沙門(mén)氏菌血清學(xué)鑒定

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篇一：沙門(mén)氏菌生化鑒定

沙門(mén)氏菌生化實(shí)驗(yàn)鑒定環(huán)節(jié)

三糖鐵瓊脂原理分析：本培養(yǎng)基適合于腸桿菌科的鑒定。用于觀察細(xì)菌對(duì)糖的運(yùn)用和硫化氫（變黑）的產(chǎn)生。該培養(yǎng)基含有乳糖、

蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1，只能運(yùn)用葡萄糖的細(xì)菌，葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌運(yùn)用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來(lái)又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類(lèi)不被氧化，因此仍保持黃色。而發(fā)酵乳糖的細(xì)菌(e.coli)，則產(chǎn)生大量的酸，使整個(gè)培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。如培養(yǎng)基接種后產(chǎn)生黑色沉淀，是由于某些細(xì)菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反映，生成黑色的硫化亞鐵沉淀。底層產(chǎn)酸：是由于細(xì)菌分解糖類(lèi)物質(zhì)使酚紅退色變黃。

斜面產(chǎn)堿，低層產(chǎn)酸：是細(xì)菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量較少進(jìn)而分解蛋白胨而產(chǎn)堿變紅。由于底層是厭氧環(huán)境，葡萄糖分解慢，２４小時(shí)培養(yǎng)后還沒(méi)分解蛋白胨產(chǎn)堿；而斜面是需氧環(huán)境分解較快，普通８小時(shí)左右就把葡萄糖分解完（此時(shí)斜面也是酸性），但繼而分解蛋白胨產(chǎn)堿，斜面又轉(zhuǎn)為堿性。

2－志賀氏菌：都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，大多不發(fā)酵乳糖，不產(chǎn)生h2s。

4－大腸桿菌：能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分解乳糖，不產(chǎn)生h2s。

3－沙門(mén)氏菌：能分解葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，大多數(shù)產(chǎn)生h2s，多數(shù)產(chǎn)氣。賴(lài)氨酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)

1、實(shí)驗(yàn)管及對(duì)照管均要加一層約10mm厚的滅菌石蠟或礦物油以覆蓋表面，此可使培養(yǎng)基中的溶解氧通過(guò)細(xì)菌消耗掉，并控制培養(yǎng)基的ph。

2、陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)管培養(yǎng)早期（10—12h）因發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸變黃，繼續(xù)培養(yǎng)由于氨基酸脫羧產(chǎn)生胺類(lèi)而使培養(yǎng)基由酸變堿，故又由黃變?yōu)樽仙ｊ幮詫?shí)驗(yàn)管則始終呈黃色。

氨基酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)(1)原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生氨基酸脫羧酶使氨基酸脫羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培養(yǎng)基

變?yōu)閴A性，可用批示劑批示出來(lái)。(2)辦法：將待檢菌分別接種于1支氨基酸（賴(lài)氨酸，鳥(niǎo)氨酸或精氨酸）脫羧酶實(shí)驗(yàn)管和1支氨基酸脫羧酶對(duì)照管（無(wú)氨基酸），各覆蓋最少0.5cm高度的無(wú)菌石蠟油，35℃孵育1~4d，觀察成果。(3)成果：若為溴甲酚紫批示劑，則實(shí)驗(yàn)管紫色為陽(yáng)性，黃色為陰性，對(duì)照管應(yīng)為黃色。(4)應(yīng)用：重要用于某些細(xì)菌種間的鑒別，如賴(lài)氨酸用于產(chǎn)氣腸桿菌（陽(yáng)性）與陰溝腸桿菌（陰性）；鳥(niǎo)氨酸用于陰溝腸桿菌（陽(yáng)性）和克雷伯菌（陰性）；精氨酸用于陰溝腸桿菌（陽(yáng)性）和產(chǎn)氣腸桿菌（陰性）等。

