1)人體接觸劑量限度(SEL，SubjectE×posureLimit)。指一個沒有藥理學(xué)和毒理學(xué)經(jīng)歷的人可以接觸的*一藥物的暴露劑量。2)允許殘留濃度(ARL，AllowableResidualLimit)．指*一設(shè)備經(jīng)清洗后，其外表殘留的藥物(或清潔劑)的最大允許量。3)活性成分(API，ActivePharmaceuticallngredient；或ADS，ActiveDrugSubstance)：指在*一藥物中代表效用的物質(zhì)。這種物質(zhì)在制造、工藝或包裝過程中就變成了一種活性成分或者藥物的最終成型形式?；钚猿煞衷诩膊≡\斷、治療、緩解、處理或預(yù)防方面提供藥理上的活力或其他直接的作用，以致影響人體或動物的組織和功能。API在工藝制造過程中產(chǎn)生，如：①化學(xué)合成；②發(fā)酵；③重組DNA或其他生物工藝；④從自然資源上別離或取得；⑤其他工藝的任何組合等。對設(shè)備清潔驗證來說，API包括中間體及成品。一般來說，SEL、ARL的允許值應(yīng)從藥物平安評價部門獲取。二、驗證設(shè)計在驗證取樣測試時，假設(shè)發(fā)現(xiàn)洗過的設(shè)備明顯不干凈，應(yīng)立即停頓驗證，有明顯的殘留物存在說明現(xiàn)有的清潔程序是不適宜的，因此必須在驗證開場前重新評價清潔程序。從*種意義上來說，清潔驗證就是對清洗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的驗證。清潔驗證主要是通過擦拭取樣法和沖洗取樣法對活性成分APl進(jìn)展測試。另外可根據(jù)日常使用的需要，增加一些其他工程的測試，如清潔劑、酸液、溶劑、消毒劑等殘留量的測試。大局部企業(yè)在設(shè)備清洗中使用的清潔劑是水(包括飲用水、純化水和注射用水)，原因之一就是使用化學(xué)清潔劑要作清潔劑殘留量的測試，從而增加清洗的難度。制造部門在設(shè)備清潔程序中任何關(guān)于清潔劑、溶劑、添加劑的改變必須填寫變動控制表，得到批準(zhǔn)后執(zhí)行。并非所有的設(shè)備清潔驗證需做活性成分APl的測試。根據(jù)APl是否在特殊的清潔劑或溶劑中溶解而使設(shè)備難以清洗的程度來對APl的濃度作出評價oAPl允許濃度可根據(jù)公式來計算，如果人體接觸劑量限度SEL太低無法到達(dá)時，可用替代基質(zhì)來覆蓋所有的產(chǎn)品。(一)驗證次數(shù)①必須經(jīng)過連續(xù)3次成功的試驗。假設(shè)能證明活性藥物和清，潔劑的殘留物均在可承受限度，清潔驗證方可認(rèn)為是成功的。清潔驗證過程中清潔設(shè)備的用水必須符合相應(yīng)法規(guī)的測試要求(如注射用水、純化水標(biāo)準(zhǔn)等)。清潔后設(shè)備的外表應(yīng)均無肉眼可見的產(chǎn)品、溶液或清潔殘留物的痕跡。假設(shè)水在設(shè)備外表形成一層均勻的膜時，則可認(rèn)為說明該設(shè)備已清潔干凈。②對新產(chǎn)品進(jìn)展評估，決定是否需要額外的清潔驗證研究工程。假設(shè)該新產(chǎn)品證明是最難以清潔的和在使用同一設(shè)備的所有產(chǎn)品基質(zhì)中允許殘留濃度ARL是最低的物質(zhì)，則在前3批產(chǎn)品試驗中必須要對設(shè)備清潔程序的驗證進(jìn)展評價。(二)清潔驗證可承受標(biāo)準(zhǔn)3次連續(xù)的驗證中所收集的樣品測試結(jié)果，必須都符合允許值。1．棉球擦拭取樣法(1)對非專用設(shè)備與產(chǎn)品接觸的設(shè)備外表上取得樣品必須符合活性成分APl和清潔劑的允許殘留濃度ARL。(2)對專用設(shè)備只需對清潔劑的允許殘留濃度ARL進(jìn)展測定?，F(xiàn)在許多企業(yè)都使用專用設(shè)備(如箱型BIN混合機，可以配備許多BIN)來生產(chǎn)，以減少設(shè)備清潔驗證的次數(shù)和難度。(3)允許殘留濃度ARL的計算ARL＝SEL·VSF(驗證平安系數(shù))式中，SEL是指1d1個病人在服用1種藥物時，另1種藥物的殘留物在該藥物中的最大允許量。2．沖洗水取樣法1)對非專用設(shè)備①最后一次沖洗水中的活性成分APl濃度必須小于等于根據(jù)SEL計算出來的允許殘留濃度ARL值。②最后一次沖洗水中清潔劑(溶劑)的濃度必須小于等于藥物評價部門規(guī)定的允許殘留濃度ARL值。2)對專用設(shè)備最后一次沖洗水中清潔劑(溶劑)的濃度必須小于等于藥物評價部門規(guī)定的允許殘留濃度ARL值。3)允許殘留濃度ARL的計算(一般用于容器、貯罐設(shè)備的清洗)ARL＝SEL·VSF(驗證平安系數(shù))3.微生物測試當(dāng)產(chǎn)品放行時需做微生物分析，其使用的設(shè)備在清潔驗證時需在與產(chǎn)品接觸設(shè)備的外表進(jìn)展微生物取樣及測試。棉簽擦拭法的適宜標(biāo)準(zhǔn)一般為＜100CFU／10in2(2in×5in，lin=0.0254m)或＜100CFU／65cm2(5cm×13cm)。三、設(shè)備清潔驗證步驟根據(jù)清潔程序的規(guī)定和要求或事先設(shè)定一個程序?qū)υO(shè)備進(jìn)展清潔，應(yīng)對整個清潔過程作詳細(xì)的記錄，記錄的容應(yīng)包括：進(jìn)展清潔驗證設(shè)備的圖紙(應(yīng)在圖紙上標(biāo)出取樣點)，設(shè)備一覽表(包括設(shè)備名稱、廠商、能力、型號和序號等)，清潔過程中的各項參數(shù)，清潔后的檢查情況。設(shè)備清潔完成后則應(yīng)根據(jù)要求進(jìn)展取樣。1．決定各藥品中最難清潔物質(zhì)對于有多個活性成分的藥品(如多組分藥品、復(fù)方制劑)，以最難溶解的活性成分作為最難清潔物質(zhì)。2．確定ARL值根據(jù)資料或比照各藥品活性成分(也是最難清潔的物質(zhì))，計算ARL值。3．非專用設(shè)備的清潔如*一設(shè)備是非專用設(shè)備，各種產(chǎn)品在生產(chǎn)過程中均使用，測試要求包括：①設(shè)備清潔后的目檢；②對選定藥品*個活性成分殘留物的測試；③微生物測試。4．決定設(shè)備使用后至清潔的周期假設(shè)驗證中確定最大周期是72h，則驗證試驗所選擇的周期必須應(yīng)用到日常正常的設(shè)備清潔程序中，除非有新的驗證加以更正。5．設(shè)備的枯燥、貯存和微生物測試①最后清洗后，應(yīng)根據(jù)貯藏條件對設(shè)備進(jìn)展枯燥，以防止微生物生長?？菰锖唾A存的程序必須與驗證測試條件一致。②選擇最難清潔部位并以此作為取樣點。③清潔后的設(shè)備貯存方法須能防治污染(例如置于密閉處)。6．分析測試方法①測試儀器對API殘留物必須有足夠的靈敏度，能夠測量所研究化學(xué)實體的ARL的濃度。②測試(檢驗)方法必須經(jīng)過驗證。7．決定取樣方法在驗證前預(yù)先制訂取樣方案，根據(jù)提供的設(shè)備圖紙來確定取樣的位置，設(shè)備取樣一般在設(shè)備外表目檢后，采用棉簽法或水沖法來進(jìn)展。如果目檢過程中發(fā)現(xiàn)設(shè)備外表不清潔，則隨后的取樣就不必進(jìn)展了。明顯的污染說明此清潔程序不能對設(shè)備進(jìn)展充分的清潔，故在繼續(xù)進(jìn)展驗證前必須重新對清潔程序進(jìn)展評估和修正。用棉簽法采集樣品時，設(shè)備的外表系指設(shè)備與藥物接觸的外表，取樣點應(yīng)是設(shè)備的主要部位，且應(yīng)從設(shè)備與藥品接觸的外表中最難清潔的部位取樣。設(shè)備的取樣點一般不得少于3個。假設(shè)此設(shè)備是小型設(shè)備且取樣點具有代表性的話，則可以減少取樣數(shù)量。假設(shè)設(shè)備的*些外表并不接觸藥品，但可能會對產(chǎn)品造成潛在的污染，則也可以加以取樣。當(dāng)有些設(shè)備外表不可能或不適合用棉簽取樣時，可采用水沖洗法進(jìn)展取樣。