乳腺癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中er、pr、her-2及ki-67表達(dá)的相關(guān)性研究

乳腺癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中er、pr、her-2及ki-67表達(dá)的相關(guān)性研究

腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是一個復(fù)雜的過程，有許多因素和步驟。腫瘤異質(zhì)性是影響腫瘤治療效果和預(yù)后的最重要因素之一。乳腺癌腫瘤組織雌激素受體(estrogenreceptor,ER)、孕激素受體(progestinreceptor,PR)和表皮生長因子受體(humanepidermalgrowthfactor,HER-2)表達(dá)對預(yù)后的判斷及治療方案的選擇具有重要的指導(dǎo)意義。臨床治療中對于乳腺癌的輔助治療既往主要根據(jù)病期、原發(fā)灶中ER、PR與HER-2的表達(dá)狀況判斷,而忽略了轉(zhuǎn)移灶中三者的表達(dá)變化情況以及是否影響患者的治療及預(yù)后的判斷。近年來,對于乳腺癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中ER、PR與HER-2表達(dá)差異的研究報道不盡相同。本研究檢測83例乳腺癌患者原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶組織中ER、PR、HER-2及Ki-67的表達(dá)狀況,并對其相關(guān)性進(jìn)行分析。1材料和方法1.1研究對象的選取2012-01-01-2012-09-30山東省腫瘤醫(yī)院外科二病區(qū)手術(shù)治療的女性乳腺癌患者236例,選取其中術(shù)后病理確診同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者83例作為研究對象。年齡24~73歲,中位年齡47歲。按照2003年TNM分期,Ⅱ期48例,Ⅲ期27例,Ⅳ期8例。1.2試劑和方法1.2.1itingsp超敏試驗試劑DAB顯色劑和UltraSensitiveSP超敏試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司,乙醇、二甲苯等其他試劑由山東省腫瘤醫(yī)院提供。1.2.2脫苯、重建和復(fù)生物素nd-pcr術(shù)后切取乳腺癌原發(fā)灶和腋窩淋巴結(jié)標(biāo)本,10%甲醛溶液固定,同時取乳腺癌原發(fā)灶標(biāo)本與病理確診的轉(zhuǎn)移腋窩淋巴結(jié),4μm連續(xù)切片,于同一載玻片在相同的條件與時間下,經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫苯入水。3%H2O2處理后用PBS充分洗滌,用微波爐進(jìn)行抗原熱修復(fù),ER、PR和HER-2用枸櫞酸緩沖液修復(fù),Ki-67用EDTA緩沖液進(jìn)行修復(fù),熱修復(fù)后,讓其自然冷卻至室溫,加ER、PR、HER-2以及Ki-67單克隆抗體,每片50μL放置于濕盒中,4℃冰箱過夜?；謴?fù)至室溫后,PBS沖洗后滴加生物素標(biāo)記的二抗,室溫孵育后PBS充分沖洗。加辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素室溫孵育,PBS充分沖洗,DAB顯色,蘇木精復(fù)染,中性樹膠封片。用已知的陽性切片做陽性對照,PBS替代一抗作為陰性對照,顯微鏡下觀察并拍照。1.3診斷見表2原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶分別隨機(jī)選擇5個高倍視野,計數(shù)500個以上細(xì)胞。以胞核著色判斷為陽性,根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)計分,無陽性細(xì)胞計0分,陽性細(xì)胞數(shù)1%~30%計1分,>30%~70%計2分,>70%~100%計3分;再根據(jù)陽性著色強(qiáng)度,淺棕色計1分,棕黃色計2分,深棕色計3分,每張切片進(jìn)行兩項分?jǐn)?shù)累計,0分為陰性,≤2分為(+),3~4分為(++),5~6分為(+++)。其中ER、PR與Ki-67(+)以上均記為陽性,HER-2(+++)者為陽性,其中所有HER-2(++)為可疑陽性的患者均行FISH檢測,FISH結(jié)果陽性者記HER-2陽性,結(jié)果為陰性的仍記為陰性(圖1)。Ki-67表達(dá)依據(jù)2011年國際乳腺會議確定標(biāo)準(zhǔn),Ki-67<14%為低表達(dá),≥14%為高表達(dá)。1.4統(tǒng)計學(xué)分析實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,計數(shù)資料采用百分率表示,組間比較采用χ2檢驗,采用spearman相關(guān)分析不同標(biāo)志間的關(guān)聯(lián)。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。2結(jié)果2.1原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶之間的差異表1和表2所示,原發(fā)灶中ER陽性和陰性表達(dá)分別為55例和28例,轉(zhuǎn)移灶中分別為47例和36例,原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶ER表達(dá)一致,即陰/陰或陽/陽分別為26例和45例,共71例,一致率為85.5%,變化率為14.5%。ER在原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶之間的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P=0.039。