沙門氏菌血清學(xué)鑒定

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篇一：沙門氏菌生化鑒定

沙門氏菌生化實驗鑒定環(huán)節(jié)

三糖鐵瓊脂原理分析：本培養(yǎng)基適合于腸桿菌科的鑒定。用于觀察細(xì)菌對糖的運用和硫化氫（變黑）的產(chǎn)生。該培養(yǎng)基含有乳糖、

蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1，只能運用葡萄糖的細(xì)菌，葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌運用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，因此仍保持黃色。而發(fā)酵乳糖的細(xì)菌(e.coli)，則產(chǎn)生大量的酸，使整個培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。如培養(yǎng)基接種后產(chǎn)生黑色沉淀，是由于某些細(xì)菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反映，生成黑色的硫化亞鐵沉淀。底層產(chǎn)酸：是由于細(xì)菌分解糖類物質(zhì)使酚紅退色變黃。

斜面產(chǎn)堿，低層產(chǎn)酸：是細(xì)菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量較少進(jìn)而分解蛋白胨而產(chǎn)堿變紅。由于底層是厭氧環(huán)境，葡萄糖分解慢，２４小時培養(yǎng)后還沒分解蛋白胨產(chǎn)堿；而斜面是需氧環(huán)境分解較快，普通８小時左右就把葡萄糖分解完（此時斜面也是酸性），但繼而分解蛋白胨產(chǎn)堿，斜面又轉(zhuǎn)為堿性。

2－志賀氏菌：都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，大多不發(fā)酵乳糖，不產(chǎn)生h2s。

4－大腸桿菌：能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分解乳糖，不產(chǎn)生h2s。

3－沙門氏菌：能分解葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，大多數(shù)產(chǎn)生h2s，多數(shù)產(chǎn)氣。賴氨酸脫羧酶實驗

1、實驗管及對照管均要加一層約10mm厚的滅菌石蠟或礦物油以覆蓋表面，此可使培養(yǎng)基中的溶解氧通過細(xì)菌消耗掉，并控制培養(yǎng)基的ph。

2、陽性實驗管培養(yǎng)早期（10—12h）因發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸變黃，繼續(xù)培養(yǎng)由于氨基酸脫羧產(chǎn)生胺類而使培養(yǎng)基由酸變堿，故又由黃變?yōu)樽仙?。陰性實驗管則始終呈黃色。

氨基酸脫羧酶實驗(1)原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生氨基酸脫羧酶使氨基酸脫羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培養(yǎng)基

變?yōu)閴A性，可用批示劑批示出來。(2)辦法：將待檢菌分別接種于1支氨基酸（賴氨酸，鳥氨酸或精氨酸）脫羧酶實驗管和1支氨基酸脫羧酶對照管（無氨基酸），各覆蓋最少0.5cm高度的無菌石蠟油，35℃孵育1~4d，觀察成果。(3)成果：若為溴甲酚紫批示劑，則實驗管紫色為陽性，黃色為陰性，對照管應(yīng)為黃色。(4)應(yīng)用：重要用于某些細(xì)菌種間的鑒別，如賴氨酸用于產(chǎn)氣腸桿菌（陽性）與陰溝腸桿菌（陰性）；鳥氨酸用于陰溝腸桿菌（陽性）和克雷伯菌（陰性）；精氨酸用于陰溝腸桿菌（陽性）和產(chǎn)氣腸桿菌（陰性）等。

精氨酸雙水解酶實驗(1)原理：精氨酸經(jīng)兩次水解后,生成鳥氨酸、氨及二氧化碳。鳥氨酸又在脫羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均為堿性物質(zhì)，故可使培養(yǎng)基變堿，用批示劑批示出來。(2)辦法：將待檢菌接種于實驗培養(yǎng)上，置35℃孵箱孵育1~4d，觀察成果。(3)成果：溴甲酚紫批示劑呈紫色為陽性，酚紅批示劑呈紅色為陽性。黃色為陰性。(4)應(yīng)用：重要用于腸桿菌科及假單胞菌屬的鑒定。

非發(fā)酵菌：是一大群不發(fā)酵葡萄糖或以氧化形式運用糖、需氧或兼性厭氧、無芽孢的革蘭陰性桿菌。

表2

進(jìn)行鑒定。

反映3：補做onpg。onpg為陰性，同時賴氨酸脫羧酶為陽性；賴氨酸脫羧酶為陰性時為甲型副傷寒沙門氏菌。

必要時按表4進(jìn)行沙門氏菌生活群的鑒別

篇二：沙門氏菌屬診療血清闡明書

沙門氏菌屬診療血清學(xué)實驗操作程序

1.目的

制訂沙門氏菌屬診療血清使用程序，指導(dǎo)對沙門氏菌屬進(jìn)行血清學(xué)分型。

2.原理

用沙門氏菌屬的代表菌株制成滅活菌抗原分別或混合免疫家兔所得的血清，經(jīng)吸取出去非特異性凝集素后制成，通過凝集實驗原理供沙門氏菌屬常見菌型定型。

3.試劑及實驗設(shè)備

3.1沙門氏菌屬診療血清：寧波天潤生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的規(guī)格為11種的沙

