高壓蒸汽殺菌鍋使用的注意事項

高壓蒸汽殺菌鍋使用的注意事項

高壓蒸汽滅菌爐是微生物實驗中不可或缺的設備。在沒有細菌細菌過程的情況下，很難進行微生物實驗。我校微生物學實驗室目前使用的滅菌器為下排氣式蒸汽滅菌鍋和脈動真空壓力蒸汽滅菌器兩種,在操作過程中常常遇到滅菌失敗的情況,其原因主要是冷空氣沒有充分地從高壓蒸汽滅菌器內(nèi)排出,以致影響熱能的穿透,降低蒸汽的分壓,使之不能升到應有的溫度,因而要掌握滅菌鍋的正確使用,不僅要了解滅菌鍋的構造,而且使用經(jīng)驗也非常重要。筆者多年從事微生物學實驗準備工作并經(jīng)常使用高壓鍋,本文對高壓蒸汽滅菌鍋使用過程中的注意事項以及影響因素作一歸納總結,并針對具體情況具體分析,提出自己的對策和見解,為使用高壓鍋的同行提供參考,提高實驗教學質量。1.注意使用氮肥注釋(1)在使用反滲透膜時,將待滅菌物品放入鍋內(nèi)之前,一定先檢查鍋內(nèi)水位,觀察控制面板上的工作燈和水位燈的顯示情況,顯示低水位應先向鍋內(nèi)加水,當高水位燈亮時應停止加水,當水位過多應開啟下排水閥放去內(nèi)膽中的多余水量。另外,使用高壓鍋時特別應注意的是鍋蓋的旋開,如果鍋蓋旋不到一定高度,當旋緊鍋蓋時很容易將橡膠封閉圈摩擦變形,時間久了封閉圈就會斷裂、漏氣,高壓鍋暫時就沒法使用,影響實驗進行。高壓鍋封閉圈一般都是專用的,不僅價格貴而且還要向生產(chǎn)廠家訂購,需要很長時間,影響實驗的準備。因此,為避免這種情況發(fā)生,必須將鍋蓋旋至一定高度,減少對封閉圈的摩擦,延長其使用壽命。(2)做好層物品的投放和網(wǎng)裝為了達到滅菌的目的,鍋內(nèi)待滅菌物品應不要太緊太滿,以利于蒸汽流通。體積過大蒸汽就不易穿透物品。最下層物品擺放盡量稀疏,因下層蒸汽量相對少,分壓不夠,往往造成滅菌不完全。因此擺放時注意上下交錯疊放,使留有較多空隙,利于蒸汽穿透。如需要對較小物品滅菌時,應事先裝在容器中,所選容器也應盡量小且淺,且有通氣孔,若用過大、過深及不帶孔的容器,蒸汽不易穿透。同時滅菌物品應盡量垂直放,不要平放,切勿擠壓。(3)輸送、運輸速度過快滅菌鍋內(nèi)裝入物品的總量不能超過總容量的85%,否則不能達到滅菌的目的,物品和物品之間應留有一定空隙,還要適當調(diào)控好蒸汽進入鍋內(nèi)的速度,若往鍋內(nèi)過快輸送蒸汽,極易形成湍流,致使冷空氣難于排出,如輸送的速度過快時,雖然鍋內(nèi)很快就達到所需的溫度,但是蒸汽穿透滅菌物品需要一定的時間,這樣滅菌時間就相對減少,從而影響了滅菌效果,故往鍋內(nèi)送氣時,進氣閥門不能完全開大,必須逐漸開大,使之緩緩進氣。但進氣速度也不能太慢,太慢鍋內(nèi)冷空氣會長時間排不出去,空氣的溫度也隨之增高,使之更難排出。因為容器內(nèi)的空氣要依靠蒸汽的擠壓而排除,所以送氣速度適宜,有利于熱能對物品的穿透和冷空氣的排除。(4)冷凝器排盡壓力蒸汽滅菌鍋內(nèi)蒸汽的溫度不僅與壓力有關,而且與蒸汽的飽和度有關。滅菌鍋內(nèi)冷空氣未排盡時,即使蒸汽壓力達到要求,溫度也上不到相應的高度,而且還影響高壓蒸汽穿透被滅菌物品的能力。故首先要打開進氣閥門,引導外源蒸汽進入夾層,冷空氣與冷凝水由夾層的阻氣器排出,大約需要10min后,再打開進氣閥,蒸汽即進入鍋內(nèi),如此充分的時間即可排除冷空氣。冷空氣的排出是滅菌效果可靠的保障,排氣時間不能超過25min。如何判斷冷空氣是否排盡,可觀察排氣口的氣體,若排氣口氣體呈白色霧狀;或在排氣口出口處連接一橡皮管,將另一端插入冷水盆中,若管內(nèi)排出氣體在冷水中產(chǎn)生氣泡,表示鍋內(nèi)空氣尚未排盡,需要繼續(xù)排氣。若不產(chǎn)生氣泡,表示鍋內(nèi)空氣已基本排盡。當壓力表顯示鍋內(nèi)達到所需溫度時,應盡量關小排氣閥以防蒸汽損失,造成鍋內(nèi)缺水,但注意關閉不能太緊,應稍有氣體排出,保持溫度壓力相匹配。2.滅菌鍋的清洗和時間(1)水水溫極大地影響滅菌鍋真空系統(tǒng)的性能,水溫過高可能會導致預定的真空水平改變,因此水溫應盡量低。滅菌鍋使用的水應符合應用水質量,并且溫度不超過15℃。