乳腺癌中er、pr和epha2表達的臨床研究

乳腺癌中er、pr和epha2表達的臨床研究

乳腺癌是女性最常見的腫瘤之一。近年來我國婦女乳腺癌發(fā)病率呈上升趨勢,其預后的判斷及與預后相關的生物標志物的測定倍受關注。本研究通過檢測ER、PR和EphA2在乳腺癌組織的表達,探討其在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。1材料和方法1.1病例選擇性別選取山東省諸城市人民醫(yī)院2003年2月-2007年9月行乳腺癌根治術或改良根治術的組織石蠟標本130例,均為女性,年齡30～65歲,中位年齡54.5歲。其中導管內癌6例,浸潤性導管癌50例,髓樣癌24例,浸潤性小葉癌25例,其他類型癌25例。腋窩淋巴結轉移80例,無淋巴結轉移50例。TNM分期:臨床分期0～Ⅰ期40例,Ⅱ期48例,Ⅲ期37例,Ⅳ期5例。均經兩位以上病理醫(yī)師分別閱片,取得一致意見后重新認定。所有標本均經4%甲醛溶液固定,石蠟包埋,4μm厚連續(xù)切片,分別作HE染色和免疫組化檢測。1.2epha2抗體ER、PR單克隆抗體及S-P免疫組化相關試劑盒均購自福州邁新生物技術有限公司。EphA2多克隆抗體購自上海卓康生物技術有限公司。采用S-P免疫組化染色法,以PBS代替一抗作陰性對照,光學顯微鏡觀察著色反應。1.3bs-p法采用S-P二步法免疫組化染色。切片厚4μm,脫蠟,梯度酒精水化,高壓鍋熱處理5-8分鐘進行抗原修復,PBS沖洗,3%過氧化氫阻斷過氧化物酶,馬血清封閉,加用一抗,4℃冰箱孵育過夜,加生物素標記的二抗,室溫下30分鐘后PBS充分洗滌,加入S-P復合物孵育20-30分鐘;PBS洗3次,每次2分鐘;DAB顯色,蘇木素復染。自來水沖洗返藍,梯度酒精脫水,中性樹膠封片。用PBS代替一抗作為陰性對照,已知陽性片作為陽性對照。1.4er、pr優(yōu)化的標準隨機選擇5個高倍鏡視野,計數500個細胞,根據著色細胞占腫瘤細胞數的比例來分為(-)和(+):ER、PR細胞核著棕黃色顆粒的細胞凡5個高倍視野>10%以上者為陽性,否則為陰性。EphA2陽性標準為胞膜和細胞漿同時染成棕黃色或棕褐色的細胞,凡5個高倍視野>20%者為陽性,否則為陰性病例。結果判斷均由兩名高年資病理科醫(yī)生統(tǒng)一核準。1.5樣本率及相關性分析應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析,樣本率的比較采用χ2檢驗,相關性分析采用Spearman檢驗,檢驗標準均取P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2er、pr和epha2表達的陽性表達乳腺癌組織中ER、PR和EphA2的表達與各臨床病理特征及相互關系見表1、表2。ER、PR陽性著色部位在胞核,呈棕黃色或棕褐色,灶性、片狀和散在分布(圖1、2),EphA2陽性著色部位在細胞膜和細胞漿,呈棕黃色或棕褐色(圖3);ER、PR和EphA2的陽性表達率分別為63.1%、58.4%和72.3%;ER、PR的陽性表達與乳腺癌患者的年齡、病理組織學類型、腫瘤大小、淋巴結轉移和臨床分期無顯著相關(P>0.05);EphA2的陽性表達與與乳腺癌患者的年齡、與腫瘤大小、病理組織學類型無顯著相關(P>0.05);而與腋窩淋巴結轉移、臨床分期顯著相關,淋巴結轉移組的陽性表達率顯著高于無淋巴結轉移組(P<0.05),臨床分期較晚者陽性表達率顯著高于臨床分期較早者(P<0.05);EphA2的陽性表達率在乳腺癌ER\PR陰性組明顯高于ER\PR陽性組(P<0.05)。3乳腺癌中er、pr、epha2表達與er的相關性乳腺癌雌激素受體(estrogenreceptor,ER)、孕激素受體(progesteronereceptor,PR)是正常乳腺上皮細胞存在的性激素受體,是屬于核受體超家族中的甾體激素受體。PR是雌激素和雄激素受體結合誘導的產物,其合成數量與雌激素受體復合物移位于細胞核內數量呈平衡關系。PR的出現顯示ER功能機制的完整性,PR在孕激素存在的情況下,可顯著抑制乳腺癌細胞株的生長,抑制腫瘤細胞的浸潤和轉移。乳腺癌表達ER、PR說明癌細胞已保留激素依賴性生長的特征。其陽性表達說明其分化程度高,惡性程度低,內分泌治療反應好,預后好。