第十二章+喹啉與青蒿素類抗瘧藥物的分析 - 副本

第十二章

喹啉與青蒿素類抗瘧藥物的分析教學(xué)目的與要求

掌握喹啉與青蒿素類抗瘧疾藥物的鑒別試驗(yàn)和含量測定方法。掌握喹啉與青蒿素類抗瘧疾藥物的基本結(jié)構(gòu)和主要性質(zhì)。了解喹啉與青蒿素類抗瘧疾藥物的雜質(zhì)檢查要求。瘧疾（Malaria）經(jīng)按蚊叮咬而感染瘧原蟲所引起的蟲媒傳染病。臨床以周期性寒戰(zhàn)、發(fā)熱、頭痛、出汗和貧血、脾腫大為特征。兒童發(fā)病率高，大都于夏秋季節(jié)流行。瘧原蟲寄生于人體所引起的傳染病。經(jīng)瘧蚊叮咬或輸入帶瘧原蟲者的血液而感染。不同的瘧原蟲分別引起間日瘧、三日瘧、惡性瘧及卵圓瘧。本病主要表現(xiàn)為周期性規(guī)律發(fā)作，全身發(fā)冷、發(fā)熱、多汗，長期多次發(fā)作后，可引起貧血和脾腫大。瘧疾是由瘧原蟲引起的寄生蟲病，于夏秋季發(fā)病較多。在熱帶及亞熱帶地區(qū)一年四季都可以發(fā)病，并且容易流行。抗瘧藥（antimalarialdrugs）是防治瘧疾的重要手段?，F(xiàn)抗瘧藥中尚無一種能對瘧原蟲生活史的各個(gè)環(huán)節(jié)都有殺滅作用。因此，必須了解各種抗瘧藥對瘧原蟲生活史的不同環(huán)節(jié)的作用，以便根據(jù)不同的目的正確選擇藥物。各種抗瘧藥通過影響瘧原蟲生活史的不同發(fā)育發(fā)揮基抗瘧效果。

抗瘧藥分類為：1、主要用于控制瘧疾癥狀的抗瘧藥，如：氯喹、奎寧等。它們通過殺滅紅細(xì)胞內(nèi)期的裂殖體，中斷瘧原蟲的無性生殖周期，發(fā)揮控制癥狀發(fā)作和癥狀抑制性預(yù)防作用。2、主要用于防止瘧疾復(fù)發(fā)與傳播的抗瘧藥，如伯氨喹等。它們通過殺滅間日瘧繼發(fā)性紅細(xì)胞外期的子孢子及各種瘧原蟲的配子體，控制瘧疾的復(fù)發(fā)和傳播；3、主要用于預(yù)防瘧疾的抗瘧藥，如乙胺嘧啶等。它們通過殺滅原發(fā)性紅細(xì)胞外期的瘧原蟲，發(fā)近病因性預(yù)防作用；4、與抗瘧藥聯(lián)合應(yīng)用的藥物；5、其他類抗瘧藥。第一節(jié)喹啉類藥物的分析共同點(diǎn)：含有吡啶與苯稠合而成的喹啉環(huán)，環(huán)上的雜原子的反應(yīng)性能基本與吡啶相同。典型藥物有：硫酸奎寧、二鹽酸奎寧、鹽酸氯喹、磷酸哌喹等

磷酸咯萘啶

脂環(huán)氮，堿性強(qiáng)，pKa8.8,可以與硫酸成鹽芳環(huán)氮，堿性較弱，pKa4.2,不能與硫酸成鹽4.紫外吸收光譜特征由于喹啉類藥物分子結(jié)構(gòu)中含有吡啶與苯稠合而成的喹啉雜環(huán)，具有共軛體系，可用紫外吸收光譜的特征鑒別該類藥物。二、鑒別試驗(yàn)（一）綠奎寧反應(yīng)