精氨酸雙水解酶實(shí)驗(yàn)(1)原理：精氨酸經(jīng)兩次水解后,生成鳥(niǎo)氨酸、氨及二氧化碳。鳥(niǎo)氨酸又在脫羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均為堿性物質(zhì)，故可使培養(yǎng)基變堿，用批示劑批示出來(lái)。(2)辦法：將待檢菌接種于實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)上，置35℃孵箱孵育1~4d，觀察成果。(3)成果：溴甲酚紫批示劑呈紫色為陽(yáng)性，酚紅批示劑呈紅色為陽(yáng)性。黃色為陰性。(4)應(yīng)用：重要用于腸桿菌科及假單胞菌屬的鑒定。

非發(fā)酵菌：是一大群不發(fā)酵葡萄糖或以氧化形式運(yùn)用糖、需氧或兼性厭氧、無(wú)芽孢的革蘭陰性桿菌。

表2

進(jìn)行鑒定。

反映3：補(bǔ)做onpg。onpg為陰性，同時(shí)賴(lài)氨酸脫羧酶為陽(yáng)性；賴(lài)氨酸脫羧酶為陰性時(shí)為甲型副傷寒沙門(mén)氏菌。

必要時(shí)按表4進(jìn)行沙門(mén)氏菌生活群的鑒別

篇二：沙門(mén)氏菌屬診療血清闡明書(shū)

沙門(mén)氏菌屬診療血清學(xué)實(shí)驗(yàn)操作程序

1.目的

制訂沙門(mén)氏菌屬診療血清使用程序，指導(dǎo)對(duì)沙門(mén)氏菌屬進(jìn)行血清學(xué)分型。

2.原理

用沙門(mén)氏菌屬的代表菌株制成滅活菌抗原分別或混合免疫家兔所得的血清，經(jīng)吸取出去非特異性凝集素后制成，通過(guò)凝集實(shí)驗(yàn)原理供沙門(mén)氏菌屬常見(jiàn)菌型定型。

3.試劑及實(shí)驗(yàn)設(shè)備

3.1沙門(mén)氏菌屬診療血清：寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的規(guī)格為11種的沙

門(mén)氏菌屬診療血清

3.2試劑保存：2~8°c避光保存，避免凍結(jié)，在使用期內(nèi)使用。

3.3實(shí)驗(yàn)設(shè)備：玻片、吸樣槍、接種環(huán)、水浴箱、玻璃管、血平板、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、

電熱高溫接種滅菌器。

4.程序環(huán)節(jié)

4.1將診療血清于冰箱取出后平衡至室溫。

4.2選擇經(jīng)初步生化檢測(cè)符合沙門(mén)菌生物特性的疑似菌落。4.3菌群分析

將經(jīng)18~24h血平板上純培養(yǎng)的待檢菌，先用o多價(jià)A~F群血清進(jìn)行凝集實(shí)驗(yàn)，如陽(yáng)性，提示待檢菌可能屬于A~F群范疇內(nèi)，因97%以上的沙門(mén)菌都涉及在A~F6個(gè)o群之內(nèi)，如果不凝再使用其它o抗血清進(jìn)行凝集實(shí)驗(yàn)，如與其中一種抗血清凝集，待檢菌即屬于對(duì)應(yīng)的菌群。若與多價(jià)o抗血清不凝集，有以下3種可能：①含有Vi抗原；②A~Fo群之外的沙門(mén)菌；③沙門(mén)氏菌屬以外的細(xì)菌?？砂聪率鲛k法進(jìn)一步檢測(cè)，將純菌落用無(wú)菌生理鹽水洗下，制成濃菌液，再分成2份。1份不經(jīng)解決，為活菌液，另1份放100°c水浴中30min，為加熱菌液。取活菌與Vi抗血清，取加熱菌與Vi抗血清凝集，加熱菌與Vi抗血清、A~F多價(jià)o抗血清分別進(jìn)行玻片凝集實(shí)驗(yàn)。根據(jù)成果作以下分析：①活菌與Vi抗血清凝集，加熱菌與Vi抗血清凝集者，可能屬于c群或D群菌，用o7和o9抗血清定群；②活菌與Vi抗血清不凝，可能屬于A~Fo群之外的沙門(mén)菌或其它