水沖洗法的水樣不是取自為清潔而沖洗設(shè)備的最后用水，而是在設(shè)備清潔完畢后，用于沖洗設(shè)備外表并收集起來的用于樣品分析的水。沖洗水的用量應(yīng)能足以使設(shè)備所有外表得到潤濕并提供足夠的量以便進(jìn)展分析測試。用作沖洗水的注射用水或純化水應(yīng)事先取樣，以便進(jìn)展對照分析。棉簽法的要點如下。①據(jù)設(shè)備情況決定試驗中的取樣方法，一般設(shè)備外表用棉簽取樣。②假設(shè)產(chǎn)品殘留物在設(shè)備外表分布均勻，所有取樣點的測試結(jié)果不大于ARL。③棉簽取樣點應(yīng)代表整個清潔的設(shè)備外表，并以最難清潔部位為取樣點。在驗證方案中應(yīng)圖示設(shè)備取樣點位置。④棉簽樣只能從接觸產(chǎn)品的設(shè)備外表取得。⑤棉簽樣的面積是65cm2左右。⑥取完樣的棉簽應(yīng)放入10ml的溶劑中并蓋緊蓋子。8．清潔驗證監(jiān)控(1)準(zhǔn)備設(shè)備簡圖為需要進(jìn)展清潔驗證的每個設(shè)備準(zhǔn)備圖紙，并標(biāo)出棉簽取樣的位置。(2)準(zhǔn)備設(shè)備一覽表列出設(shè)備(包括自動清洗設(shè)備和周轉(zhuǎn)容器)名稱、廠商、能力、型號和序列號。(3)記錄清洗循環(huán)參數(shù)應(yīng)盡量使有關(guān)自動清潔的各項變量標(biāo)準(zhǔn)化，盡可能加以控制并測量，并記錄以下參數(shù)(包括設(shè)定值和實際值)：①設(shè)備使用后的“清洗〞周期；②為進(jìn)展清潔而引起的設(shè)備撤除程度；③預(yù)洗參數(shù)(例如弄濕、刮除、浸泡時間，溫度，溶液，用量等)；④每一清潔階段的水質(zhì)(飲用水、熱水、純化水等)；⑤洗滌時水的壓力和流量、水溫、水量、洗滌時間；⑥每一沖洗階段重復(fù)的次數(shù)；⑦水沖洗的方法(例如電動噴射、浸沒、手工擦洗、其他)；⑧噴淋頭的數(shù)量和類型；⑨沖洗水的質(zhì)量；⑩沖洗水的壓力或流量、水溫、水量、沖洗時間；?沖洗水的排水方法；?沖洗的次數(shù)；?枯燥方法(例如壓縮空氣、自然枯燥、加熱)和條件(例如在環(huán)境控制區(qū)、層流下)；?貯存時間；?貯存條件(例如干凈度100

000

級)。注：設(shè)備手工清洗的程序和操作參數(shù)可根據(jù)實際情況盡可能詳細(xì)地記錄下來，表2－35是*一設(shè)備手工清潔驗證記錄表。設(shè)備手工清潔程序完成后，今后日常的清洗操作必須遵循已驗證的規(guī)則。所有的操作參數(shù)如介質(zhì)、壓力、溫度、用力大小、閥門開啟度等必須大于驗證時的參數(shù)。或者在擬定驗證方案時，將驗證時的操作參數(shù)設(shè)定得比日常操作時小，如最終沖洗水的水溫平時為65℃，則驗證時可設(shè)定為55℃。9．分析測試的要求對于制造一個單一產(chǎn)品的專用設(shè)備，假設(shè)在清潔過程中使用清潔劑的話，則驗證分析時必須進(jìn)展清潔劑殘留物的測試；假設(shè)產(chǎn)品放行前要進(jìn)展微生物分析的話，則設(shè)備清潔后應(yīng)立即取樣，并進(jìn)展微生物測試；對于制造多類產(chǎn)品的非專用設(shè)備，還必須增加活性藥物殘留量的測試。最具活性的產(chǎn)品或最難清潔的產(chǎn)品應(yīng)被視為“最惡劣條件〞，用其代表所有產(chǎn)品進(jìn)展清潔驗證。假設(shè)*設(shè)備生產(chǎn)的產(chǎn)品中既有最具活性，又有最難清潔的原料或成分，則取其中ARL值比擬低的產(chǎn)品作為清潔驗證的代表產(chǎn)品。當(dāng)*一設(shè)備要用于新產(chǎn)品生產(chǎn)時，一般需對新產(chǎn)品進(jìn)展清潔驗證，而對于那些具有高毒性的產(chǎn)品則應(yīng)單獨進(jìn)展清潔驗證。四、清潔驗證失敗的調(diào)查假設(shè)清潔驗證的最后測試結(jié)果證明驗證未到達(dá)合格標(biāo)準(zhǔn)而失敗的話，則應(yīng)對驗證過程進(jìn)展全面的調(diào)查，以查清造成失敗的真正原因，然后根據(jù)失敗的性質(zhì)采取相應(yīng)的措施。對于與驗證過程無關(guān)的、有明顯原因的失敗(諸如機器故障、動力故障、分析錯誤等)，這次試驗可不作為整個驗證的一局部，但這個失敗的記錄應(yīng)收集在驗證報告中，并且這個失敗并不證明早先試驗的無效。對于與驗證有關(guān)的失敗(諸如清潔過程未按規(guī)定的清潔程序進(jìn)展)或無明確原因的失敗(如沒有明顯理由)，則必須重新進(jìn)展連續(xù)3次的試驗。這次失敗應(yīng)有記錄，但不必歸人驗證檔案中。五、清潔程序的制訂要進(jìn)展清潔驗證，首先必須對有關(guān)設(shè)備制訂相應(yīng)的清潔程序，然后根據(jù)此程序進(jìn)展設(shè)備的清潔，再通過取樣和測試分析對此程序加以驗證，或根據(jù)已有的清潔SOP作驗證。清潔程序應(yīng)包括以下容。1．清潔周期確實定生產(chǎn)部門根據(jù)生產(chǎn)的需要，制訂設(shè)備使用完畢和清潔的周期。根據(jù)實際作業(yè)情況，清潔周期確實定一般需考慮以下幾個因素：①連續(xù)進(jìn)展數(shù)批同品種產(chǎn)品或中間體的生產(chǎn)后；②更換不同品種產(chǎn)品或中間體生產(chǎn)時；③設(shè)備經(jīng)過重大檢修后；④突發(fā)事件的發(fā)生使設(shè)備受污時；⑤設(shè)備閑置超過一定時間且又需重新啟用時。在進(jìn)展設(shè)備清潔驗證的過程中也應(yīng)按此周期實施清潔工作，且在清潔驗證通過后，正常生產(chǎn)過程中的設(shè)備清潔周期應(yīng)不大于此時間。2．清潔部位確實定用于藥品生產(chǎn)的設(shè)備根據(jù)其生產(chǎn)產(chǎn)品一樣與否，可分為專用設(shè)備和非專用設(shè)備。所謂專用設(shè)備即指那些用于生產(chǎn)同一類產(chǎn)品的設(shè)備；而非專用設(shè)備則指那些用于制造假設(shè)干不同產(chǎn)品的設(shè)備。一般而言，根據(jù)設(shè)備的用途、設(shè)備外表的類型和特征以及設(shè)備的構(gòu)造來確定設(shè)備的待清潔部位，以到達(dá)去除污染的目的。3．清潔劑的選擇設(shè)備清潔程序中選擇適宜的清潔劑是尤為重要的，一般而言主要根據(jù)清潔劑本身不同的化學(xué)性質(zhì)、去污能力、實驗室的評估以及以往設(shè)備清潔的經(jīng)歷來確定清潔劑的類型。4．清潔工具和場地的規(guī)定清潔程序中應(yīng)注明清潔過程中所使用的工具，諸如抹布、刷子等的類型；清潔的場地也要明確，一般采用就地清潔和專用場所(清潔間)清潔兩種方法。5．清潔參數(shù)確實定清潔程序中必須對整個清潔過程中設(shè)備的拆裝操作有詳細(xì)的描述；清潔過程中的技術(shù)參數(shù)應(yīng)盡可能使有關(guān)手工清潔的各項變量標(biāo)準(zhǔn)化，而這些技術(shù)參數(shù)確實定應(yīng)盡可能便于測量控制和記錄。這些技術(shù)參數(shù)一般應(yīng)包括以下容：清潔前預(yù)處理(刮除或浸泡)，參數(shù)(例如時間、溫度、溶劑、用量等)，清潔用水的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，持續(xù)洗滌時間，洗滌水的壓力、流量、溫度和用量，洗滌的次數(shù)，所使用溶劑的名稱、濃度和用量，所使用清潔劑的名稱、濃度和用量，水洗的方法(例如電動噴射、浸沒、手工洗滌等)，沖淋水的質(zhì)量，沖淋持續(xù)時間，沖淋水的壓力、流量、溫度和用量，沖淋的次數(shù)，沖淋的方法，手工清洗用力大小等。根據(jù)設(shè)備的不同，清潔操作的順序、方法和要求也不盡一樣。這些都應(yīng)在各自清潔程序中作明確而詳細(xì)的描述。