門氏菌屬診療血清

3.2試劑保存：2~8°c避光保存，避免凍結(jié)，在使用期內(nèi)使用。

3.3實驗設(shè)備：玻片、吸樣槍、接種環(huán)、水浴箱、玻璃管、血平板、營養(yǎng)瓊脂、

電熱高溫接種滅菌器。

4.程序環(huán)節(jié)

4.1將診療血清于冰箱取出后平衡至室溫。

4.2選擇經(jīng)初步生化檢測符合沙門菌生物特性的疑似菌落。4.3菌群分析

將經(jīng)18~24h血平板上純培養(yǎng)的待檢菌，先用o多價A~F群血清進(jìn)行凝集實驗，如陽性，提示待檢菌可能屬于A~F群范疇內(nèi)，因97%以上的沙門菌都涉及在A~F6個o群之內(nèi)，如果不凝再使用其它o抗血清進(jìn)行凝集實驗，如與其中一種抗血清凝集，待檢菌即屬于對應(yīng)的菌群。若與多價o抗血清不凝集，有以下3種可能：①含有Vi抗原；②A~Fo群之外的沙門菌；③沙門氏菌屬以外的細(xì)菌?？砂聪率鲛k法進(jìn)一步檢測，將純菌落用無菌生理鹽水洗下，制成濃菌液，再分成2份。1份不經(jīng)解決，為活菌液，另1份放100°c水浴中30min，為加熱菌液。取活菌與Vi抗血清，取加熱菌與Vi抗血清凝集，加熱菌與Vi抗血清、A~F多價o抗血清分別進(jìn)行玻片凝集實驗。根據(jù)成果作以下分析：①活菌與Vi抗血清凝集，加熱菌與Vi抗血清凝集者，可能屬于c群或D群菌，用o7和o9抗血清定群；②活菌與Vi抗血清不凝，可能屬于A~Fo群之外的沙門菌或其它

菌屬細(xì)菌，需進(jìn)行生化實驗定屬，若符合沙門氏菌屬細(xì)菌特性，可送cDc鑒定；③加熱菌與Vi抗血清凝集，而與A~F多價o抗血清不凝集者，可報告為陰性。4.4血清型分析

菌群擬定后，分析被檢菌的鞭毛抗原成分。先分析第1相鞭毛抗原，再分析第2相鞭毛抗原。第1相鞭毛抗原分析：根據(jù)菌群分析成果，分別選用第1相鞭毛因子血清進(jìn)行玻片凝集實驗。第2相鞭毛抗原分析：所用抗血清，普通是復(fù)合因子（1、2、3、5、6、e、n、I、w）血清。單相菌，如第1相已擬定，可結(jié)合菌群分析及生化反映成果判斷血清型。如為雙相菌，只分析出第1相鞭毛抗原，大多數(shù)也可結(jié)合菌群分析和生化成果判斷血清型，必要時進(jìn)一步探索第2相鞭毛抗原。若只分析出第2相鞭毛抗原，須進(jìn)一步探索分析第1相抗原。探索另1相抗原可按下述辦法和環(huán)節(jié)進(jìn)行。如“小內(nèi)管”法，一支已融化半固體瓊脂，插入一支無菌兩端相通小玻璃管于培養(yǎng)基當(dāng)中，長度稍高出半固體液面。待瓊脂泠卻凝固，用接種環(huán)取1~2環(huán)待克制相h抗血清，放入小內(nèi)管的瓊脂表面，然后接種被誘導(dǎo)菌株于小內(nèi)管含抗血清瓊脂層面，35°c孵育4~6h或過夜，取小內(nèi)管外半固體瓊脂層生長培養(yǎng)物，接種于平板或直接做凝集反映，可獲得待誘導(dǎo)相的菌株。有些種的擬定是靠鞭毛抗原中的微小差別來分析的，因而獲得豐富鞭毛抗原的培養(yǎng)物十分重要。