含氧喹啉衍生物的特征反應(yīng)硫酸奎寧和二鹽酸奎寧都顯綠奎寧反應(yīng)。微過量加酸中性顯藍(lán)色酸性呈紫紅色翠綠色可轉(zhuǎn)溶于醇、氯仿中不溶于醚奎尼?。ǘ┕庾V特征1、紫外吸收光譜：示例：

磷酸氯喹---在4個(gè)波長處有最大吸收

磷酸咯萘啶—在2個(gè)波長處有最大吸收鹽酸環(huán)丙沙星：取本品，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1ml中含8μg的溶液，照分光光度法(附錄ⅣA)測定，在277nm與315nm的波長處有最大吸收。

2、熒光光譜－在稀硫酸溶液中顯藍(lán)色熒光（特征鑒別方法）硫酸奎寧：取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即顯藍(lán)色熒光。3、紅外吸收光譜特征1、硫酸鹽的鑒別反應(yīng)（1）滴加氯化鋇試液白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中不溶（2）滴加醋酸鉛試液白色沉淀；分離，沉淀溶于醋酸銨或氫氧化鈉試液（3）加鹽酸，無白色沉淀（區(qū)別于硫代硫酸鹽）

2、氯化物的鑒別（1）硝酸酸性下，滴加硝酸銀試液白色凝乳狀沉淀；分離，沉淀溶于氨試；加稀硝酸酸化液；又出現(xiàn)沉淀（2）加與供試品等量的二氧化錳，混勻，加硫酸濕潤，緩緩加熱，產(chǎn)生氯氣，使?jié)駶櫟牡饣浀矸墼嚰堬@藍(lán)色3、磷酸鹽的鑒別反應(yīng)（1）中性供試品溶液中，加硝酸銀試液，生成淺黃色沉淀；分離，沉淀易溶于氨試液或稀硝酸（2）加氯化銨試液，生成白色結(jié)晶性沉淀（3）加鉬酸銨試液和硝酸，加熱，產(chǎn)生黃色沉淀；分離，沉淀在氨試液中溶解三、特殊雜質(zhì)的檢查（一）硫酸奎寧中有關(guān)物質(zhì)的檢查奎寧從金雞納樹皮中提取，提取分離過程中可能帶入其他金雞納堿雜質(zhì)。臨床上使用的藥物為硫酸奎寧片和二鹽酸奎寧注射劑硫酸鹽難溶于水,多制成片劑二鹽酸鹽水溶性好，可制成注射劑

1、酸度

目的：檢查控制藥物中的酸性物質(zhì)，主要為成鹽過程中引入方法：取本品0.2g，加水20ml溶解后，測定pH值應(yīng)為5.7～6.62、氯仿—乙醇中的不溶物

原理：溶解行為的差異

主要雜質(zhì)：制備過程中引入的無機(jī)鹽與其他生物堿

檢查方法:取本品2g，加氯仿－無水乙醇(2:1)的混合液15ml，在50℃加熱10min后，用稱定重量的垂熔坩堝濾過，濾渣用上述混合液分5次洗滌，每次10ml，在105℃干燥至恒重，遺留殘?jiān)坏眠^2mg。垂熔坩堝垂熔坩堝也叫砂芯坩堝，是一種坩堝式濾器，用玻璃粉壓制成砂芯濾板，適用與定量分析對實(shí)驗(yàn)物可作過濾，干燥，稱量的聯(lián)合操作。

造型為一只上口大下口小無底的錐形杯，在杯內(nèi)的下截部位焊有一片砂芯片，或稱為濾片，代替濾紙作過濾溶液用，濾片孔徑有粗細(xì)之分，1號最粗，6號最細(xì)，除砂芯濾片粗細(xì)區(qū)分之外，還有容量大小之分。由于它的底是平的，適合對過濾后滯留在砂芯片上的殘?jiān)苯右坪嫦鋬?nèi)干燥，稱量時(shí)也可直接放入天平上稱量。