6．設(shè)備的枯燥和貯存清潔完畢后應(yīng)對設(shè)備進(jìn)展枯燥以防止微生物的生長。設(shè)備的枯燥一般可采用干凈的壓縮空氣吹淋、自然枯燥或加熱枯燥等方法。清潔枯燥后設(shè)備的貯存方法須能防止污染，須明確貯存時間和貯存條件(例如貯存室的干凈度和溫度、濕度要求等)。7．清潔后的檢查設(shè)備的整個清潔工作完成后應(yīng)對清潔工作進(jìn)展檢查，可采用目檢的方法。檢查的容包括：①設(shè)備、外外表清潔情況的判定，尤其應(yīng)仔細(xì)檢查那些關(guān)鍵部位和難以清潔的部位；②清潔記錄是否及時、完整、清晰和規(guī)；③清潔后的設(shè)備是否有“已清潔〞的狀態(tài)牌。清潔檢查完畢后，檢查者應(yīng)在檢查記錄表上簽名認(rèn)可。假設(shè)在檢查中發(fā)現(xiàn)清潔沒有到達(dá)要求，則應(yīng)重新對設(shè)備進(jìn)展清潔。六、驗證報告的完成清潔驗證完畢后，各驗證部門應(yīng)將自己負(fù)責(zé)局部的驗證數(shù)據(jù)和資料匯總，并起草相關(guān)局部的報告，然后交驗證部統(tǒng)一匯總，對每一局部加以復(fù)核，在此根底上起草一份完整的驗證報告，送交驗證委員會審批。一份完整的清潔驗證報告應(yīng)包括驗證方案、清潔程序、設(shè)備一覽表、清潔參數(shù)、分析測試數(shù)據(jù)、驗證總結(jié)等容。七、驗證報告的審查和批準(zhǔn)驗證委員會應(yīng)按照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)對驗證報告中所列的各項技術(shù)參數(shù)、驗證過程和測試分析結(jié)果逐一加以審查，以確保所實施的清潔驗證對正常生產(chǎn)過程中的設(shè)備清潔和質(zhì)量控制具有可重復(fù)性。假設(shè)提交的驗證報告符合規(guī)定的要求，則應(yīng)簽署驗證合格報告以正式批準(zhǔn)該清潔驗證工程的通過。生產(chǎn)部門在收到清潔驗證合格證后，可根據(jù)驗證的技術(shù)參數(shù)和清潔程序制訂詳細(xì)的清潔操作規(guī)程SOP，并進(jìn)展全面的培訓(xùn)，以確保驗證過程中所使用的程序能切實得以執(zhí)行。第二章清潔驗證第一節(jié)概要在藥品生產(chǎn)的每道工序完成后，對制藥設(shè)備進(jìn)展清洗是防止藥品污染和穿插污染的必要手段。產(chǎn)品生產(chǎn)后，總會殘留假設(shè)干原輔料和微生物。微生物在適當(dāng)?shù)臏貪穸认乱詺埩粑镏械挠袡C物為營養(yǎng)可大量繁殖，產(chǎn)生各種代物，從而大大增加殘留物的復(fù)雜性和危害程度。顯然，如果這些殘留的原輔料、微生物和其代產(chǎn)物進(jìn)入下批生產(chǎn)過程，必然對下批產(chǎn)品產(chǎn)生不良影響。因此，必須通過清洗將這些污染源從藥品生產(chǎn)的循環(huán)中除去。嚴(yán)格地講，絕對意義上的、不含任何殘留物的清潔狀態(tài)是不存在的。在制藥工業(yè)中，清潔的概念就是指設(shè)備中各種殘留物〔包括微生物及其代產(chǎn)物〕的總量低至不影響下批產(chǎn)品的規(guī)定的療效、質(zhì)量和平安性的狀態(tài)。通過有效的清洗，可將上批生產(chǎn)殘留在生產(chǎn)設(shè)備中的物質(zhì)減少到不會影響下批產(chǎn)品療效、質(zhì)量和平安性的程度。由于有效的清洗除去了微生物繁殖需要的有機物，創(chuàng)造了不利于微生物繁殖的客觀條件，便于將設(shè)備中的微生物污染控制在一定水平。設(shè)備的清潔程度，取決于殘留物的性質(zhì)、設(shè)備的構(gòu)造、材質(zhì)和清洗的方法。對于確定的設(shè)備和產(chǎn)品，清潔效果取決于清洗的方法。書面的、確定的清洗方法即所謂的清潔規(guī)程，應(yīng)包括清洗方法及影響清潔效果的各項具體規(guī)定，如清洗前設(shè)備的拆卸、清潔劑的種類、濃度、溫度、清洗的次序和各種參數(shù)，清洗后的檢查或清潔效果確實認(rèn)等以及生產(chǎn)完畢后等待清洗的最長時間及清洗后至下次生產(chǎn)的最長存放時間等。設(shè)備的清洗必須按照清潔規(guī)程進(jìn)展。各種版本的GMP都規(guī)定必須對清潔規(guī)程進(jìn)展驗證。清潔驗證就是通過科學(xué)的方法采集足夠的數(shù)據(jù)，以證明按規(guī)定方法清潔后的設(shè)備，能始終如一地到達(dá)預(yù)定的清潔標(biāo)準(zhǔn)。驗證結(jié)論的準(zhǔn)確性與完整性，是驗證的核心。驗證的方法學(xué)是保證驗證結(jié)論完整可靠的關(guān)鍵。從方法學(xué)上考慮，科學(xué)、完整的清潔驗證一般可按以下幾個工作階段依次進(jìn)展(圖3－1)。1．開發(fā)階段根據(jù)產(chǎn)品性質(zhì)、設(shè)備特點、生產(chǎn)工藝等因素擬定清潔方法并制定清潔規(guī)程，對清潔人員進(jìn)展操作培訓(xùn)。2．方案準(zhǔn)備階段對生產(chǎn)設(shè)備進(jìn)展詳細(xì)考察，確定有代表性的，難清潔的部位作為取樣點；計算設(shè)備的外表積；根據(jù)產(chǎn)品的相關(guān)性質(zhì)選定*種物質(zhì)作為參照物質(zhì)，確定清潔后允許的最大殘留量為合格標(biāo)準(zhǔn)，驗證過檢驗其含量確定設(shè)備清潔的程度，必要時還要考察清潔的殘留量；根據(jù)驗證共同要求制訂并批準(zhǔn)驗證方案；開發(fā)驗證有關(guān)取樣方法和檢驗方法，以保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。在驗證開場前需對有關(guān)人員進(jìn)展培訓(xùn)。3．方案實施階段按照批準(zhǔn)的驗證方案開展試驗獲取數(shù)據(jù)，評價結(jié)果，得出結(jié)論。如驗證的結(jié)果說明清潔程序無法確保設(shè)備清潔到達(dá)預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)，則需查找原因、修改程序并重新驗證，直至結(jié)果合格。4．監(jiān)控及再驗證階段對已驗證并投入運行的清潔方法進(jìn)展監(jiān)控，對清潔方法的變更實行變更管理，根據(jù)監(jiān)測的結(jié)果來看各種生產(chǎn)活動中，所采用的清潔方法能到達(dá)的實際效果，以確定再驗證的周期進(jìn)展再驗證。第二節(jié)清潔方法的制訂一、清潔方式工藝設(shè)備的清潔，通常可分為手工清潔方式和自動清潔方式，或兩者的結(jié)合。手工清潔方式的特征是主要由人工持清潔工具，按預(yù)定的要求清洗設(shè)備，根據(jù)目測確定清潔的程度，直至清潔完成。常用的清潔工具一般有能噴灑清潔劑和淋洗水的噴槍，刷子、尼龍清潔塊等。清洗前通常需要將設(shè)備拆卸到一定程度并轉(zhuǎn)移到專門的清洗場所。自動清潔方式的特點是由自動化的專門設(shè)備按一定的程序自動完成整個清潔過程的方式。通常只要將清洗裝置同待清洗的設(shè)備相連接，由清洗裝置按預(yù)定的程序完成整個清潔過程，整個清潔過程通常不需要人工檢查已清潔的程度，乃至干預(yù)程序的執(zhí)行。這兩種主要的清潔方式在實際生產(chǎn)中應(yīng)用很廣，清潔方式的選擇應(yīng)當(dāng)全面考慮設(shè)備的材料、構(gòu)造、產(chǎn)品的性質(zhì)、設(shè)備的用途及清潔方法能到達(dá)的效果等各個方面。舉例來說，如果設(shè)備體積龐大且外表光滑無死角；生產(chǎn)使用的物料和產(chǎn)品易溶于水或一定的清潔劑，這種情況下比擬適合采用自動或半自動的在線清洗方式：清潔劑和淋洗水在泵的驅(qū)動下以一定的溫度、壓力、速度和流量流經(jīng)待清洗設(shè)備的管道，或通過專門設(shè)計的噴淋頭均勻噴灑在設(shè)備外表從而到達(dá)清洗的目的。