菌屬細(xì)菌，需進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)定屬，若符合沙門(mén)氏菌屬細(xì)菌特性，可送cDc鑒定；③加熱菌與Vi抗血清凝集，而與A~F多價(jià)o抗血清不凝集者，可報(bào)告為陰性。4.4血清型分析

菌群擬定后，分析被檢菌的鞭毛抗原成分。先分析第1相鞭毛抗原，再分析第2相鞭毛抗原。第1相鞭毛抗原分析：根據(jù)菌群分析成果，分別選用第1相鞭毛因子血清進(jìn)行玻片凝集實(shí)驗(yàn)。第2相鞭毛抗原分析：所用抗血清，普通是復(fù)合因子（1、2、3、5、6、e、n、I、w）血清。單相菌，如第1相已擬定，可結(jié)合菌群分析及生化反映成果判斷血清型。如為雙相菌，只分析出第1相鞭毛抗原，大多數(shù)也可結(jié)合菌群分析和生化成果判斷血清型，必要時(shí)進(jìn)一步探索第2相鞭毛抗原。若只分析出第2相鞭毛抗原，須進(jìn)一步探索分析第1相抗原。探索另1相抗原可按下述辦法和環(huán)節(jié)進(jìn)行。如“小內(nèi)管”法，一支已融化半固體瓊脂，插入一支無(wú)菌兩端相通小玻璃管于培養(yǎng)基當(dāng)中，長(zhǎng)度稍高出半固體液面。待瓊脂泠卻凝固，用接種環(huán)取1~2環(huán)待克制相h抗血清，放入小內(nèi)管的瓊脂表面，然后接種被誘導(dǎo)菌株于小內(nèi)管含抗血清瓊脂層面，35°c孵育4~6h或過(guò)夜，取小內(nèi)管外半固體瓊脂層生長(zhǎng)培養(yǎng)物，接種于平板或直接做凝集反映，可獲得待誘導(dǎo)相的菌株。有些種的擬定是靠鞭毛抗原中的微小差別來(lái)分析的，因而獲得豐富鞭毛抗原的培養(yǎng)物十分重要。

4.5將經(jīng)18~24h血平板上純培養(yǎng)的待檢菌，用生理鹽水制備2麥?zhǔn)蠁挝坏木鷳?/p>

液，取診療血清20μL于干凈玻片上，然后取20μL待檢菌懸液與血清混勻，輕輕搖動(dòng)玻片，1min內(nèi)呈現(xiàn)明顯凝集者為陽(yáng)性，呈均勻渾濁者為陰性，每次凝集實(shí)驗(yàn)均應(yīng)以生理鹽水作為陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

4.6根據(jù)其生化反映和與o抗血清、Vi抗血清、h抗血清的凝集成果對(duì)照沙門(mén)

氏菌屬?lài)?guó)內(nèi)常見(jiàn)菌型診療抗原表，擬定沙門(mén)菌的菌型。4.7沙門(mén)氏菌屬?lài)?guó)內(nèi)常見(jiàn)菌型診療抗原，見(jiàn)附表

5.質(zhì)量控制

o多價(jià)A~F群血清選擇傷寒沙

門(mén)菌ATcc14028為陽(yáng)性對(duì)照；大腸埃希菌ATcc25922為陰性對(duì)照

附表：沙門(mén)氏菌屬?lài)?guó)內(nèi)常見(jiàn)菌型診療抗原表

篇三：沙門(mén)氏菌實(shí)驗(yàn)13.37

華南農(nóng)業(yè)大學(xué)