陰性表達提示腫瘤惡性程度高,預后差。較多的臨床報道顯示乳腺癌內分泌治療的有效率僅為20%～30%,很少能達到完全緩解(CR)。進一步研究證實,受體狀況不明的乳腺癌患者,其內分泌治療的有效率僅為30%;ER陽性患者有效率達到50%～60%,而ER陰性患者的有效率為5%～8%;ER、PR均為陽性者其內分泌治療的有效率為70%。對于年老、絕經后受體陽性、病情發(fā)展緩慢、轉移部位為骨及軟組織的患者,主張首選內分泌治療,說明ER、PR狀態(tài)在乳腺癌治療中的重要意義?，F在二者已成為公認的估測乳腺癌患者預后和選擇治療方案的指標。李道旺等研究顯示乳腺癌中ER與PR的表達分別與組織學分級呈負相關,但ER陽性表達與患者的年齡、臨床分期、淋巴結轉移與否及腫瘤大小均無明顯相關,乳腺癌中PR的表達與患者年齡呈負相關,與患者臨床分期、有無淋巴結轉移及腫塊大小也均無相關。本研究結果顯示乳腺癌組織中ER、PR的陽性表達率與年齡、組織學類型、腫瘤大小、淋巴結轉移和臨床分期均無顯著相關(P>0.05)。受體酪氨酸激酶(receptortyrosinekinases,RTKs)是外界刺激信息傳遞至細胞核,轉化成細胞效應的信號轉導通路中的關鍵分子組成。Eph基因家族是新發(fā)現的最大的RTKs家族成員,EphA2是該家族中被發(fā)現具有酪氨酸激酶活性的第一個基因。EphA2定位于人染色體1p36.1,編碼一個含有976個氨基酸殘基的多肽,為膜結合Ⅰ型糖蛋白。與其他受體酪氨酸激酶一樣,EphA2分子可分成三個結構區(qū),即胞外的配體結合區(qū)、細胞內部具有酪氨酸激酶活性的功能區(qū)和連接這兩個區(qū)域的由疏水氨基酸組成的跨膜區(qū)。在許多腫瘤細胞模型和臨床樣本中,均報道EphA2高水平的表達,包括乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、肺癌、高侵襲性黑色素瘤、子宮頸癌、卵巢癌等。Zelinski等報道,EphA2的表達增高,能誘導非轉化乳腺上皮細胞在體內和體外的惡性轉化,削弱腫瘤細胞之間的連接,增加腫瘤細胞與細胞外基質成分的黏附,增強對基質的侵襲,促進腫瘤的侵襲、轉移。秦艷等研究顯示EphA2蛋白的過表達與乳腺癌患者絕經狀態(tài)、臨床分期、組織學分級及有無淋巴結轉移有關(P<0.05),乳腺癌中EphA2與ERβ的表達呈負相關。而趙瑞皎等研究則發(fā)現EphA2的表達水平與乳腺癌患者的年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移情況無明顯相關性,但與ER表達呈負相關,ER陰性組EphA2的陽性表達率明顯高于ER陽性組。國外研究也發(fā)現,乳腺癌細胞中EphA2表達水平與ER的表達呈負相關。ER缺陷的乳腺癌細胞中,通常EphA2表達水平最高;雌二醇(E2)處理乳腺上皮細胞后,可以下調EphA2的表達;EphA2過表達可以降低ER陽性乳腺癌細胞對雌激素的需要和依賴性,使乳腺癌細胞對三苯氧胺產生抵抗;并且發(fā)現抗EphA2抗體可以阻斷EphA2過表達所產生的后果,使過表達EphA2的細胞恢復對化療藥物的敏感性。本研究顯示EphA2陽性表達與乳腺癌患者的年齡、腫瘤大小、病理組織學類型均無顯著相關(P>0.05);而與腋窩淋巴結轉移、臨床分期顯著相關(P<0.05),有腋窩淋巴結轉移者其陽性表達率顯著高于腋窩淋巴結陰性者,臨床分期較晚者其陽性表達率顯著高于臨床分期較早者。本研究還顯示EphA2的表達與ER\PR的表達成負相關,EphA2的陽性表達率在乳腺癌ER\PR陰性組明顯高于ER\PR陽性組(P<0.05)。綜上所述,EphA2過表達于乳腺癌組織中,而表達強度隨乳腺癌惡性度的增高而增強,提示EphA2有可能是乳腺癌的一個新的標志物,ER、PR和EphA2的聯合檢測可能有助于客觀評估乳腺癌的生物學行為,用來指導臨床用藥和預測預后。但作者也注意到,目前關于ER、PR和EphA2在乳腺癌中表達的研究結果還不一致,這種差別可能是很多原因造成的。腫瘤組織病理形態(tài)學的改變給病理醫(yī)師判斷腫瘤特異性標記物的表達帶來難度;且腫瘤取材部位的差異也可能會造成腫瘤特異性標記物的表達差異,用于檢測生物因子的腫瘤標本只能是整個腫瘤組織的一部分,而整個腫瘤組