3、其它金雞納堿原理：吸附性質(zhì)的差異方法：

TLC或HPLC

主成分自身對照法或?qū)φ掌穼φ辗ㄒ?guī)定限度為0.5%（二）磷酸咯萘啶的純度檢查磷酸咯萘啶溶解性：水中溶解、乙醇或乙醚中幾乎不溶

1、酸度目的：檢查控制藥物中的酸性物質(zhì)，主要為成鹽過程中引入。如pH小于2.4，刺激性較大方法：用酸度計(jì)測定，pH應(yīng)大于2.4

2、水中不溶物原理：加水溶解后，稍放置有黃色不溶物產(chǎn)生方法：取供試品加水溶解，放置30分鐘，過濾、洗滌、干燥，精密稱定遺留殘?jiān)闹亓俊Ｗ⑸溆盟帲簹堅(jiān)坏贸^4mg

口服用藥：殘?jiān)坏贸^7mg3、氯化物目的：檢查生產(chǎn)工藝中帶入的氯化物方法：磷酸咯萘啶溶液咯萘啶

加堿過濾濾液，依法檢查與3.0mL標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉制成的對照液比較，不得更濃4、甲醛來源：甲醛具有毒性，反應(yīng)中使用甲醛進(jìn)行縮合，對產(chǎn)品中殘留的甲醛進(jìn)行檢查

方法：對照液比色法5、四氫吡咯來源：四氫吡咯具有毒性，反應(yīng)中使用四氫吡咯進(jìn)行縮合，對產(chǎn)品中殘留的四氫吡咯進(jìn)行檢查

方法：取本品，加水溶解，加5%碳酸鈉溶液，攪拌、濾過、濾液加新制的亞硝基鐵氫化鈉乙醛，搖勻、5分鐘內(nèi)不得顯藍(lán)色四、含量測定

非水溶液滴定法CHPUSPHPLC法（一）硫酸奎寧的含量測定硫酸為二元酸，水溶液中二級電離，但在非水介質(zhì)中只顯示一元酸，解離為HSO4－。含量測定時(shí)根據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)判斷化學(xué)計(jì)量摩爾關(guān)系結(jié)構(gòu)中喹核堿的堿性較強(qiáng)，可以與硫酸成鹽

喹啉環(huán)的堿性極弱，保持游離狀態(tài)非水溶液中喹核堿及喹啉環(huán)的N相對堿性較強(qiáng)，可與強(qiáng)酸成鹽非水溶液滴定法當(dāng)HA酸性較強(qiáng)時(shí)，反應(yīng)不能定量完成，必須除去或降低HA的酸性，使反應(yīng)順利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游離堿類鹽被置換出的弱酸含量測定硫酸奎寧測定

1摩爾的硫酸奎寧可消耗3摩爾的高氯酸。

（QH+）2·SO42-+3HCLO4→QH22+·HSO4-·CLO4-＋QH22+·2CLO4-硫酸奎寧片的含量測定考慮到片劑中共存物的干擾（也需消耗高氯酸滴定液），把硫酸奎寧片粉經(jīng)強(qiáng)堿溶液堿化，生成奎寧游離堿，用氯仿提取后，再與高氯酸反應(yīng):(QH+)2·SO42++2NaOH→2Q+Na2SO4+2H2O2Q+4HCLO4→2[(QH22+)·(CLO4-)2]因此，1摩爾的硫酸奎寧可消耗4摩爾的高氯酸。硫酸奎寧片的含量測定硫酸奎寧片的含量測定USPHPLC法甲磺酸的作用?醋酸的作用?硫酸奎寧片的含量測定離子對色譜法★

(1)定義離子對色譜法是把離子對試劑加入極性流動(dòng)相中，被分析的樣品離子在流動(dòng)相中與離子對試劑的反離子生成不帶荷電的中性離子對，從而增加了樣品離子在非極性固定相中的溶解度，使分配系數(shù)增加，改善分離效果。