原發(fā)灶中PR陽性和陰性表達(dá)分別為55例和28例,轉(zhuǎn)移灶中分別為51例和32例,原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶PR表達(dá)一致,即陰/陰或陽/陽分別為49例和26例,共75例,一致率為90.4%,變化率為9.6%。PR在原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶之間的差異無統(tǒng)學(xué)意義,P=0.289。原發(fā)灶中HER-2陽性和陰性表達(dá)分別為16例和67例,轉(zhuǎn)移灶中分別為11例和72例,原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶HER-2表達(dá)一致,即陰/陰或陽/陽分別為65例和9例,共74例,一致率為89.2%,變化率為10.8%。HER-2在原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義,P=0.180。2.2轉(zhuǎn)移灶與ki-97低表達(dá)的關(guān)系表3和表4所示,原發(fā)灶中Ki-67低表達(dá)者40例,高表達(dá)者43例。轉(zhuǎn)移灶中Ki-67低表達(dá)者43例,高表達(dá)者40例。統(tǒng)計學(xué)分析顯示,原發(fā)灶Ki-67高表達(dá)和轉(zhuǎn)移灶Ki-67低表達(dá)與ER表達(dá)相關(guān),P=0.031。Ki-67在原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶的表達(dá)水平與PR和HER-2表達(dá)無關(guān),P>0.05。3er、pr、her-2在原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶之間表達(dá)的差異乳腺癌具有異質(zhì)性,由于一系列乳腺癌相關(guān)基因的異常表達(dá),基因的不同表達(dá)組合可以提示腫瘤患者預(yù)后以及預(yù)測治療效果。通過免疫組織化學(xué)檢測ER、PR、HER-2與Ki-67的表達(dá)可以對乳腺癌進(jìn)行分子分型,便于制定治療策略。2007年ASCO會議建議應(yīng)該對所有乳腺癌患者原發(fā)灶均行ER、PR與HER-2免疫組化檢測,如果結(jié)果影響治療方案,也需對轉(zhuǎn)移灶的ER、PR與HER-2進(jìn)行免疫組化檢測。近年來研究發(fā)現(xiàn),乳腺癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶之間ER、PR及HER-2的表達(dá)存在差異。2011年,鄧智平等研究發(fā)現(xiàn),ER在原發(fā)灶和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義,變化率為66.67%;PR與HER-2在原發(fā)灶和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義,變化率分別為17.78%和13.33%。而趙海波等報道ER、PR與HER-2在原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。該研究發(fā)現(xiàn)ER在乳腺癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶之間表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義,PR與HER-2在原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。Sara等研究發(fā)現(xiàn),ER和PR在原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶表達(dá)一致率分別為81%和65%。本研究中ER在原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶表達(dá)一致率為85.5%,PR表達(dá)一致率為90.4%,略高于上述研究。Lower等對382例乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者HER-2的研究發(fā)現(xiàn),254例(66%)原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶是一致的,90例原發(fā)灶陽性而轉(zhuǎn)移灶陰性,37例原發(fā)灶陰性而轉(zhuǎn)移灶陽性。Sara等報道HER-2在乳腺癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶表達(dá)一致率為71%。該研究中發(fā)現(xiàn)HER-2在原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶表達(dá)一致率為89.2%,有較高一致率,且不一致的病例大部分為原發(fā)灶陽性而轉(zhuǎn)移灶陰性,這可能提示腫瘤在向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中體內(nèi)某種機(jī)制抑制了HER-2的表達(dá)。Ki-67抗原是存在于增殖細(xì)胞核的一種核抗原,能有效反應(yīng)腫瘤細(xì)胞增殖活性,是目前已知的腫瘤增殖抗原中最具增殖能力代表性、應(yīng)用最廣泛的標(biāo)志之一。Tawfik等研究發(fā)現(xiàn),檢測淋巴結(jié)Ki-67的表達(dá)狀況要優(yōu)于評估原發(fā)灶Ki-67的表達(dá),并且有助于選擇治療方案。本研究結(jié)果顯示,原發(fā)灶Ki-67高表達(dá)和轉(zhuǎn)移灶Ki-67低表達(dá)與ER表達(dá)相關(guān),P=0.03