4.5將經(jīng)18~24h血平板上純培養(yǎng)的待檢菌，用生理鹽水制備2麥?zhǔn)蠁挝坏木鷳?/p>

液，取診療血清20μL于干凈玻片上，然后取20μL待檢菌懸液與血清混勻，輕輕搖動玻片，1min內(nèi)呈現(xiàn)明顯凝集者為陽性，呈均勻渾濁者為陰性，每次凝集實驗均應(yīng)以生理鹽水作為陰性對照實驗。

4.6根據(jù)其生化反映和與o抗血清、Vi抗血清、h抗血清的凝集成果對照沙門

氏菌屬國內(nèi)常見菌型診療抗原表，擬定沙門菌的菌型。4.7沙門氏菌屬國內(nèi)常見菌型診療抗原，見附表

5.質(zhì)量控制

o多價A~F群血清選擇傷寒沙

門菌ATcc14028為陽性對照；大腸埃希菌ATcc25922為陰性對照

附表：沙門氏菌屬國內(nèi)常見菌型診療抗原表

篇三：沙門氏菌實驗13.37

華南農(nóng)業(yè)大學(xué)

答辯委員會主席xxx評閱人xxx

摘要

沙門氏菌是一大群寄生于人類和動物腸道，其生化反映和抗原構(gòu)造相似的革蘭氏陰性菌。其種類繁多，少數(shù)能使人致病，其它可使動物致病，偶然可傳染給人。沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學(xué)上含有重要意義的人畜共患病之一,其病原沙門氏菌屬腸道細(xì)菌科，重要引發(fā)人類傷寒、副傷寒以及食品中毒或敗血病。在世界各地的食物中毒中，沙門氏菌食品中毒常占首位或者第二位。據(jù)稱在全部肉用動物中,家禽顯然對沙門氏菌最易感受。沙門氏菌易于在雛雞腸道內(nèi)定居與增殖，雞白痢沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌是引發(fā)雞常見多發(fā)性傳染病的細(xì)菌，嚴(yán)重影響雛雞成活率，造成成年雞產(chǎn)蛋等生產(chǎn)性能的下降[2]。因此在實臉上和生產(chǎn)實踐上必須及時進(jìn)行家禽腸道傳染病的防止及控制。自19世紀(jì)后期，沙門氏菌初次被鑒定為人類的一種病原以來，檢測辦法學(xué)都是建立在采用感染病人的糞便或血液作為臨床病料的基礎(chǔ)上。隨著DnA和抗體技術(shù)的發(fā)展，近間出現(xiàn)了諸多改善的辦法，其中許多辦法能夠在48h內(nèi)檢出沙門氏菌。根據(jù)gb/T4789.4-20XX，食品中沙門氏菌傳統(tǒng)的檢測辦法有5個基本環(huán)節(jié)：前增菌、選擇性增菌、選擇性平板分離、生化實驗、血清學(xué)分型鑒定。現(xiàn)在檢測食品中的沙門氏菌是按統(tǒng)計學(xué)取樣方案為基礎(chǔ)，25g食品為原則分析單位。本實驗由于實際條件的限制，取10g雞腸作為樣品按照國標(biāo)辦法進(jìn)行沙門氏菌檢測。

核心詞：沙門氏菌革蘭氏陰性食物中毒

目錄

前言.............................................................................................................3

1材料與辦法.....................................................................................................3

1.1材料...........................................................................................................3

1.1.1儀器....................................................................................................3

1.1.2試劑...................................................................................................4

1.2實驗環(huán)節(jié)..................................................................................................5

1.2.1前增菌...............................................................................................6

1.2.2增菌...................................................................................................7

1.2.3分離...................................................................................................7

1.2.4生化實驗...........................................................................................7

1.2.5血清學(xué)鑒定.......................................................................................9

2成果與分析....................................................................................................10

2.1初步判斷成果........................................................................................10

2.2生化實驗初步鑒別成果.........................................................................10

2.3補做onpg實驗成果...............................................................................11

2.4血清學(xué)鑒定成果.....................................................................................11

2.5成果報告................................................................................................11

3討論...............................................................................................................12

前言

沙門氏菌病的病原體。屬腸桿菌科，革蘭氏陰性腸道桿菌。己發(fā)現(xiàn)的近一千種(或菌株)。按其抗原成分，可分為甲、乙、丙、丁、戊等基本菌組。其中與人體疾病有關(guān)的重要有甲組的副傷寒甲桿菌，乙組的副傷寒乙桿菌和鼠傷寒桿菌，丙組的副傷寒丙桿菌和豬霍亂桿菌，丁組的傷寒桿菌和腸炎桿菌等。除傷寒桿菌、副傷寒甲桿菌和副傷寒乙桿菌引發(fā)人類的疾病外，大多數(shù)僅能目引發(fā)家畜、鼠類和禽類等動物的疾病，但有時也