中藥十八反對大鼠肝細胞色素p450酶含量的影響

中藥十八反對大鼠肝細胞色素p450酶含量的影響

18個熱是中醫(yī)理論的重要組成部分，是中醫(yī)七情“對立”配合的具體體現。目前，這項研究主要集中在對該現象的確認上，而對該機制的解釋很少?，F代醫(yī)學理論認為,藥物間的“反”應指它們間不良的相互作用,藥物經肝臟代謝時,通過影響肝藥酶產生相互影響,是藥物相互作用的途徑之一。因此本實驗選擇測定大鼠肝微粒體細胞色素P450酶含量,觀察烏頭、半夏、栝樓、貝母、白蘞和白及各藥單藥組、配伍組對P450酶及b5含量的影響,通過比較十八反藥物中的一組“半樓貝蘞及攻烏”,以探討其配伍藥物在肝藥酶途徑的相互影響,為今后中藥復方配伍研究提供實驗依據。1材料表面1.1實驗動物中心2級Wistar大鼠,體質量180～220g,雌雄各半,由軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心提供,常規(guī)飼養(yǎng)。實驗動物質量合格證號:SCXK-(軍)2002-001,動物實驗設施使用證號:SYXK-(軍)2002-001。1.2實驗藥物實驗藥物購自北京市同仁堂藥店和安國藥市(固定產地),水煎制備,濃縮成1g/mL,置4℃保存?zhèn)溆谩?.3血清標準蛋白和試劑連二亞硫酸鈉(北京化工廠);一氧化碳(CO)(北京夏天氣體廠);牛血清標準蛋白(總后藥檢所);Folin酚試劑(北京欣經科生物公司);高速冷凍離心機,DU-640核酸蛋白分析儀(BECKMAN公司)。1.4大鼠給藥劑量實驗大鼠隨機分為11個給藥組和1個正常對照組,每組18只,灌胃給藥,正常對照組給予等量的生理鹽水,2次/d,連續(xù)3、7、14d。根據《中華人民共和國藥典》(2000年版)有關人用各藥的劑量范圍,取高限用量進行預實驗,按體表面積換算成大鼠給藥劑量,各組實驗給藥劑量分別為:烏頭組0.25g/(kg·d);半夏組、貝母組、白蘞組1.51g/(kg·d);栝樓組、白及組2.51g/(kg·d)。2實驗方法2.1灌流肝臟,灌流肝臟分別于給藥3、7、14d后禁食12h以上斷頭處死動物,迅速打開腹腔,作肝門靜脈插管,用預冷的生理鹽水灌流至肝臟顏色變?yōu)橥咙S色為止。取出肝臟稱質量,按肝臟組織∶緩沖液(1∶4)加pH7.5(TMS)緩沖液制備勻漿,用鈣沉淀法制備微粒體懸液。2.2不同指標樣品對cod-pcr測定Lowry法測定微粒體蛋白懸液蛋白含量,根據各樣品的蛋白含量,用pH7.4的Tris緩沖液稀釋微粒體蛋白懸液至0.5mg/mL,共6mL,分成2管。一管作為空白對照管,另一管加20μL連二亞硫酸鈉(0.1g/mL)混勻,作為b5樣品測定管,400～500nm掃描測定樣品b5含量;取出上述空白對照管倒入原管中,加20μL連二亞硫酸鈉(0.1g/mL)混勻,沖CO1min,作為P450酶樣品測定管,上述b5樣品測定管作為空白對照管,400～500nm掃描測定P450酶含量。計算公式:2.3壓力值的比較實驗數據以均數±標準差()表示,兩組間的差異顯著性分析用方差分析。表中顯著性表示方法:與正常對照組比較*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;與烏頭組比較#P<0.05,##P<0.01,###P<0.01;與其相應單藥組比較▲P<0.05,▲▲P<0.01,▲▲▲P<0.01。