大容量注射劑的配制系統(tǒng)多采用這種方式。如果生產(chǎn)設(shè)備死角較多，難以清潔，或生產(chǎn)的產(chǎn)品易粘結(jié)在設(shè)備外表、易結(jié)塊，則需要進(jìn)展一定程度的拆卸并用人工或?qū)Ｓ迷O(shè)備清洗。大容量注射劑的灌裝機、小容量注射劑的灌裝機、膠囊填充機及制粒機、壓片機等一般都可采用采用人工清洗方式。不管采取何種清潔方式，都必須制定一份詳細(xì)的書面規(guī)程，規(guī)定每一臺設(shè)備的清洗程序，從而保證每個操作人員都能以一樣的方式實施清洗，并獲得一樣的清潔效果。這是進(jìn)展清潔驗證的前提。從保證清潔重現(xiàn)性及驗證結(jié)果的可靠性出發(fā)，清潔規(guī)程至少應(yīng)對以下方面作出規(guī)定。①清潔開場前對設(shè)備必要的拆卸要求和清潔完成后的裝配要求。②所用清潔劑的名稱、成分和規(guī)格。③清潔溶液的濃度和數(shù)量。④清潔溶液的配制方法。⑤清潔溶液接觸設(shè)備外表的時間、溫度、流速等關(guān)鍵參數(shù)。⑥淋洗要求。⑦生產(chǎn)完畢至開場清潔的最長時間。⑧連續(xù)生產(chǎn)的最長時間。⑨已清潔設(shè)備用于下次生產(chǎn)前的最長存放時間。二、清潔規(guī)程的要點1.拆卸應(yīng)規(guī)定清潔一臺設(shè)備需要拆卸的程度。大多數(shù)設(shè)備，如大容量注射劑的灌裝機、一步制粒機等在清潔前需要預(yù)先拆卸到一定程度，小針的灌裝機則幾乎可以說是完全拆卸。應(yīng)有書面的、容清晰完整的拆卸指導(dǎo)，最好附有圖表或示意圖，以使操作人員容易理解。2．預(yù)洗/檢查預(yù)洗的目的是除去大量的(可見的)剩余產(chǎn)品或原料，為此后的清潔創(chuàng)造一個根本一致的起始條件。由于清潔規(guī)程往往不是專用的，它需要適用于生產(chǎn)多種產(chǎn)品和濃度或劑量規(guī)格的通用設(shè)備，以簡化管理及操作，因此需進(jìn)展預(yù)洗。預(yù)洗的作用是確立一個相對一致的起始點，以提高隨后各步操作的重現(xiàn)性。預(yù)洗所使用水質(zhì)不必苛求，通常飲用水或經(jīng)一定程度凈化(如過濾)的飲用水已經(jīng)足夠。使用水管或手持高壓噴槍以新鮮的流水沖洗設(shè)備以除去殘留物。對于殘留物物理性質(zhì)差異較大的情況，有的企業(yè)希望制定一份產(chǎn)品與預(yù)洗參數(shù)如水溫、壓力、時間等一一對應(yīng)的對照表，由操作人員按實際產(chǎn)品選擇參數(shù)。這種方法在實施時并不十分理想。由于操作人員的素質(zhì)及習(xí)慣，從一大堆方案中去選擇應(yīng)當(dāng)采用的方案反而容易造成過失。比擬簡單而切合實際的方法是讓操作者檢查是否還有可見的殘留物，讓他們持續(xù)噴淋設(shè)備直至可見殘留物消失，以此作為預(yù)洗的終點。因此，操作者判斷預(yù)洗完成與否的標(biāo)準(zhǔn)必須盡可能的明確，特別是應(yīng)檢查的部位。例如，可在規(guī)程中作出這樣的規(guī)定：用熱的飲用水持續(xù)噴淋機器的所有外表，使所有可見的殘留顆粒消失。特別注意檢查不易清潔的部位。3．清洗此步的目的用清潔劑以一定的程序(如固定的方法、清洗時間等)除去設(shè)備上看不到的產(chǎn)品。這種一致性是進(jìn)展驗證的根底。在預(yù)洗后，下一步即對設(shè)備或部件進(jìn)展實際的清洗。如果清潔程序中要使用專用的清潔劑，即在本步使用。為獲得穩(wěn)定的結(jié)果，減小偏差的發(fā)生，必須明確規(guī)定清潔劑的名稱、規(guī)格和使用的濃度以及配制該清潔溶液的方法。應(yīng)明確清潔劑的組成，以便驗證時檢查是否有殘留的清潔劑。從本質(zhì)上看，這一步的清潔是溶劑對殘留物的溶解過程，而溶解往往隨溫度的升高而加快，因此，溫度是這一過程的重要的參數(shù)，必須規(guī)定溫度控制的圍、測量及控制溫的方法。為提高清洗效率，可采用多步清洗的方式。在這種情形下兩步清洗之間可參加淋洗操作。配制清潔溶液的水可根據(jù)需要采用飲用水或純化水。4．淋洗用水以固定的方法和固定的淋洗時間淋洗設(shè)備外表，以除去設(shè)備上看不到清潔劑是本操作的目的。清洗步驟通常溶解了大局部殘留物，但設(shè)備上殘留的清洗液中含水、清潔劑和殘留的產(chǎn)品或原料。本步驟用水對其進(jìn)展充分的淋洗使殘留物的濃度降至預(yù)定限度以下，以不造成新的潛在的污染。為提高淋洗效率，宜采用屢次淋洗的淋洗方法。在淋洗階段，GMP對水質(zhì)有明確的要求。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的類型采用符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的純化水或注射用水。當(dāng)然淋洗最初階段，可以使用質(zhì)量較低的水如飲用水。如由電腦按預(yù)定程序自動執(zhí)行的淋洗程序進(jìn)展淋洗，淋洗的結(jié)果就比擬平安可靠。從確保淋洗效果出發(fā)，應(yīng)盡可能防止人工法對不同水質(zhì)的切換——由操作者根據(jù)淋洗步驟選擇水質(zhì)的方式。由于本步驟的目的是除去已溶解的低濃度的殘留物，并使殘留在設(shè)備上的水具有盡可能高的質(zhì)量(最小的可溶性固體，最低的微生物污染水平)，在淋洗水的壓力、流速、淋洗持續(xù)時間及水溫等諸影響因素中，水溫的重要性相對下降。當(dāng)然，較高的溫度有助于殘留水的揮發(fā)，并兼有一定的消毒作用。5．枯燥根據(jù)需要決定是否進(jìn)展枯燥。除去設(shè)備外表的殘留水分可防止微生物生長，由于水膜有可能掩蓋殘留物，一定程度上有礙檢查。因此對于須暴露保存的設(shè)備，應(yīng)進(jìn)展枯燥。但對于經(jīng)過驗證的清潔程序，如果設(shè)備淋洗后要進(jìn)展滅菌處理，或是采用高溫、無菌的注射用水淋洗后并保持密閉的設(shè)備則不一定要進(jìn)展枯燥處理。6．檢查通常經(jīng)過驗證的清潔程序應(yīng)保證清潔后的設(shè)備不殘留可見的剩余物。進(jìn)展目檢可在發(fā)生意外時，仍能及時發(fā)現(xiàn)而采取補救措施，而不危及下批產(chǎn)品。因此在規(guī)程中可作出類似規(guī)定，如：目檢所有設(shè)備的外表，不得有剩余物。如發(fā)現(xiàn)剩余物，向工段長匯報以采取糾偏措施。7．儲存規(guī)定已清潔設(shè)備和部件的儲存條件和最長儲存時間，以防止再次污染。8．裝配應(yīng)規(guī)定將被拆卸部件重新裝配的各步操作，附以圖表和示意圖以利于操作者理解。此外，要注意裝配期間防止污染設(shè)備和部件。三、清潔劑的選擇清潔劑應(yīng)能有效溶解殘留物，不腐蝕設(shè)備，且本身易被去除。人用藥品注冊技術(shù)要求國際標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)會(ICH)在“殘留溶劑指南〞將溶劑分為3個級別，對其使用和殘留限度有明確的要求。隨著環(huán)境保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)的提高，還應(yīng)要求清潔劑對環(huán)境盡量無害或可被無害化處理。滿足以上要求的前提下應(yīng)盡量廉價。根據(jù)這些標(biāo)準(zhǔn)，對于水溶性殘留物，水是首選的清潔劑。從驗證的角度，不同批號的清潔劑應(yīng)當(dāng)有足夠的質(zhì)量穩(wěn)定性。因此不宜提倡采用一般家用清潔劑，因其成分復(fù)雜、生產(chǎn)過程中對微生物污染不加控制、質(zhì)量波動較大且供給商不公布詳細(xì)組成。使用這類清潔劑后，還會帶來另一個問題，即如何證明清潔劑的殘留到達(dá)了標(biāo)準(zhǔn)"應(yīng)盡量選擇組成簡單、成分確切的清潔劑。