水的硬度值在0.7～2.0mmol/L之間,超出該范圍的硬度值可能會引起水垢和腐蝕等問題,從而縮短滅菌鍋的使用壽命。因此,使用的水需經(jīng)過過濾和處理,并且應保持鍋體清潔。(2)蒸汽的干燥程度滅菌鍋應使用干燥程度不小于0.9的飽和蒸汽,即蒸汽含水量不超過10%;金屬負載狀態(tài)下,干燥程度不小于0.95,以保持溫度與壓力符合線性關系。(3)滅菌時間滅菌時間是指滅菌過程中滅菌室內(nèi)達到規(guī)定溫度后滅菌所需時間。它包括:熱穿透時間、熱死亡時間、安全時間。使用真空壓力蒸汽滅菌鍋,由于滅菌鍋內(nèi)負壓較大,熱穿透時間僅為1min。操作中,應注意觀察蒸汽的進汽速度和壓力,一般保持壓力和溫度同步上升。3.薄膜中間破裂在實際工作中常常需要對液體進行滅菌,高壓滅菌鍋說明書中,也表明能夠對瓶狀的液體進行滅菌處理,但在實驗中卻遇到了意外的情況:用敞口的玻璃瓶滅菌,其結果是玻璃瓶中的液體減少了1/3;用塑料薄膜緊緊封住瓶口,其結果封口塑料薄膜中間破裂,玻璃瓶中的液體仍然減少了1/3。造成此現(xiàn)象的原因是在較長的加熱和保壓過程中,滅菌鍋和瓶作為一個系統(tǒng),處于相對平衡狀態(tài),當蒸汽滅菌鍋的壓力達到0.165MPa,瓶內(nèi)液體的壓力也為0.165MPa,當限壓閥開啟后,滅菌鍋的壓力在短時間降到0.14MPa,但玻璃瓶中液體壓力仍為0.165MPa,與玻璃瓶外的壓力差為ΔP=0.165MPa-0.14MPa=0.025Mpa,即液體內(nèi)部的壓力大于液體表面的壓力,符合液體沸騰的條件,從而發(fā)生沸騰現(xiàn)象,液體溢出。當ΔP大到一定數(shù)量值時,容器中的液體產(chǎn)生噴射現(xiàn)象。在對液態(tài)物質進行滅菌時,當滅菌結束注意卸壓不能過快,盡量將排氣閥關小,保持自然降壓,保持系統(tǒng)原有的平衡,以防產(chǎn)生液體減少或噴濺現(xiàn)象。4.高壓蒸汽滅菌高壓滅菌鍋屬于強檢儀器,必須進行滅菌效果的驗證。高壓滅菌鍋使物品滅菌后達到無菌要求,這是微生物實驗成功的一個基本保證。將嗜熱芽孢桿菌紙片用無菌鑷子放入封閉試管中,化學指示卡和留點溫度計放入敞口的試管中,以上兩種試管各準備5～10支,分別放置在高壓滅菌鍋蒸汽口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。留點溫度計標化合格后可用于驗證試驗。檢測前,需將溫度計的水銀柱甩至40℃以下。每次監(jiān)測后留點溫度計的溫差應在1℃之間,則說明滅菌鍋內(nèi)的溫度分布是均勻的。滅菌后的菌片應在嚴格無菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi),50～60℃培養(yǎng)24～48小時,觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)辄S色,說明菌片中的嗜熱芽孢桿菌尚未完全滅活,細菌仍可在培養(yǎng)基中生長,分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色,則說明芽孢桿菌已滅活。同時要用未經(jīng)滅菌的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽性對照,不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對照?；瘜W指示卡上的指示色塊,在高壓蒸汽滅菌時,由淡黃色變?yōu)楹谏?。隨著顏色變化的深淺,并與對照色相比,可判斷滅菌效果是否達到要求?；瘜W指示卡應在干燥處保存。遇潮會變色,影響滅菌效果的觀測。高壓蒸汽滅菌必須使蒸汽順利進入滅菌鍋內(nèi),與滅菌物品接觸,并將原有的冷空氣排出方可達到滅菌的效果。要進行空載熱分布和滿載熱穿透力驗證(滿載時不超過總體積的2/3)。兩種驗證各重復三次。5個點六次試驗表明溫度均在121℃,化學指示卡變黑;程度與對照色一致;培養(yǎng)基均未改變顏色,說明高壓蒸汽滅菌效果合格。5.加強操作,保證微生物實驗準備工作的實效性為了提高滅菌效果、防止事故發(fā)生并延長高壓鍋的使