HIV抗體檢測標準操作程序SOP

HIV抗體檢測原則操作程序（SOP）——微生物科樣本的采集和解決二、檢測辦法和環(huán)節(jié)三、質(zhì)控品的應(yīng)用辦法四、儀器的使用和維護五、成果的統(tǒng)計、解釋與報告六、保密程序七、實驗室的清理、消毒八、艾滋病檢測實驗室安全防護九、附表樣品的采集和解決1.樣品的采集：1.1血清樣品采集：用注射器抽出一定量靜脈血，室溫下自然放置1-2小時，待血清凝固和血塊收縮后在用3000rmp離心15min，吸出血清備用。1.2抗凝血樣品采集：用加有抗凝劑的真空管或用消毒注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管，重復(fù)輕搖，分離血漿和血細胞備用。1.3采樣注意事項：1.3.1采集樣品應(yīng)按臨床采血技術(shù)規(guī)范及試劑盒闡明書規(guī)定進行。1.3.2采集標本時應(yīng)注意安全，直接接觸HIV感染者或艾滋病病人血液和體液的操作應(yīng)戴雙層手套。2、樣品的保存：2.1用于抗體檢測的血清或血漿樣品應(yīng)寄存與-20攝食度下列，短期（1周）內(nèi)進行檢測的樣品可寄存于2-8攝食度。3.樣品的運輸：3.1實驗室間傳遞的樣品應(yīng)為血清或血漿，除特殊狀況外普通不運輸全血。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標記，標明樣品的編號或受檢者姓名、種類、、采樣時間。3.2將試管放入專用帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒。在試管的周邊墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。3.3特殊狀況下如需對個別樣品進行復(fù)測，能夠用特快專遞形式投寄，但必須將盛有樣品的試管包扎好，確保不會破碎和遺漏。4.樣品的接受：4.1含有感染性樣品的包裹必須在含有解決感染源設(shè)備的實驗室內(nèi)由通過培訓(xùn)的工作人員打開，用后的包裹應(yīng)進行消毒。4.2核對標本與送檢單，檢查樣品管有無破損及遺漏。如發(fā)現(xiàn)遺漏應(yīng)立刻將尚存留的樣品移出、對樣品管和盛器消毒，同時還要報告有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)和專家。檢查辦法和環(huán)節(jié)1.檢查辦法：酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）2.檢查環(huán)節(jié)：嚴格按照試劑闡明書操作。3.注意事項：3.1嚴禁肉眼判讀！3.2確保酶標儀，洗板機正常運轉(zhuǎn)，確保加樣器精確，選擇高質(zhì)量的與加樣器配套的TIP頭3.3使用使用期內(nèi)的試劑3.4確保樣品質(zhì)量質(zhì)控品的應(yīng)用辦法1.質(zhì)控品按臨床樣本看待，操作應(yīng)根據(jù)實驗室安全管理條例執(zhí)行。2.質(zhì)控品使用前應(yīng)在室溫（18－25℃3.外部對照的設(shè)立：日常檢測中，每次實驗均應(yīng)設(shè)立一孔外部對照（一次實驗中使用多塊酶標板時，每塊酶標板均應(yīng)單獨設(shè)立一孔外部對照）。4.質(zhì)控品開蓋使用后，可保存于2－8℃5.質(zhì)控品應(yīng)避免重復(fù)凍融。儀器的使用和維護1.設(shè)立慣用儀器的維護制度，以確保正常運轉(zhuǎn)；根據(jù)使用狀況更換必要的部件：

1.1酶標讀數(shù)儀、洗板機

每天：核對濾光片波長，檢查洗板機管道與否暢通，與否有漏液現(xiàn)象。

每七天：清潔儀器表面，保護光學(xué)零件不沾灰塵。

每月：檢查洗滌時各孔與否與對應(yīng)的沖洗頭對位良好，負壓與否符合規(guī)定規(guī)定。

每年：檢查、清洗濾光片，如果出現(xiàn)破裂或霉點則要更換。根據(jù)儀器內(nèi)含有的校準程序或使用校準板，對濾光片的精密度進行校驗并保存統(tǒng)計。

1.2移液器：

一年最少應(yīng)當(dāng)標定一次，發(fā)現(xiàn)異常狀況應(yīng)隨時進行標定。

標定辦法涉及有色溶液光譜分析法、稱量校準法、同位素計數(shù)法以及使用配套校準盒等。標定多道移液器時，必須確保每一種加樣頭都能夠持續(xù)、精確地加樣。移液器的精密度應(yīng)在廠家闡明書規(guī)定的范疇內(nèi)。范例用蒸餾水稱量法標定移液器：