根據(jù)殘留物和設(shè)備的性質(zhì)，企業(yè)還可自行配制成分簡單效果確切的清潔劑，如一定濃度的酸、堿溶液等。企業(yè)應(yīng)有足夠靈敏的方法檢測清潔劑的殘留情況，并有能力回收或?qū)U液進(jìn)展無害化處理。第三節(jié)清潔驗證方案的準(zhǔn)備參照物質(zhì)或最難清潔物質(zhì)、最難清潔部位和取樣部位，如何制訂驗證的合格標(biāo)準(zhǔn)即最大允許殘留清潔驗證方案必須符合一般驗證方案的共性要求。驗證方案中最關(guān)鍵技術(shù)問題為如何確定限度，用什么手段能準(zhǔn)確地定量殘留量，這包括取樣方法和檢測方法的開發(fā)和驗證。一、參照物質(zhì)與最難清潔物質(zhì)一般藥品都由活性成分和輔料組成。對于復(fù)方制劑，含有多個活性成分。所有這些物質(zhì)的殘留物都是必須除去的。在清潔驗證中是否需要為所有殘留物都制定限度標(biāo)準(zhǔn)并一一檢測呢"這是不切實際且沒有必要的。在一定的意義上，清潔的過程是個溶解的過程，因此，通常的做法是從各組分中確定最難清潔(溶解)的物質(zhì)，以此作為參照物質(zhì)。通常，相對與輔料，人們最更關(guān)注活性成分的殘留，因為它可能直接影響下批產(chǎn)品的質(zhì)量、療效和平安性。因此活性成分的殘留限度必須作為驗證的合格標(biāo)準(zhǔn)之一。如當(dāng)存在兩個以上的活性成分時，其中最難溶解的成分即可作為最難清潔物質(zhì)論處。以復(fù)方18氨基酸注射液為例，它有18種氨基酸，均為活性成分。其中最難溶解的為胱氨酸，僅微溶于熱水，因此可將其作為最難清潔物質(zhì)。這樣一來，清潔驗證就找到了殘留的“參照物〞而用不著為其他易溶組分操心。二、最難清潔部位和取樣點在討論如何確定最難清潔部位前，首先應(yīng)當(dāng)對清洗的機制有所了解。除手工擦洗主要依靠機械摩擦力將附著在設(shè)備外表的殘留物除去外，常規(guī)的清洗過程可從清洗液對殘留物的作用角度大致分為溶解、乳化和化學(xué)反響等不同的機制。不管何種機制，都存在殘留物與清洗液接觸、被潤濕、脫離設(shè)備外表等共同的過程。在此以使用最普遍的清洗機制——溶解為例詳細(xì)進(jìn)展討論。以溶解為機制的清洗過程主要是通過溶劑(清洗液)對殘留物的溶解作用以及流動的清洗液對殘留物的沖擊而使附著在設(shè)備外表的殘留物進(jìn)入溶劑中。微觀上看溶解的速度取決于單位時間由溶質(zhì)外表進(jìn)入溶液的溶質(zhì)分子數(shù)與從溶液中回到溶質(zhì)外表的分子之差。一旦差值為零，外表溶解過程到達(dá)動態(tài)平衡，此溶液即為飽和溶液。溶解過程中從溶質(zhì)外表很快形成一薄層飽和溶液，飽和溶液中的溶質(zhì)分子不斷向溶液深處擴散，形成從溶質(zhì)外表到溶液深處的一個遞減的濃度梯度。如果處于飽和層的溶質(zhì)分子不能迅速進(jìn)入溶液深處，就會降低溶解的速度。因此可以觀察到即使是溶解度很大的物質(zhì)，如蔗糖的塊狀結(jié)晶(俗稱冰糖)在無攪拌的靜止?fàn)顟B(tài)下的溶解速度是非常緩慢的。提高溶解速度的方法是使溶液流動以迫使溶質(zhì)外表的飽和層離開。在清洗過程中，必須使清潔劑在運動中與殘留物接觸。清潔劑與殘留物的相對運動從宏觀上可分解為垂直方向和水平方向的運動。相對垂直的運動可將已溶解的物質(zhì)迅速帶離溶質(zhì)外表，而水平方向的相對運動根據(jù)流體力學(xué)的根本原理，可分為層流和湍流兩類情況(圖3－2)。層流指流體在導(dǎo)管中流動時，所有質(zhì)點均沿著與管軸平行的方向流動。此時流體的速度在管道軸心處的速度最大，自軸心至管壁速度逐漸減以至等于零。由此可以推斷，如果清潔劑在待清洗設(shè)備中形成了層流，會很迅速地在殘留物外表形成一穩(wěn)定的飽和溶液層，殘留物的溶解速度會急劇下降，這與靜止?fàn)顟B(tài)下的溶解過程非常相似，從而清潔效率也隨之明顯下降。因此在清潔中應(yīng)防止層流的產(chǎn)生。流體以湍流形式流動時，雖然宏觀上流體沿管道向一個方向流動，但從微觀上看各質(zhì)點的運動速度在大小和方向上都隨時發(fā)生變化?？傆芯植抠|(zhì)點的運動方向相對垂直于管軸或管壁。這樣殘留物外表再也不會形成穩(wěn)定的飽和層，溶解的速度就大大提高了，清潔的效率也隨之提高。因此，在清洗過程中，必須保證清潔液以湍流形式流動。流體以何種形式流動取決于流體雷諾準(zhǔn)數(shù)Re的大小。Re＝dwρ/μ式中，d為管道直徑；w為流速；ρ為流體的密度；μ為黏度。當(dāng)Re＜2300時，為層流；Re＞10000時，為湍流；2300＜Re＜10000時，為層流和湍流的過渡階段。Re越大，外表湍流越劇烈，即質(zhì)點運動方向和速率的變化越大，殘留物溶解的速度越快。在已確定清潔劑和淋洗液的情況下，Re正比于管徑與流速的乘積：Re∝wd比擬普遍的在線清洗過程都有清潔劑在泵的驅(qū)動下在設(shè)備與管道中循環(huán)的步驟。對已確定的系統(tǒng)，清潔劑的流量V是固定的。根據(jù)液體的不可壓縮特性，在沒有平行管道和分叉的情況下，不管管徑如何變化，管各點的流量必然一樣。因V＝wS＝wπR2＝π/4×wd2，其中為管道截面積，則＝4/π×V/d2；則Re∝V/d，如V為定值，則Re∝l/d由此可知，在系統(tǒng)中，管徑較大的部位或管徑由小變大的部位Re值較小，相對容易發(fā)生層流，較難被清潔。對有多根平行管道尤其是管徑不同的系統(tǒng)，因各管道的流速變化、流量分配各不一樣，通常將這些部位列為較難清潔的部位。此外，切不可無視哪些似乎不直接接觸產(chǎn)品的部位，如復(fù)方氨基酸注射液配制系統(tǒng)一般需安裝防爆平安伐(膜)的歧管、排氣管、充氮管、抽真空管等。這些管道或由于投料時物料微粒的飛揚，或因為配制罐霧化的小液滴隨充氮、抽真空等工藝過程四處飄散而可能被污染。有時這種污染很輕微，但如果清潔程序未能考慮這些管路，日積月累就可能產(chǎn)生嚴(yán)重的后果。綜合而言，但凡死角、清潔劑不易接觸的部位如帶密封墊圈的管道連接處，壓力、流速迅速變化的部位如有歧管或岔管處、管徑由小變大處、容易吸附殘留物的部位如外表不光滑處等，都應(yīng)視為最難清潔的部位。顯然，取樣點應(yīng)包括各類最難清潔部位。乳化和化學(xué)反響的機制在微觀上與溶解過程相似，都有清潔劑分子作用于殘留物外表，使其外表的分子脫離或反響生成其他物質(zhì)進(jìn)而溶解，因此宏觀上不容易形成湍流的部位也是難清潔的部位。三、殘留物限度確實定如何確定殘留物限度是個相當(dāng)復(fù)雜的問題，但卻是驗證方案無法回避，必須解決的問題。FDA在其"清潔規(guī)程驗證檢查指南"中指出：“FDA不打算為清潔驗證設(shè)立一個通用方法或限度標(biāo)準(zhǔn)。那是不切實際的，因為原料和制劑生產(chǎn)企業(yè)使用的設(shè)備和生產(chǎn)的產(chǎn)品千差萬別，確立殘留物限度不僅必須對所有有關(guān)物質(zhì)有足夠的了解，而且所定的限度必須是現(xiàn)實的、能到達(dá)和可被驗證的。〞也就是說，鑒于生產(chǎn)設(shè)備和產(chǎn)品性質(zhì)的多樣性，由藥品監(jiān)視機構(gòu)設(shè)立統(tǒng)一的限度標(biāo)準(zhǔn)和檢驗方法是不現(xiàn)實的。企業(yè)應(yīng)當(dāng)根據(jù)其生產(chǎn)設(shè)備和產(chǎn)品的實際情況，制定科學(xué)合理的，能實現(xiàn)并能通過適當(dāng)?shù)姆椒z驗的限度標(biāo)準(zhǔn)。目前企業(yè)界普遍承受的限度標(biāo)準(zhǔn)基于以下原則：①分析方法客觀能到達(dá)的能力，如濃度限度——百萬分之十(10×10－6)；②生物活性的限度，如正常治療劑量的l／1000；③以目檢為依據(jù)的限度，如不得有可見的殘留物。最后一項系半定量標(biāo)準(zhǔn)，是限度標(biāo)準(zhǔn)的補充。(一)殘留物濃度限度10×10－6－6將殘留物濃度限度定為10×10多為興旺國家生產(chǎn)液體制劑如溶液、乳劑等劑型的企業(yè)采用。