答辯委員會(huì)主席xxx評(píng)閱人xxx

摘要

沙門(mén)氏菌是一大群寄生于人類(lèi)和動(dòng)物腸道，其生化反映和抗原構(gòu)造相似的革蘭氏陰性菌。其種類(lèi)繁多，少數(shù)能使人致病，其它可使動(dòng)物致病，偶然可傳染給人。沙門(mén)氏菌病是公共衛(wèi)生學(xué)上含有重要意義的人畜共患病之一,其病原沙門(mén)氏菌屬腸道細(xì)菌科，重要引發(fā)人類(lèi)傷寒、副傷寒以及食品中毒或敗血病。在世界各地的食物中毒中，沙門(mén)氏菌食品中毒常占首位或者第二位。據(jù)稱(chēng)在全部肉用動(dòng)物中,家禽顯然對(duì)沙門(mén)氏菌最易感受。沙門(mén)氏菌易于在雛雞腸道內(nèi)定居與增殖，雞白痢沙門(mén)氏菌、雞傷寒沙門(mén)氏菌是引發(fā)雞常見(jiàn)多發(fā)性傳染病的細(xì)菌，嚴(yán)重影響雛雞成活率，造成成年雞產(chǎn)蛋等生產(chǎn)性能的下降[2]。因此在實(shí)臉上和生產(chǎn)實(shí)踐上必須及時(shí)進(jìn)行家禽腸道傳染病的防止及控制。自19世紀(jì)后期，沙門(mén)氏菌初次被鑒定為人類(lèi)的一種病原以來(lái)，檢測(cè)辦法學(xué)都是建立在采用感染病人的糞便或血液作為臨床病料的基礎(chǔ)上。隨著DnA和抗體技術(shù)的發(fā)展，近間出現(xiàn)了諸多改善的辦法，其中許多辦法能夠在48h內(nèi)檢出沙門(mén)氏菌。根據(jù)gb/T4789.4-20XX，食品中沙門(mén)氏菌傳統(tǒng)的檢測(cè)辦法有5個(gè)基本環(huán)節(jié)：前增菌、選擇性增菌、選擇性平板分離、生化實(shí)驗(yàn)、血清學(xué)分型鑒定。現(xiàn)在檢測(cè)食品中的沙門(mén)氏菌是按統(tǒng)計(jì)學(xué)取樣方案為基礎(chǔ)，25g食品為原則分析單位。本實(shí)驗(yàn)由于實(shí)際條件的限制，取10g雞腸作為樣品按照國(guó)標(biāo)辦法進(jìn)行沙門(mén)氏菌檢測(cè)。

核心詞：沙門(mén)氏菌革蘭氏陰性食物中毒

目錄

前言.............................................................................................................3

1材料與辦法.....................................................................................................3

1.1材料...........................................................................................................3

1.1.1儀器....................................................................................................3

1.1.2試劑...................................................................................................4

1.2實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)..................................................................................................5

1.2.1前增菌...............................................................................................6

1.2.2增菌...................................................................................................7

1.2.3分離...................................................................................................7

1.2.4生化實(shí)驗(yàn)...........................................................................................7

1.2.5血清學(xué)鑒定.......................................................................................9

2成果與分析....................................................................................................10

2.1初步判斷成果........................................................................................10

2.2生化實(shí)驗(yàn)初步鑒別成果.........................................................................10

2.3補(bǔ)做onpg實(shí)驗(yàn)成果...............................................................................11

2.4血清學(xué)鑒定成果.....................................................................................11

2.5成果報(bào)告................................................................................................11

3討論...............................................................................................................12

前言

沙門(mén)氏菌病的病原體。屬腸桿菌科，革蘭氏陰性腸道桿菌。己發(fā)現(xiàn)的近一千種(或菌株)。按其抗原成分，可分為甲、乙、丙、丁、戊等基本菌組。其中與人體疾病有關(guān)的重要有甲組的副傷寒甲桿菌，乙組的副傷寒乙桿菌和鼠傷寒桿菌，丙組的副傷寒丙桿菌和豬霍亂桿菌，丁組的傷寒桿菌和腸炎桿菌等。除傷寒桿菌、副傷寒甲桿菌和副傷寒乙桿菌引發(fā)人類(lèi)的疾病外，大多數(shù)僅能目引發(fā)家畜、鼠類(lèi)和禽類(lèi)等動(dòng)物的疾病，但有時(shí)也