在室溫為22℃的無風(fēng)的工作室中，在萬分之一級別天平上放置一種小三角燒瓶，用待標定的移液器吸取寄存過夜的蒸餾水加入燒瓶底部，稱重并計算蒸餾水重量，持續(xù)稱重10次。加蒸餾水的量根據(jù)待標定移液器的規(guī)格而不同（見下表），10次標定稱量均在規(guī)定的重量范疇內(nèi)為合格，貼上合格標簽，注明標定日期，不合格移液器要請生產(chǎn)廠家進行校準。填寫和保存較準統(tǒng)計。稱重法標定移液器方案移液器規(guī)格蒸餾水量規(guī)定重量范疇0.5–10μl2μl1.75-2.25mg5–40μl10μl9.8-10.2mg40–200μl70μl69.4-70.6mg200–1000μl300μl298.0-302.0mg1–5mlμl1990.0-.0mg2–10ml3500μl3485.0-3515.0mg3、冰箱和孵育箱：

定時檢查溫度并作好統(tǒng)計，必須每天檢查和統(tǒng)計低溫及超低溫冰箱的溫度。

4、定時檢查其它儀器設(shè)備。成果的統(tǒng)計、解釋與報告1.HIV抗體篩查

1.1篩查實驗呈陰性反映出具HIV抗體陰性報告。

1.2篩查實驗呈陽性反映，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報告（附表1），不能出陽性報告。同時應(yīng)盡快進行下列解決：

1.2.1填寫HIV抗體復(fù)查送檢單（附表2），經(jīng)一名檢測操作人員和一名含有中級以上技術(shù)職稱的人員審核簽字。

1.2.2盡量重新采集受檢者的血樣。

1.2.3將二份血樣（或僅原血樣）連同HIV抗體復(fù)查送檢單一并送本地艾滋病篩查中心實驗室，再轉(zhuǎn)送艾滋病確認實驗室，或直接送確認實驗室確認。

1.2.4篩查中心實驗室應(yīng)盡快用兩種試劑進行復(fù)測，如成果均陽性或一陰一陽，則應(yīng)將送檢標本和HIV抗體復(fù)查送檢單一并送艾滋病確認實驗室確認。如復(fù)檢成果均為陰性，在送檢單上蓋上“HIV抗體陰性（一）”字樣圖章，并及時將成果反饋送檢單位，不必再送確認實驗室。

1.2.5保密程序要有專人負責(zé)妥善保存多個實驗統(tǒng)計、感染者檔案，不得私自修改和銷毀；嚴格恪守保密制度，未經(jīng)省級衛(wèi)生行政部門許可，不得向無關(guān)人員或單位提供任何狀況。檢測的陽性成果不是最后成果，應(yīng)及時做進一步確認，初篩實驗室不能出具HIV抗體陽性的成果報告，更不能告知受檢者本人。實驗室的清理和消毒1.帶入和帶出實驗室的物品

1.1對全部帶入實驗室的物品都應(yīng)進行檢查。含有測試樣品的包裹應(yīng)在安全柜或其它適宜的裝置內(nèi)打開。

1.2將HIV測試樣品轉(zhuǎn)送其它實驗室時，應(yīng)避免對人員和環(huán)境的污染。護送樣品的人應(yīng)明確接受地點和接受人，實驗室負責(zé)人或其指定的人員應(yīng)及時確認樣品已送達指定的實驗室，被轉(zhuǎn)入安全位置并得到妥善解決。

1.3污染或可能造成污染的材料在帶出實驗室前應(yīng)進行消毒。

1.4用于國際空運的樣品要按照國際空運協(xié)會（IATA）的規(guī)則進行包裝和標記，并提交對應(yīng)的資料。

2.減少利器的使用

2.1盡量避免在實驗室使用針頭、刀片等利器，.如果必須使用，在解決或清洗時應(yīng)采用方法避免刺傷或劃傷，并應(yīng)對用過的物品進行消毒解決。

2.2最佳不使用玻璃制品。

2.3盡量使用安全針具采血，如蝶形真空針，自毀性針具等，以減少直接接觸血液和刺傷的危險性。應(yīng)將用過的針頭直接放入結(jié)實的容器內(nèi)，消毒后廢棄。3.實驗室慣用物品的消毒辦法：