其要規(guī)定由上一批產(chǎn)品殘留在設(shè)備中的物質(zhì)全部溶解到下一批產(chǎn)品中所致的濃度不得高于10×10。對液體制劑而言，這就是進(jìn)入下批各瓶產(chǎn)品的殘留物濃度。一般說來，除非是高活性、高敏感性的藥品，該限度是足夠平安的，因此，企業(yè)可進(jìn)一步將其簡化成最終淋洗水樣品中－6殘留物的濃度限度為10×10。驗證時一般采用收集清潔程序最后一步淋洗完畢時的水樣，或淋洗完成后在設(shè)備中參加一定量的水(小于最小生產(chǎn)批次量)，使其在系統(tǒng)循環(huán)后取樣，測定相關(guān)物質(zhì)的濃度。實驗室通常配備的儀器如HPLC，紫外—可見分光光度計、薄層色譜等的靈敏度一般都能到達(dá)10×10－6－6以上，因此該限度標(biāo)準(zhǔn)不難被檢驗。從殘留物濃度限度可推導(dǎo)出設(shè)備外表的單位面積殘留物限度(外表殘留物限度)，單位為μg／cm2。計算前需假設(shè)殘留物均勻分布在設(shè)備外表上，在下批生產(chǎn)時全部溶解在產(chǎn)品中。設(shè)下批產(chǎn)品的生產(chǎn)批量為B(kg)，因殘留物濃度最高為10×10－6，即10mg／kg，則殘留物總量最大為B×10×10－6＝10B(mg)；單位面積殘留物的限度為殘留物總量除以測總外表積，設(shè)設(shè)備總外表積為SA(cm2)，則外表殘留物限度L為10B／SA(mg／cm2)；為確保平安，一般應(yīng)除以平安因子F，即得L＝10B／(SA·F)(mg／cm2)；如取平安因子F＝10，則L＝B／SA(mg／cm2)＝103B／SA(μg／cm2)。對于確定的設(shè)備，外表積是定值，批量值應(yīng)取最小批量，以獲取最差情況下的外表殘留物限度。根據(jù)上述推算過程得到的外表殘留物限度的前提是殘留物溶解到下批產(chǎn)品后均勻分配到各瓶／片產(chǎn)品中。實際生產(chǎn)中確實可能存在*些特殊外表，如灌封頭，殘留物溶解后并不均勻分散到整個批中，而是全部進(jìn)入一瓶產(chǎn)品中。在這種情況下，上述限度就不適用了，必須為這些特殊部位制定特殊的限度。制定特殊外表限度的依據(jù)就是以最低日治療劑量為根底的生物學(xué)活性的限度。(二)生物學(xué)活性的限度——最低日治療劑量的l／1000依據(jù)藥物的生物學(xué)活性數(shù)據(jù)——最低日治療劑量(minimumtreatmentdailydosage,MTDD)確定殘留物限度是制藥企業(yè)普遍采用的方法。從確保平安的角度出發(fā)，一般取最低日治療劑量的l／1000為殘留物限度的計算出發(fā)點(表3—44)。其依據(jù)是任何藥物上市前都必須通過臨床試驗取得使用劑量的數(shù)據(jù)，上市后也必須不斷跟蹤其使用效果和臨床副作用，從而確定對大多數(shù)人適用的發(fā)揮預(yù)期治療作用的劑量圍。在該劑量圍的下限(即最低日治療劑量)以下，也還會產(chǎn)生一些生理活性。特別是對*些特別敏感的病人，產(chǎn)生活性或副作用的劑量可能低于MTDD很多倍。不同藥物，不同人群的個體差異是不同的。根據(jù)臨床藥理學(xué)、毒理學(xué)和臨床應(yīng)用的觀察統(tǒng)計，極少或根本未見藥物個體差異到達(dá)1000倍的報道，也就是說，對于非常敏感的病人，如果服用了MTDD的l／1000，也不會由此產(chǎn)生藥理反響。這樣就符合了GMP足夠平安的理念。因此高生物活性藥物宜使用本法來確定殘留物限度。清潔的目的是保證在使用產(chǎn)品B時，不出現(xiàn)A產(chǎn)品的生理作用。B產(chǎn)品每天服用數(shù)多，平安性下降，因此，上述最低日治療劑量的l／1000，系指B產(chǎn)品最多日使用制劑數(shù)中允許A產(chǎn)品殘存的量，不超過因服用B產(chǎn)品而帶人體的A產(chǎn)品的最低日治療劑量的l／1000。最低日治療劑量數(shù)據(jù)來自藥品標(biāo)簽和使用說明書上的有關(guān)數(shù)據(jù)計算：MTDD＝每次給藥片(粒)數(shù)×每片有效成分含量×每日最少給藥次數(shù)藥品標(biāo)簽和使用說明書基于藥品研發(fā)過程進(jìn)展的動物試驗與各期臨床的統(tǒng)計資料，并經(jīng)過政府主管部門批準(zhǔn)，是生產(chǎn)企業(yè)必備的資料，因而MTDD的應(yīng)用非常方便。根據(jù)MTDD計算單位面積殘留物限度的過程如下。(1)將相關(guān)設(shè)備生產(chǎn)的所有產(chǎn)品列表，在表中相應(yīng)位置填寫MTDD(mg)，最小生產(chǎn)批量B(kg)，單個制劑的質(zhì)量Uw(g)和每日最多使用制劑數(shù)Dd。(2)計算設(shè)備外表積SA(cm2)。(3)確定特殊部位面積SSA(cm2)。(4)取最小批量B為計算參數(shù)。(5)取上述4中對應(yīng)產(chǎn)品的單位制劑質(zhì)量Uw和日最大使用成品(制劑數(shù))Dd為計算參數(shù)。(6)計算該批產(chǎn)品理論成品數(shù)UU＝1000B／Uw。(7)計算一般外表殘留物限度LdLd＝允許殘留物總量／總外表積允許殘留物總量＝MTDD／1000×U×l／Dd＝MTDD／1000×1000B／Uw×l／Dd則Ld＝MTDD／1000×1000B／Uw×l／Dd×l／SA×1000(μｇ／cm2)＝MTDD×B／Uw×l／Dd×l／SA×l000(μｇ／cm2)可根據(jù)具體情況決定是否再除以平安因子以確保平安。(8)計算特殊外表殘留物限度外表殘留物限度計算表見表3—45。Ld＝MTDD／1000×1／Dd×l／SSA×1000(μｇ／cm2)＝MTDD／Dd×l／SSA(μｇ／cm2)同樣，可根據(jù)具體情況決定是否再除以平安因子以確保平安。也有文獻(xiàn)建議采用最低生物活性量為出發(fā)點計算殘留物限度，其原理與實際計算過程與上述MTDD法根本一樣。但由于最低生物活性量數(shù)據(jù)不易獲取，也缺乏法定依據(jù)，使用起來不如MTDD方便可靠。(三)肉眼觀察限度——不得有可見的殘留物有文獻(xiàn)稱如果設(shè)備外表拋光良好，殘留物與設(shè)備外表有較大反差，目檢能發(fā)現(xiàn)低至1μｇ／cm2的殘留物。雖然這是非常經(jīng)歷化的數(shù)據(jù)，與個人的視力、照明、設(shè)備的尺寸形狀和觀察的角度等許多因素有關(guān)，不可能作為定量、半定量的依據(jù)，也無法驗證，但目檢最簡單，且能直觀、定性地評估清潔的程度，有助于發(fā)現(xiàn)已驗證的清潔程序在執(zhí)行過程中發(fā)生的偏差，對于日常監(jiān)控是有價值的。因此清潔規(guī)程中都要求在清潔完成或*些步驟完成后檢查不得有可見的殘留物。(四)特殊情況下限度的制定上述各種限度制定方法的注意力都集中在產(chǎn)品中的活性成分或最難清潔的物質(zhì)上，其共同的特點是都要求其殘留量低于規(guī)定的限度，而對活性成分的化學(xué)穩(wěn)定性未加考慮。從微觀上看清潔后的殘留物在設(shè)備外表形成一層薄膜，因此有非常大的比外表積。而清洗過程中和清洗完畢后殘留物充分暴露在水分、氧氣和通常較高的溫度下(如需高溫清洗和滅菌)，因此不難設(shè)想如果活性成分的化學(xué)性質(zhì)不很穩(wěn)定，或者在清潔和隨后的儲存條件下不穩(wěn)定，生成了其他物質(zhì)，就可能使為檢測微量活性物質(zhì)而建立的檢驗方法無法真實地反映實際的情況。因為驗證的目的是證實有關(guān)物質(zhì)被“清洗掉〞，而不是通過化學(xué)反響使目標(biāo)物轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌镔|(zhì)而“消失了〞o另外，有些藥物的活性成分經(jīng)轉(zhuǎn)化后成為藥品中的雜質(zhì)，如該雜質(zhì)對人體有更大的毒性則須限制其在成品中的含量。