3結果3.1兩組配伍p450酶含量比較結果表明,烏頭、半夏單藥組藥后14d大鼠肝細胞色素P450酶含量均顯著增加,與正常對照組比較統計差別顯著(P<0.05或P<0.01);兩藥配伍后P450酶含量與其相應單藥組比較顯著降低(P<0.01),與正常對照組比較無統計差別(P>0.05);烏頭單藥組藥后14d大鼠肝細胞色素b5含量顯著增加,與正常對照組比較統計差別顯著(P<0.01),兩藥配伍藥后7、14db5含量與其相應單藥組比較顯著降低(P<0.05),與正常對照組比較無統計差別(P>0.05)。3.2胞色素p450酶檢測結果表明,栝樓組及烏頭與栝樓配伍組藥后對大鼠肝細胞色素P450酶含量無影響(P>0.05);兩藥配伍藥后14db5含量與其相應單藥組及正常對照組比較顯著降低(P<0.05或P<0.01)。3.3組患者的統計差別p/0.05,正常對照組與正常對照組比較結果表明,烏頭與貝母兩藥配伍藥后14dP450酶含量與其相應單藥組比較顯著降低。(P<0.05或P<0.01),與正常對照組比較無統計差別(P>0.05);貝母組藥后7、14d大鼠肝細胞色素b5含量顯著增加,與正常對照組比較統計差別顯著(P<0.05),烏頭與貝母兩藥配伍藥后7db5含量顯著低于貝母單藥組(P<0.05),藥后14db5含量與相應單藥組及正常對照組比較顯著降低(P<0.001)。3.4不同單藥組p450酶含量比較結果表明,白蘞單藥組藥后14d大鼠肝細胞色素P450酶含量顯著增加,與正常對照組比較統計差別顯著(P<0.01),烏頭與白蘞兩藥配伍后P450酶含量與其相應單藥組比較顯著降低(P<0.01),與正常對照組比較無統計差別(P>0.05);白蘞單藥組藥后14d大鼠肝細胞色素b5含量顯著增加,與正常對照組比較統計差別顯著(P<0.05),烏頭與白蘞兩藥配伍后b5含量與其相應單藥組及正常對照組比較顯著降低(P<0.05或P<0.01)。3.5酶含量比較結果表明,白及單藥組對大鼠肝細胞色素P450酶含量無影響,烏頭與白及兩藥配伍藥后14dP450酶含量與烏頭組比較顯著降低(P<0.01),與正常對照組比較無統計差別(P>0.05);白及單藥組藥后14d大鼠肝細胞色素b5含量顯著高于正常對照組(P<0.05),烏頭與白及兩藥配伍藥后14db5含量與其相應單藥組和正常對照組比較顯著降低(P<0.05或P<0.01)。4不同藥物配伍對p450酶活性的影響本實驗設3個給藥時間點,觀察了給藥后3、7、14d大鼠P450酶及b5含量變化,結果發(fā)現該組藥物于藥后3、7d對P450酶及b5含量僅個別組有影響,藥后14d對P450酶及b5含量影響較大。單藥栝樓組、貝母組、白及組對P450酶含量無影響,烏頭組、半夏組和白蘞組與正常對照組比較可顯著增高P450酶含量(P<0.01或P<0.05),烏頭分別與半夏、貝母、白蘞、白及配伍可降低P450酶含量,與其相應單藥組比較統計差別顯著(P<0.01或P<0.05),與正常對照組無統計差別(P>0.05);單藥栝樓組和半夏組對b5含量無影響,烏頭組、貝母組、白蘞組和白及組與正常對照組比較可顯著增高b5含量(P<0.001或P<0.05);烏頭分別與半夏、栝樓、貝母、白蘞、白及配伍可降低b5含量,與其相應單藥組及正常對照組比較統計差別顯著(P<0.001或P<0.05)。細胞色素P450酶是體內主要參與藥物代謝的酶,P450酶活性的高低直接影響到藥物的藥理作用,當兩種以上的藥物合用時,就可能誘導或抑制P450酶,從而導致藥物藥效或毒性的增強或降低。細胞色素P450酶在化學藥物相互作用研究中應用廣泛,但在中藥復方配伍研究中