甾體激素類(lèi)藥物的分析

基本要求1．掌握甾體結(jié)構(gòu)類(lèi)藥物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與分析方法之間的關(guān)系。2．掌握甾體類(lèi)藥物的鑒別原理與方法。3．掌握甾體類(lèi)藥物的含量原理與方法。4．熟悉甾體類(lèi)藥物雜質(zhì)檢查的方法。返回基本結(jié)構(gòu)：環(huán)戊烷駢多氫菲ABCD12345678910111213141516171819

概述分類(lèi)：甾體激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素結(jié)構(gòu)特點(diǎn)分類(lèi)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)腎上腺皮質(zhì)激素21個(gè)C，A環(huán)為Δ4-3-酮基，C17-為α-醇酮基或α-羥基雄性激素與蛋白同化激素19個(gè)C，A環(huán)為Δ4-3-酮基，C17-為β-羥基或酯孕激素21個(gè)C，A環(huán)為Δ4-3-酮基，C17-為甲酮基或α-羥基或α-乙酰氧基雌性激素18個(gè)C，A環(huán)為苯環(huán)，C3-酚羥基，C17-為β-羥基

腎上腺皮質(zhì)激素氫化可的松地塞米松磷酸鈉醋酸地塞米松雄性激素甲睪酮雄性激素丙酸睪酮蛋白同化激素苯丙酸諾龍?jiān)屑に攸S體酮孕激素醋酸甲地孕酮雌性激素炔雌醇雌性激素雌二醇炔諾酮此外炔諾孕酮返回一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

1.腎上腺皮質(zhì)激素主要活性基團(tuán)性質(zhì)△4–3–

酮UV、與羰基試劑反應(yīng)

C17

–

α–

醇酮基還原性2.雄性激素及蛋白同化激素主要活性基團(tuán)性質(zhì)△4–3–

酮UV、與羰基試劑反應(yīng)

C17–

β–

羥基可成酯3.孕激素主要活性基團(tuán)性質(zhì)△4–3–

酮UV、與羰基試劑反應(yīng)C17–甲酮基與亞硝基鐵氰化納反應(yīng)4.雌性激素主要活性基團(tuán)性質(zhì)A環(huán)為3–OH苯環(huán)UV、與重氮苯磺酸鹽反應(yīng)C17–乙炔基與AgNO3反應(yīng)C17–羥基可成酯返回二、鑒別試驗(yàn)（一）與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng)甾體激素類(lèi)藥物呈色H2SO4H3PO4HClO4HCl（母核）與硫酸顯色反應(yīng)

顯色熒光加水稀釋潑尼松龍深紅

絮狀↓灰潑尼松橙

黃→藍(lán)綠炔雌醚橙紅

黃綠

↓紅色

炔雌醇橙紅

黃綠

絮狀↓玫紅醋酸可的松黃或微褪色并澄

帶橙清(二)官能團(tuán)的反應(yīng)腎上腺皮質(zhì)激素藥物呈色四氮唑鹽OHˉ1、C17

–

α–醇酮基還原性呈色反應(yīng)此外還有斐林試液、多倫試液甾酮類(lèi)激素藥物呈色羰基試劑2.C3–酮基和C20–酮基＃常用的羰基試劑：2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類(lèi)藥物呈色亞硝基鐵氰化鈉間二硝基酚芳香醛3.甲酮基黃體酮藍(lán)紫色亞硝基鐵氰化納其他甾體淡橙色不顯色有機(jī)氟Fˉ有機(jī)破壞有機(jī)氯Clˉ4.有機(jī)鹵素茜素氟藍(lán)

硝酸亞鈰硝酸—硝酸銀AgCl↓呈色

雌激素類(lèi)藥物紅色偶氮染料重氮苯磺酸5.酚羥基含炔基的甾體激素銀鹽沉淀硝酸銀6.乙炔基的沉淀反應(yīng)↓

(三)制備衍生物測(cè)定m.p.鹽酸氨基脲苯丙酸諾龍△縮氨基脲衍生物1.縮氨基脲的生成m.p.約180℃（分解）2.酯的水解丙酸睪酮堿性條件睪酮m.p.為150℃~156℃△４-3-酮、苯環(huán)、其他共軛結(jié)構(gòu)（四）UV法1.結(jié)構(gòu)依據(jù)240nm左右280nm左右2.示例曲安西龍丙酸倍氯米松

溶劑甲醇乙醇20μg/ml濃度20μg/ml結(jié)果判斷在238nm處有最大吸收在239nm有最大吸收，A為0.57～0.60，在239nm與263nm的吸收度比值為2.25～2.45結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇（五）IR法1505cm-1ν3505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1ν酚羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨架振動(dòng)黃體酮結(jié)構(gòu)特征：△４-3-酮、C17-酮基1700cm-1

C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1

C-H雙鍵（七）TLC法

主要用于甾體激素類(lèi)藥物制劑的鑒別

方法：對(duì)照品法要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。（八）HPLC法

主要用于甾體激素類(lèi)藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）

方法：對(duì)照品法要求在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對(duì)照品峰的tR一致。返回三、特殊雜質(zhì)檢查（一）其他甾體的檢查

檢查意義：其他甾體與甾體激素藥物結(jié)構(gòu)相似，也有一定的藥理作用而又互不相同.