這種情況下，制定殘留物的限度必須考慮這類雜質(zhì)對下批產(chǎn)品帶來的不利影響。如阿司匹林片，其活性成分乙酰水酸很容易水解為游離水酸，中國藥典規(guī)定后者相對于乙酰水酸的含量應(yīng)低于0．3％。以下就以生產(chǎn)阿司匹林片為例，具體分析如何確定殘留物限度。為簡化計算，假設(shè)生產(chǎn)設(shè)備為阿司匹林片專用，產(chǎn)品規(guī)格分別為0．1g／片、0．3g／0．5g／片。則按MTDD計算的乙酰水酸的外表殘留物限度為：Ld=MTDD／1000×1000B／Uw×l／Dd×l／SA×1000(μｇ／cm2)=900／1000×1000×100／0．5×1／15×l／50000×1000=240μｇ／cm2如從限制每片游離水酸的角度考慮，則應(yīng)以最小片重產(chǎn)品中允許的游離水酸為基準(zhǔn)，再乘以最小批量的片數(shù)，即得批產(chǎn)品中允許的游離水酸總量，再除以設(shè)備總面積即得單位面積游離水酸的限度。應(yīng)當(dāng)指出，游離水酸一方面來自殘留的乙酰水酸的水解，另一方面來自原料本身以及生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的水酸。統(tǒng)計過去生產(chǎn)的多批產(chǎn)品中游離不酸的化驗結(jié)果可確定來自原料和生產(chǎn)過程產(chǎn)生的水酸的平均水平。具體計算過程如下：成品中游離水酸的限度0.3％最小批量片數(shù)1000000片最小片質(zhì)量0.1g多批產(chǎn)品平均游離水酸含量0.2％最小批量l00kg總外表積50000cm2允許由殘留乙酰水酸水解而產(chǎn)生的游離水酸的量為：(0.3％－0.2％)×0.1×1000000×1000=100000(μｇ)假設(shè)所有殘留下的乙酰水酸全部水解為游離水酸，則允許由上批產(chǎn)品殘留的乙酰水酸總量為100000μｇ，乙酰水酸的外表殘留限度為100000／50000＝2(μｇ／cm2)該限度大大低于根據(jù)MTDD計算得到的限度。因此，如果制定限度標(biāo)準(zhǔn)僅以MTDD為依據(jù)，就會在實際生產(chǎn)中遇到很大的質(zhì)量風(fēng)險。四、殘留溶劑的限度標(biāo)準(zhǔn)藥品生產(chǎn)和清潔中可能用到除水外的有機溶劑。人用藥品注冊技術(shù)要求國際標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)會(ICH)在“殘留溶劑指南〞將溶劑分為3個級別。一級溶劑——由于毒性或危害環(huán)境等原因應(yīng)防止在制藥生產(chǎn)中使用的溶劑。如果確實無法替代，其濃度限度見表3—46。二級溶劑——為動物非誘變致癌溶劑、或可能有神經(jīng)毒性或致畸性等不可逆轉(zhuǎn)性毒性并疑心有其他明顯但可逆轉(zhuǎn)毒性的溶劑。在藥品生產(chǎn)中這類溶劑的控制標(biāo)準(zhǔn)如表3—47。三級溶劑——具有潛在低毒性的溶劑。其名稱列于表3—48。ICH“殘留溶劑指南〞規(guī)定，一級溶劑、二級溶劑僅在不可替代的情況下用于藥品生產(chǎn)，但不能用作清潔劑。在無法防止時，三級溶劑可作為清潔劑，其在下批生產(chǎn)中允許的溶劑殘留濃度不應(yīng)超過初始溶劑濃度的0．5％。五、微生物污染控制標(biāo)準(zhǔn)微生物污染水平的制定應(yīng)滿足生產(chǎn)和質(zhì)量控制的要求。興旺國家GMP一般明確要求控制生產(chǎn)各步的微生物污染水平，尤其對無菌制劑，產(chǎn)品最終滅菌或除菌過濾前的微生物污染水平必須嚴(yán)格控制。如果設(shè)備清潔后立即投入下批生產(chǎn)，則設(shè)備中的微生物污染水平必須足夠低，以免產(chǎn)品配制完成后微生物工程超標(biāo)。微生物的特點是在一定環(huán)境條件下會迅速繁殖，數(shù)量急劇增加。而且空氣中存在的微生物能通過各種途徑污染已清潔的設(shè)備。設(shè)備清洗后存放的時間越長，被微生物污染的幾率越大。因此企業(yè)應(yīng)綜合考慮其生產(chǎn)實際情況和需求，自行制定微生物污染水平應(yīng)控制的限度及清洗后到下次生產(chǎn)的最長貯存期限。六、取樣與檢驗方法學(xué)(一)最終淋洗水取樣為大面積取樣方法，其優(yōu)點是取樣面大，對不便拆卸或不宜經(jīng)常拆卸的設(shè)備也能取樣。因此其適用于擦拭取樣不易接觸到的外表，尤其適用于設(shè)備外表平坦、管道多且長的液體制劑的生產(chǎn)設(shè)備。淋洗水樣品的缺點是如上節(jié)討論的溶解與流體力學(xué)原理，當(dāng)溶劑不能在設(shè)備外表形成湍流進(jìn)而有效溶解殘留物時，或者殘留物不溶于水或干結(jié)在設(shè)備外表時，淋洗水就難以反映真實的情況。取樣的方法為根據(jù)淋洗水流經(jīng)設(shè)備的線路，選擇淋洗線路相對最下游的一個或幾個排水口為取樣口。分別按照微生物檢驗樣品和化學(xué)檢驗樣品的取樣規(guī)程收集清潔程序最后一步淋洗即將完畢時的水樣。也可在淋洗完成后在設(shè)備中參加一定量的工藝用水，用量必須小于最小生產(chǎn)批量，使其在系統(tǒng)循環(huán)后在相應(yīng)位置取樣。如在驗證試驗中采用后一方法，其結(jié)果的可靠性要好一些，這是可以預(yù)見的。對淋洗水樣一般檢查殘留物濃度和微生物污染水平。如生產(chǎn)有澄明度與不溶性微粒要求的制劑，通常要求淋洗水符合相關(guān)劑型不溶性微粒和澄明度的標(biāo)準(zhǔn)。(二)擦拭取樣擦拭取樣優(yōu)點是能對最難清潔部位直接取樣，通過考察有代表性的最難清潔部位的殘留物水平評價整套生產(chǎn)設(shè)備的清潔狀況。通過選擇適當(dāng)?shù)牟潦萌軇?、擦拭工具和擦拭方法，可將清洗過程中未溶解的，已“干結(jié)〞在設(shè)備外表或溶解度很小的物質(zhì)擦拭下來，能有效彌補淋洗取樣的缺點。檢驗的結(jié)果能直接反映出各取樣點的清潔狀況，為優(yōu)化清潔規(guī)程提供依據(jù)。擦拭取樣的缺點是很多情況下須拆卸設(shè)備前方能接觸到取樣部位，對取樣工具、溶劑、取樣人員的操作等都有一定的要求，總的來說比擬復(fù)雜。(三)擦拭工具和溶劑進(jìn)展擦拭取樣時應(yīng)注意擦拭工具和溶劑對檢驗的干擾。常用的擦拭工具為藥簽，在一定長度的尼龍或塑料棒的一端纏有不掉纖維的織物。藥簽應(yīng)耐一般有機溶劑的溶解。棉簽容易脫落纖維，故在使用前應(yīng)用取樣用溶劑預(yù)先清洗，以免纖維遺留在取樣外表。溶劑用于擦拭時溶解殘留物并將吸附在擦拭工具上的殘留物萃取出來以便檢測。用于擦拭和萃取的溶劑可以一樣也可不同。一般為水、有機溶劑或兩者的混合物，也可含有外表活性劑等以幫助殘留物質(zhì)溶解。選擇溶劑的原則：①溶劑不得在設(shè)備上遺留有毒物質(zhì)；②應(yīng)使擦拭取樣有較高的回收率；③不得對隨后的檢測產(chǎn)生干擾。藥簽的選擇原則：①能被擦拭溶劑良好地潤濕；②有一定的機械強度和韌性，足以對設(shè)備外表施加一定的壓力和摩擦力，并不易脫落纖維；③能同擦拭和萃取溶劑相兼容，不對檢測產(chǎn)生干擾。(四)擦拭取樣操作規(guī)程①計算所要擦拭外表的面積。每個擦拭部位擦拭的面積應(yīng)以獲取的殘留物的量在檢測方法的線性圍為原則。通?？扇?5cm或100cm。②用適宜的溶劑潤濕藥簽，并將其靠在溶劑瓶上擠壓以除去多余的溶劑。③將藥簽頭按在取樣外表上，用力使其稍彎曲，平穩(wěn)而緩慢地擦拭取樣外表。在向前移動的同時將其從一邊移到另一邊。擦拭過程應(yīng)覆蓋整個外表。翻轉(zhuǎn)藥簽，讓藥簽的另一面也進(jìn)展擦拭。但與前次擦拭移動方向垂直，見圖3—3④擦拭完成后，將藥簽放人試管，并用螺旋蓋旋嚴(yán)密封。⑤按照下述方法制備對照樣品：按步驟2濕潤藥簽，將藥簽直接放人試管并旋嚴(yán)密封。將該樣品與其他樣品一起送至試驗室。⑥取樣完成后應(yīng)在試管上注明有關(guān)取樣信息。