3.1廢棄物缸：10%（v/v）次氯酸鈉（含10，000ppm有效氯）。

3.2生物安全柜工作臺面和儀器表面：70%乙醇。

3.3溢出物：10%次氯酸鈉（w/v）。

3.4生物安全柜和實驗室：甲醛蒸氣熏蒸。生物安全柜：25ml福爾馬林（40%甲醛，w/v）和等量水混合后放在一種蒸發(fā)皿中使其在密封的生物安全柜中蒸發(fā)，保持最少6小時，最佳過夜。實驗室：福爾馬林和水加熱沸騰，其體積根據(jù)實驗室的大小而定。

3.5污染的臺面和器具：40%甲醛水溶液，也能夠用過氧化氫或過氧乙酸。艾滋病檢測實驗室安全防護1.建立安全制度1.1實驗室的設(shè)備、建筑和設(shè)施的安全性應(yīng)通過專家的評審。

1.2建立安全原則操作程序，該程序應(yīng)合用于現(xiàn)有的實驗條件，并與實驗室其它規(guī)章制度一致。

1.3無論與否發(fā)生意外事故，每年都要對安全原則操作程序及其實施狀況進行檢查。

1.4制訂意外事故解決預(yù)案。.建立意外事故的登記和報告制度。

1.5實驗室主任要按照《艾滋病職業(yè)暴露安全藥品儲藏庫和儲藏點的實施方案（試行）》（見附錄1）的規(guī)定，對突發(fā)事件和職業(yè)暴露事故進行調(diào)查、解決和報告。2.人員管理

2.1實驗室主任應(yīng)理解全部工作人員。在安排工作區(qū)域時，要根據(jù)人員的工作種類和所涉及的生物材料，對實驗室環(huán)境做安全檢查。

2.2新調(diào)入人員、外來合作、進修和學(xué)習(xí)的人員在進入實驗室之前必須通過實驗室主任的同意。非實驗室人員和非實驗室物品不得進入實驗室。

2.3嚴格執(zhí)行實驗室工作人員年度采血檢測HIV抗體和備案制度，工作人員血清應(yīng)長久保存。

3.培訓(xùn)

3.1全部工作人員必須通過HIV檢測技術(shù)和實驗室安全培訓(xùn)，涉及上崗培訓(xùn)和復(fù)訓(xùn)，并接受實驗室管理人員的監(jiān)督。實驗室的安全負責(zé)人要對工作和環(huán)境的安全負責(zé)，全部工作人員都有責(zé)任保護自己和別人的安全。

3.2必須告知新上崗人員實驗室工作的潛在危險，進行安全教育，直至有能力后方可單獨工作。4.個人保健

4.1高原則的個人保健對于減少感染的危險性很重要。皮膚受損、患病都會增加感染的危險。皮膚的傷口和擦傷都應(yīng)以防水敷料覆蓋。

4.2進實驗室前要摘除首飾，修剪長的帶刺的指甲，以免刺破手套。

4.3進入實驗室應(yīng)穿隔離衣，戴手套。如果接觸物傳染危險性大，則應(yīng)戴雙層手套和防護眼鏡。

4.4離開實驗室前必須脫去隔離衣并洗手。

4.5嚴禁在艾滋病檢測實驗室內(nèi)進食、飲水、吸煙和化妝。5.實驗室事故解決5.1皮膚針刺傷或切割傷：立刻用肥皂和大量流水沖洗，盡量擠出損傷處的血液，用70%乙醇或其它消毒劑消毒傷口。

5.2皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用適宜的消毒劑浸泡，如70%乙醇或其它皮膚消毒劑。

5.3粘膜污染：用大量流水或生理鹽水徹底沖洗污染部位。

5.4衣物污染：盡快脫掉污染的衣物，進行消毒解決。

5.5污染物潑濺：發(fā)生小范疇污染物潑濺事故時，應(yīng)立刻進行消毒解決。發(fā)生大范疇污染物潑濺事故時，應(yīng)立刻告知實驗室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全負責(zé)人達成事故現(xiàn)場查清狀況，擬定消毒的程序。

6.事故登記（附表5）：

6.1事故發(fā)生的時間、地點及具體通過。

6.2暴露方式；受傷部位、傷口深淺、暴露程度；污染物種類（培養(yǎng)液、血液或其它體液）以及其中含有HIV的狀況。

6.3解決辦法和通過，涉及專家或領(lǐng)導(dǎo)赴現(xiàn)場指導(dǎo)和解決的狀況。

6.4與否采用暴露后藥品防止，如