藥用植物zxxrrx抑制劑對小鼠腹瀉的治療作用

藥用植物zxxrrx抑制劑對小鼠腹瀉的治療作用

蜘蛛香是科維托科的一種蝴蝶香。始載于《滇南本草》,2010版藥典(一部)亦收載。為云南省多民族共用的傳統(tǒng)草藥,是苗藥的主流品種之一,微苦、辛、溫,歸心、脾、胃經(jīng)。功效為:理氣止痛、消食止瀉、祛風除濕、鎮(zhèn)驚安神,用于脘腹脹痛、食積不化、腹瀉痢疾、風濕痹痛、腰膝酸軟、失眠等。課題組前期實驗研究發(fā)現(xiàn):蜘蛛香原粉及環(huán)烯醚萜類成分對慢性應激所致IBS模型大鼠的胃腸功能亢進具有改善作用且二者可明顯減少IBS模型大鼠的排便粒數(shù)。進一步對蜘蛛香環(huán)烯醚萜類成分進行分離得到了ZXX。在以上基礎(chǔ)上,本研究將對ZXX止瀉、改善胃腸功能的藥效學進行研究,為臨床治療腹瀉型腸易激綜合征等胃腸疾病奠定有效物質(zhì)基礎(chǔ)。1實驗材料1.1動物許可證ICR小鼠,體重20~22g,雄性。購自北京金牧陽實驗動物養(yǎng)殖有限責任公司,動物許可證編號:SCXK(京)2009-0007。1.2藥物和試劑1.2.1藥物、試劑和儀器蜘蛛香環(huán)烯醚萜類成分ZXX:由北京中醫(yī)藥大學中藥化學系提供,按照蜘蛛香臨床用藥劑量和ZXX提取率將ZXX設為3種劑量:大劑量(1.6mg/kg)、中劑量(0.8mg/kg)、小劑量(0.4mg/kg)。復方地芬諾酯片:常州康普藥業(yè)有限公司,批號:1104032。番瀉葉:購自北京中醫(yī)藥大學國醫(yī)堂。越鞠保和丸:北京同仁堂制藥有限公司,批號:X0020。硫酸阿托品:天津藥業(yè)集團新政股份有限公司,批號:1101222。利血平注射液:1g/L,天津金耀氨基酸有限公司,批號:1104081。伊文思藍,Sigma進口分裝。1.2.2番瀉葉的制備ZXX、復方地芬諾酯、越鞠保和丸、硫酸阿托品和百憂解:取適量藥物溶于0.5%CMC中制成混懸液。番瀉葉配制方法:熱水浸泡2次,每次20min,雙層紗布過濾,合并濾液,制成40g(生藥)/100mL藥液,然后加入等量碳素墨水,制成20%番瀉葉-50%碳素墨水的混合液。4℃保存?zhèn)溆?。利血平注射?用生理鹽水稀釋20倍后備用。1.3主要設備自主活動儀:MK-ANIMEX,日本。MC-108L型電子體溫計:歐姆龍(大連)有限公司。2實驗方法2.1為復方地芬諾酯組20.ICR小鼠,90只,雄性。將動物隨機分為:正常對照組,番瀉葉模型(4g/kg)組,ZXX高、中、低劑量組(1.6、0.8、0.4mg/kg)和復方地芬諾酯組(20mg/kg)。各組給藥量均為0.2mL/10g,對照組給予0.5%CMC,每日給藥1次,連續(xù)4d。第3日給藥后各組動物均禁食不禁水24h,第4日各組動物給藥1h后,除對照組外各組動物均灌胃給予20%番瀉葉-50%碳素墨汁,對照組動物灌胃等容量的50%碳素墨汁。隨后將動物單只置于800mL玻璃燒杯下,觀察出現(xiàn)第1粒黑便的潛伏期(灌胃碳素墨汁起至第1粒黑便出現(xiàn)的時間),連續(xù)觀察6h。2.2單次給藥及應激ICR小鼠,90只,雄性。將動物隨機分為:正常對照組,應激加番瀉葉模型(4g/kg)組,ZXX高、中、低劑量組(1.6、0.8、0.4mg/kg)和復方地芬諾酯組(20mg/kg)。各組給藥量均為0.2mL/10g,對照組給予0.5%CMC,每日給藥1次,連續(xù)9d。除對照組外其它組小鼠每日用15℃冷水浸沒至其胸腰段,造成應激狀態(tài)。每天持續(xù)1h,共應激8d。每次應激結(jié)束后除對照組外其他動物灌胃10%的番瀉葉水煎液(2g/kg)。第8日給藥后各組動物均禁食不禁水12h,第9日各組動物給藥1h后,除對照組外均灌胃給予10%番瀉葉-50%碳素墨汁(碳素墨水與等量20%番瀉葉水煎液的混合液),對照組動物灌胃等容量的50%碳素墨汁。隨后將動物單只置于代謝籠中,觀察出現(xiàn)第1粒黑便的潛伏期(灌胃碳素墨汁起至第1粒黑便出現(xiàn)的時間),連續(xù)觀察8h。2.3小鼠解血糖給藥、造模和推進率測定ICR小鼠,84只,雄性。將動物隨機分為:正常對照組,利血平模型組(0.3mg/kg),ZXX高、中、低劑量組(1.6、0.8、0.4mg/kg),硫酸阿托品組(1mg/kg)和越鞠保和丸組(2g/kg),各組給藥量均為0.2mL/10g,對照組給予0.5%CMC,每日給藥1次,連續(xù)9d。除對照組外,其它組小鼠給藥同時皮下注射利血平(0.3mg/kg)造模,對照組小鼠皮下注射等量生理鹽水。