(2)常用離子對試劑分析堿類用烷基磺酸鹽為離子對試劑,如正己烷磺酸鈉。分析酸類常用四丁基季銨鹽，如四丁基胺磷酸鹽。

(3)特點(diǎn)用于有機(jī)酸、堿、鹽的分離，而且可以避免用普通的HPLC儀器長期進(jìn)行離子色譜時(shí)，流動(dòng)相（酸、堿）對泵與流路的腐蝕。這種方法在藥物分析中應(yīng)用很廣，如生物堿、有機(jī)酸、磺胺類藥物、某些抗生素與維生素等。在體內(nèi)藥物分析上也有許多應(yīng)用，如在測定人體內(nèi)堿性藥物的血藥濃度時(shí)，有利于與其代謝產(chǎn)物和內(nèi)源性酸性雜質(zhì)分離。但試劑的價(jià)格較貴是其缺點(diǎn)。影響條件：流動(dòng)相一般呈酸性，以利于生物堿的離解；離子對試劑的非極性部分越大，形成的離子對分配系數(shù)越大，保留時(shí)間越長（十二烷基磺酸鈉＞庚烷磺酸鈉＞戊烷磺酸鈉）。第二節(jié)青蒿素類藥物的分析青蒿素，又名黃蒿素，是從菊科植物黃花蒿中提取分離得到的一個(gè)含過氧基團(tuán)的新型倍半萜內(nèi)酯。該品為一高效、速效抗瘧藥。作用于瘧原蟲紅細(xì)胞內(nèi)期，適用于間日瘧及惡性瘧，特別是搶救腦型瘧均有良效。其退熱時(shí)間及瘧原蟲轉(zhuǎn)陰時(shí)間都較氯喹短。對氯喹有抗藥性的瘧原蟲，使用該品亦有效。

蒿甲醚：是青蒿素的脂溶性衍生物

青蒿琥酯：是青蒿素的水溶性衍生物

雙氫青蒿素：是青蒿素經(jīng)還原制得，同時(shí)也是青蒿琥的體內(nèi)活性代謝物酯

中國抗瘧新藥的研究源于1967年成立的五二三項(xiàng)目，其全稱為中國瘧疾研究協(xié)作項(xiàng)目，成立于1967年的5月23日,因絕密軍事項(xiàng)目,遂設(shè)代號523。

發(fā)展歷經(jīng)380多次鼠瘧篩選，1971年10月取得中藥青蒿素篩選的成功。1972年從中藥青蒿中分離得到抗瘧有效單體，命名為青蒿素，對鼠瘧、猴瘧的原蟲抑制率達(dá)到100%。1973年經(jīng)臨床研究取得與實(shí)驗(yàn)室一致的結(jié)果、抗瘧新藥青蒿素由此誕生。

1981年10月在北京召開的由世界衛(wèi)生組織主辦的“青蒿素”國際會(huì)議上，中國《青蒿素的化學(xué)研究》的發(fā)言，引起與會(huì)代表極大的興趣，并認(rèn)為“這一新的發(fā)現(xiàn)更重要的意義是在于將為進(jìn)一步設(shè)計(jì)合成新藥指出方向”。

1986年，青蒿素獲得新一類新藥證書，雙氫青蒿素也獲一類新藥證書。這些成果分別獲得國家發(fā)明獎(jiǎng)和全國十大科技成就獎(jiǎng)。

2011年9月，中國女藥學(xué)家屠呦呦因創(chuàng)制新型抗瘧藥———青蒿素和雙氫青蒿素的貢獻(xiàn)，獲得被譽(yù)為諾貝爾獎(jiǎng)“風(fēng)向標(biāo)”的拉斯克獎(jiǎng)。這是中國生物醫(yī)學(xué)界迄今為止獲得的世界級最高級大獎(jiǎng)。

屠呦呦，女，1930年12月30日生，藥學(xué)家，中