檢查方法（具有一定分離能力）

TLC法（高低濃度對(duì)比法）

HPLC法（類(lèi)似高低濃度對(duì)比法）（1）TLC法（高低濃度對(duì)比法）

判定方法：

規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目

規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色例：氫化可的松中其他甾體的檢查供試液：本品+氯仿-甲醇（9：1）濃度：3.0mg/ml對(duì)照液：供試液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1）

60μg/ml層析：供試液點(diǎn)樣、展開(kāi)、斑點(diǎn)檢出。

對(duì)照液判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于3個(gè)，其顏色與對(duì)照液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。（2）HPLC法（主成分自身對(duì)照法）判定方法：

規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰面積硒的檢查（二）來(lái)源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫有毒方法藥物氧瓶燃燒二氨基萘比色法測(cè)定（三）有機(jī)溶劑殘留量的檢查（靈敏度法）甲醇不得出峰檢測(cè)限=3.1ng丙酮≤5.0%

內(nèi)標(biāo)法+校正因子以地塞米松磷酸鈉為例GC法地塞米松磷酸鈉檢查甲醇和丙酮

精密稱取本品0.16g，置10ml量瓶中，精密加內(nèi)標(biāo)溶液2ml，加水稀釋至刻度，作為供試液；另精密量取甲醇10μl(≈7.9mg)與丙酮100μl(≈79mg)置100ml量瓶中，精密加內(nèi)標(biāo)溶液20ml，加水至刻度，作為對(duì)照液。照氣相色譜法測(cè)定，含丙酮不得過(guò)5.0%，并不得出現(xiàn)甲醇峰。（二）游離磷酸鹽的檢查地塞米松磷酸鈉對(duì)照品比色法供試液+鉬酸銨+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸鉬藍(lán)：740nm對(duì)照液：同上（對(duì)照液

0.0035%KH2PO4）返回（一）HPLC法USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多內(nèi)標(biāo)法）（甾體激素類(lèi)藥物常含有結(jié)構(gòu)相似的其他甾體雜質(zhì)，對(duì)利用結(jié)構(gòu)特征設(shè)計(jì)的比色法有干擾）四、含量測(cè)定測(cè)定對(duì)象：甾體激素類(lèi)藥物的原料和制劑。示例：黃體酮的含量測(cè)定

色譜條件：固定相ODS，流動(dòng)相甲醇-水（65:35），檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，內(nèi)標(biāo)物己烯雌酚系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：n>1000，R符合規(guī)定。

測(cè)定樣品：黃體酮原料、注射液。

定量方法：內(nèi)標(biāo)法（二）UV法△４-3-酮

240nm（±）腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕藥苯環(huán)

280nm（±）雌激素示例：醋酸地塞米松片的含量測(cè)定（1）配制供試液

（2）測(cè)定：240nm

（3）計(jì)算

腎上腺皮質(zhì)激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素C3－酮基（1）原理異煙腙（黃）酮基異煙肼-3CHCl（縮合）1.異煙肼比色法（三）比色法異煙腙（黃色）（2）方法對(duì)照品法55℃異煙肼?lián)]去乙醇對(duì)照液供試液A暗45′（3）討論反應(yīng)速度（反應(yīng)專(zhuān)屬性）A.C3=O＞C17=O、C20=OC11=O不反應(yīng)反應(yīng)專(zhuān)屬性C3－酮基B.溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽→甲醇、乙醇無(wú)水甲醇無(wú)水乙醇C.水分、溫度、O2與光線的影響含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時(shí)→

O2與光線無(wú)影響t℃↑→ν↑D.酸的種類(lèi)和濃度及異煙肼的濃度酸:異煙肼=2:1鹽酸濃度0.0074mol/L異煙肼濃度0.00365mol/L最大A

腎上腺皮質(zhì)激素類(lèi)C17-α－醇酮基強(qiáng)還原性（1）原理2.四氮唑比色法有色甲瓚四氮唑鹽醇酮基-a-17COH-[還原]三苯甲瓚↓深紅氯化三苯四氮唑（TTC）紅四氮唑（RT）[H]藍(lán)四氮唑（BT）（2）方法對(duì)照品法25℃氫氧化四甲基銨對(duì)照液供試液ATTC40～45′暗（3）討論A.基團(tuán)對(duì)反應(yīng)速度的影響C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯B.溶劑、水分的影響以無(wú)醛乙醇為溶劑C.O2與光線的影響避光隔絕空氣、快速、充N(xiāo)2D.堿的種類(lèi)及加入順序以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳加入順序：堿試液四氮唑鹽皮質(zhì)激素溶液E.溫度與時(shí)間（1）原理λmax=465λmax=515雌激素3.Kober反應(yīng)比色法△△桃紅黃色