第8日給藥后將動物禁食不禁水24h,第9日給藥后1h給小鼠灌服半固體糊[配制方法:16g奶粉、8g糖、10g小鼠飼料粉(過80目篩)和3mL1%伊文思藍溶液,加入5%CMC至250mL,充分攪拌均勻],0.4mL/只。15min后脫頸椎處死小鼠,開腹,取出小腸,輕輕剝離后直鋪于白紙上,測量小腸全長(幽門至回盲部的距離)及推進距離(幽門至藍色半固體糊前沿的距離)。按下式計算小腸推進率。小腸推進率(%)=推進距離/小腸全長×100%。2.4動物分組及觀察指標表1ICR小鼠,72只,雄性。將動物隨機分為:正常對照組,利血平模型組(0.3mg/kg),ZXX高、中、低劑量組(1.6、0.8、0.4mg/kg),百憂解組(2mg/kg),各組給藥量均為0.2mL/10g,對照組給予0.5%CMC,每日給藥1次,連續(xù)9d。除對照組外,其它組小鼠給藥同時皮下注射利血平(0.3mg/kg)造模,對照組小鼠皮下注射等量生理鹽水。第7日給藥并皮下注射利血平后1h,將小鼠置于自主活動記錄儀中,記錄4min內(nèi)動物活動次數(shù)。第8日給藥并皮下注射利血平后1h,將小鼠放入燒杯中,觀察其眼瞼閉合并評分(評分標準:眼瞼全閉4分;閉3/4,3分;閉1/2,2分;閉1/4,1分;全睜,0分)。然后將體溫計探頭插入小鼠肛門內(nèi)約1.2cm測量體溫。2.5-4方差分析采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析,數(shù)據(jù)以ue0af±s表示,用One-wayANOVA進行方差分析,LSD進行組間比較,P<0.05為有統(tǒng)計學差異。3結(jié)果3.1短p>0.0灌服番瀉葉后可引起動物腹瀉。與正常對照組比,模型小鼠排便潛伏期顯著縮短(P<0.01),且排出黑色稀便。與番瀉葉致瀉模型組比較,ZXX大劑量組可顯著延長小鼠排黑便潛伏期(P<0.01),復方地芬諾酯組可明顯延長小鼠排黑便潛伏期(P<0.05)。實驗結(jié)果見表1。3.2各組小鼠排黑便刑期與正常對照組比,應激加番瀉葉模型組小鼠排便潛伏期顯著縮短(P<0.01)。與模型組比,ZXX大劑量組可顯著延長小鼠排黑便潛伏期(P<0.01),復方地芬諾酯組可明顯延長小鼠排黑便潛伏期(P<0.05)。實驗結(jié)果見表2。3.3小鼠腸運動相關(guān)指標檢測腸推進率:與對照組比較,模型組有顯著性差異(P<0.01);與模型組比較,ZXX各劑量均有顯著性差異(P<0.01),提示ZXX各劑量具有抑制利血平造成的小鼠腸運動亢進的作用。實驗結(jié)果見表3。3.4小鼠造林后活動次數(shù)對zx的影響與對照組比較,利血平模型組小鼠自主活動顯著下降(P<0.01);與模型組比較,ZXX各劑量均有增加小鼠活動次數(shù)的趨勢,但無顯著性差異(P>0.05)。實驗結(jié)果表4。利血平慢性給藥可致小鼠體溫下降、閉眼。由表5可知ZXX各劑量對利血平慢性給藥所致體溫下降均有明顯的拮抗作用,而中劑量和低計量可明顯逆轉(zhuǎn)利血平化小鼠的閉眼狀況。4應激與腹瀉對小鼠腹瀉的治療作用本研究采用番瀉葉致小鼠腹瀉模型,應激加番瀉葉致小鼠腹瀉模型和利血平造成小鼠胃腸運動障礙和行為異常模型,來觀察ZXX對腹瀉和胃腸功能亢進小鼠的作用。傳統(tǒng)中醫(yī)認為,番瀉葉甘、苦、寒,歸大腸經(jīng),具有瀉熱導滯、通便、利水之功效,有效成分主要為番瀉苷A、B,其瀉下作用比刺激性較蒽醌類及其他瀉藥更強,因而瀉下時可伴有腹痛。將番瀉葉熱水浸泡2次,每次20min,雙層紗布過濾,合并濾液,制成40g(生藥)/100mL藥液,結(jié)果腹瀉率為100%。利血平能使中樞和外周交感神經(jīng)末梢囊泡內(nèi)NE等單胺類遞質(zhì)耗竭,由腎上腺素能神經(jīng)功能低下,副交感神經(jīng)功能相對偏亢所致,小鼠的行為學表現(xiàn)食欲減退、體重減輕、活動減少、腹瀉等癥狀,其實質(zhì)是興趣和愉悅感減少,精神狀態(tài)異常。小鼠利血平化阻斷了交感神經(jīng)對胃腸道平滑肌運動的支配作用,而突出了膽堿能神經(jīng)的支配作用,從而引起胃腸運動亢進。實驗發(fā)現(xiàn),與番瀉葉致腹瀉模型小鼠比應激加番瀉葉致瀉模型小鼠情緒暴躁,毛發(fā)較稀疏,體重下降。在排便潛伏期測定的實驗結(jié)果中顯示:ZXX對應激加番瀉葉(2g/kg)腹瀉的作用效果(170.08±57.98)min優(yōu)于對番瀉葉(4g/kg)致小鼠腹瀉的作用(136.40±50.97)min,提示ZXX對應激兼腹瀉的治療作用優(yōu)于單純的腹瀉。在對利血平致小鼠腹瀉模型胃腸運動的實驗中發(fā)現(xiàn),利血平化小鼠的行為學表現(xiàn)食欲減退、體重減輕、活動減少、腹瀉等癥狀。實驗結(jié)果顯示ZXX