擦拭取樣也用于設(shè)備外表微生物的取樣。應(yīng)使用無菌的擦拭棒，按取外表微生物樣的要求取樣。(五)檢驗方法檢驗方法應(yīng)經(jīng)過驗證。檢驗方法對被檢測物質(zhì)應(yīng)有足夠的專屬性和靈敏度。方法驗證還包括檢測限度，精細(xì)度，線性圍，回收率試驗。對用于清潔驗證的檢驗方法的定量要求不必像成品質(zhì)量檢驗?zāi)菢訃?yán)格。一般要求線性圍應(yīng)到達(dá)殘留物限度的50％～150％。代表精細(xì)度的RSD小于10％即可。方法的回收率可與取樣的回收率結(jié)合進(jìn)展。(六)取樣方法驗證取樣過程需經(jīng)過驗證。通過回收率試驗驗證取樣過程的回收率和重現(xiàn)性。要求包括取樣回收率和檢驗方法回收率在的綜合回收率一般不低于50％，有的企業(yè)甚至要求不低于80％，屢次取樣回收率的RSD不大于20％。取樣過程的驗證實際上是對藥簽、溶劑的選擇、取樣人員操作、殘留物轉(zhuǎn)移到藥簽、樣品溶出(萃取)過程的全面考察。驗證方法如下。①準(zhǔn)備一塊與設(shè)備外表材質(zhì)一樣的500mm×500mm的板材。如平整光潔的不銹鋼板。②在鋼板上用鋼錐劃出400mm×400mm的區(qū)域，每隔l00mm劃線，形成16塊100mm×100mm的方塊。③配制含待檢測物濃度為0.016％的溶液，定量裝入噴霧器。④將約10ml溶液盡量均勻地噴在400mm×400mm的區(qū)域。原因⑤根據(jù)實際噴出的溶液量計算單位面積的物質(zhì)量(約1μｇ／cm2)。⑥自然枯燥或用電吹風(fēng)溫和地吹干不銹鋼板。⑦用選定的擦拭溶劑潤濕擦拭工具，按前述擦拭取樣操作規(guī)程擦拭鋼板，每擦一個方塊(100cm2)換一根擦拭棒，共擦6～10個方塊。⑧將擦拭棒分別放人試管中，蓋上試管蓋，參加預(yù)定溶劑10ml，加塞，輕搖試管，并放置10min，使物質(zhì)溶出。⑨用經(jīng)歷證的檢驗方法檢驗，計算回收率和回收率的RSD。取樣員的取樣方式是產(chǎn)生較大RSD的主要原因。應(yīng)盡可能采用固定的力度、擦拭速度和線路。取樣員可根據(jù)擦拭棒彎曲的程度估算加在擦拭外表的壓力。七、驗證方案清潔驗證方案可有多種形式，其共性是必須表達(dá)方案韻科學(xué)性。一般而言應(yīng)當(dāng)包含的容有。(1)目的明確待驗證的設(shè)備和清潔方法。(2)清潔規(guī)程待驗證的清潔方法的SOP即清潔規(guī)程應(yīng)當(dāng)在驗證開場前確定下來，在驗證方案中列出清潔規(guī)程以說明清潔規(guī)程已經(jīng)制定。(3)驗證人員列出參加驗證人員的，說明參加者所屬的部門和各自的職責(zé)，對相關(guān)操作人員的培訓(xùn)要求(4)確定參照物和限度標(biāo)準(zhǔn)在本局部應(yīng)詳細(xì)闡述確定參照物的依據(jù)，確定限度標(biāo)準(zhǔn)的計算過程和結(jié)果。一般可將相關(guān)設(shè)備列表，計算總外表積，特殊外表面積；將相關(guān)產(chǎn)品列表，列入主要活性成分及其相關(guān)物理化學(xué)性質(zhì)，MTDD值等，確定參照物質(zhì)，計算限度標(biāo)準(zhǔn)。(5)檢驗方法學(xué)本局部應(yīng)說明取樣方法、工具、溶劑，主要檢驗儀器，取樣方法和檢驗方法的驗證情況等。(6)取樣要求用示意圖、文字等指明取樣點的具體位置和取樣方案，明確規(guī)定何時、何地、取多少樣品，如何給各樣品標(biāo)記。這局部的容對方案的實施和保證驗證結(jié)果的客觀性是至關(guān)重要的。(7)可靠性判斷標(biāo)準(zhǔn)在本局部，應(yīng)規(guī)定為證明待驗證清潔規(guī)程的可靠性，驗證試驗須重復(fù)的次數(shù)。一般起碼連續(xù)進(jìn)展3次試驗，所有數(shù)據(jù)都符合限度標(biāo)準(zhǔn)方可。第四節(jié)驗證的實施當(dāng)驗證方案獲得批準(zhǔn)，所有準(zhǔn)備工作進(jìn)展完畢后，即進(jìn)入了驗證實施階段。驗證實施應(yīng)嚴(yán)格按照批準(zhǔn)的方案執(zhí)行。本階段的關(guān)鍵在于清潔規(guī)程的執(zhí)行和數(shù)據(jù)的采集：取樣與化驗。驗證實施后寫出驗證報告。應(yīng)及時、準(zhǔn)確地填寫清潔規(guī)程執(zhí)行記錄，保證清潔過程完全按照規(guī)程進(jìn)展。執(zhí)行規(guī)程的人員應(yīng)當(dāng)是將來進(jìn)展正式操作的那些人員，而不應(yīng)由方案設(shè)計人員或其他技術(shù)人員代替。當(dāng)然，有關(guān)技術(shù)人員可在旁觀察規(guī)程的執(zhí)行情況，以便及．時發(fā)現(xiàn)偏差并予以糾正。取樣應(yīng)由經(jīng)過專門培訓(xùn)并通過取樣驗證的人員進(jìn)展，樣品標(biāo)簽可在取樣前貼好，根據(jù)標(biāo)簽的指示取樣，也可在取樣后立即貼上標(biāo)簽，無論采取何種方式，應(yīng)以方案規(guī)定為準(zhǔn)。檢驗應(yīng)按照預(yù)先開發(fā)并驗證的方法進(jìn)展。所用的試劑、對照品、儀器等都應(yīng)符合預(yù)定要求。檢驗機構(gòu)出具的化驗報告及其原始記錄應(yīng)作為驗證報告的容或。驗證過程中出現(xiàn)的偏差均應(yīng)記錄在案，并由專門人員討論并判斷偏差的性質(zhì)，確定是否對驗證結(jié)果產(chǎn)生實質(zhì)影響。一般如檢驗結(jié)果超出限度，并經(jīng)證明并非化驗誤差所致時，該偏差應(yīng)作為關(guān)鍵偏差。這時應(yīng)進(jìn)展原因調(diào)查，確定原因并采取必要措施后重新進(jìn)展驗證試驗。驗證結(jié)論應(yīng)在審核了所有清潔作業(yè)記錄、檢驗原始記錄、化驗報告、偏差記錄前方能做出。其結(jié)果只有合格或不合格兩種，不可模棱兩可。驗證報告至少包括以下容。(1)清潔規(guī)程的執(zhí)行情況描述，附原始清潔作業(yè)記錄。(2)檢驗結(jié)果及其評價，附檢驗原始記錄和化驗報告。(3)偏差說明，附偏差記錄與調(diào)查。(4)驗證結(jié)論。第五節(jié)清潔方法的監(jiān)控與再驗證一、日常監(jiān)控清潔驗證報告一旦批準(zhǔn)，清潔驗證即告完成，該清潔方法即可正式投入使用。同藥品生產(chǎn)工藝過程一樣，經(jīng)歷證后，清潔方法即進(jìn)人了監(jiān)控與再驗證階段，應(yīng)當(dāng)以實際生產(chǎn)運行的結(jié)果進(jìn)一步考核清潔規(guī)程的科學(xué)性和合理性。在日常生產(chǎn)過程中對清潔方法進(jìn)展監(jiān)控的目的是進(jìn)一步考察清潔程序的可靠性。驗證過程中進(jìn)展的試驗往往是有限的，它包括不了實際生產(chǎn)中各種可能的特殊情況，監(jiān)控則正好彌補這方面的缺乏。對手工清洗規(guī)程來說，這點尤其重要，因為其重現(xiàn)性很大程度上更取決于對人員的培訓(xùn)和實施清潔人的工作態(tài)度。監(jiān)控的方法一般為肉眼觀察是否有可見殘留物，必要時可定期取淋洗水或擦拭取樣進(jìn)展化驗。由于對指定殘留物的定量分析通常比擬繁瑣，可開發(fā)*些有足夠靈敏度且快速的非專屬性檢驗方法，如測定總有機碳(TOC)。美國藥典、歐洲藥典已將TOC指標(biāo)確立為注射用水和純水的法定工程，以反映水中有機物的污染情況。由于該方法的高靈敏性和自動化，且絕大多數(shù)殘留物是有機物，興旺國家或技術(shù)水平較高的制藥企業(yè)越來越多地將其作為清潔作業(yè)的日常監(jiān)控方法。如果日常樣品的TOC值低且波動較小，則證明清潔效果滿意，清潔規(guī)程得到了良好的遵守。一旦出現(xiàn)異常，則提示可能出現(xiàn)了問題，此時再采用專門的分析方法對污染物定性定量。通過對日常監(jiān)控數(shù)據(jù)的回憶，以確