《復(fù)習(xí)與測(cè)試》PPT課件(江蘇省縣級(jí)優(yōu)課)-生物課件

微生物培養(yǎng)技術(shù)在食品生產(chǎn)應(yīng)用西交大蘇州附中陳蓉芳舌尖上的中國(guó)真菌；代謝類型：異養(yǎng)需氧型；可產(chǎn)生豐富的蛋白酶；菌絲長(zhǎng)，初期白色，后灰白色至黑色；毛霉發(fā)酵性狀優(yōu)良且更純的毛霉菌種毛豆腐生產(chǎn)中毛霉的選育討論分離優(yōu)勢(shì)毛霉菌株的實(shí)驗(yàn)過(guò)程：分離純化保藏及擴(kuò)大培養(yǎng)待解決問(wèn)題：①培養(yǎng)基？②無(wú)菌技術(shù)？無(wú)菌設(shè)備？③采用何種接種方法？挑取菌絲制備菌懸液孟加拉紅培養(yǎng)基成分蛋白胨5g葡萄糖10g磷酸二氫鉀1g硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.5g氯霉素0.1g1/3000孟加拉紅溶液100mL瓊脂20g蒸餾水1000mL氮源碳源無(wú)機(jī)鹽水流程二、制備菌懸液1.培養(yǎng)基抗生素，抑制細(xì)菌繁殖微生物培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分？水氮源碳源無(wú)機(jī)鹽無(wú)機(jī)碳源有機(jī)碳源自養(yǎng)型CO2、NaHCO3等糖類、脂肪酸等異養(yǎng)型無(wú)機(jī)氮源有機(jī)氮源N2、NH3、硝酸鹽等尿素、牛肉膏、蛋白胨等流程二、制備菌懸液1.培養(yǎng)基自身固氮固體（分離、純化、計(jì)數(shù)）液體（大量繁殖）半固體（觀察運(yùn)動(dòng)）選擇培養(yǎng)基鑒定培養(yǎng)基流程二、制備菌懸液1.培養(yǎng)基蛋白胨5g葡萄糖10g磷酸二氫鉀1g硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.5g氯霉素0.1g1/3000孟加拉紅溶液100mL瓊脂20g蒸餾水1000mL按物理形態(tài)分按用途分蛋白胨5g葡萄糖10g磷酸二氫鉀1g硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.5g氯霉素0.1g1/3000孟加拉紅溶液100mL瓊脂20g蒸餾水1000mL常見選擇培養(yǎng)基待分離微生物培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成尿素分解菌固氮菌纖維素分解菌自養(yǎng)微生物酵母、霉菌等真菌尿素為唯一氮源不加有機(jī)氮源纖維素為唯一碳源不加有機(jī)碳源加青霉素抑制細(xì)菌流程二、制備菌懸液1.培養(yǎng)基分裝培養(yǎng)基的制備（固體為例）注意：調(diào)pH必須滅菌前操作流程二、制備菌懸液1.培養(yǎng)基排排序ACBD倒平板流程二、制備菌懸液1.培養(yǎng)基二次污染改錯(cuò)：某同學(xué)將滅菌后的培養(yǎng)基，用溫度計(jì)測(cè)量50度就進(jìn)行倒平板；先將錐形瓶口通過(guò)火焰，然后左手打開皿蓋放到一邊以免培養(yǎng)基濺到污染；蓋好皿蓋后立即倒置。思考一：冷卻后的平板為何要倒置？思考二：如何判斷新制的平板是否污染？打開一稍大于瓶口縫隙。防止皿蓋的冷凝水污染培養(yǎng)基，又可使培養(yǎng)基表面水分更好揮發(fā)放入37℃恒溫箱中，培養(yǎng)12h—24h觀察是否有菌落長(zhǎng)出流程二、制備菌懸液1.培養(yǎng)基冷凝后倒置致病微生物流程二、制備菌懸液2.無(wú)菌技術(shù)①干熱滅菌②灼燒滅菌④

70%酒精③紫外線⑤高壓蒸汽滅菌方法對(duì)象流程二、制備菌懸液2.無(wú)菌技術(shù)【典例一】（2014江蘇節(jié)選）（1）右圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是

。（填序號(hào)）①安全閥、放氣閥、壓力表②放氣閥、安全閥、壓力表③安全閥、放氣閥、溫度表④放氣閥、安全閥、溫度表①（2）實(shí)驗(yàn)用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是

，為了減少滅菌后器皿被污染，滅菌前應(yīng)該

。（3）到滅菌時(shí)間后，當(dāng)

指針降到零方可打開

，再打開蓋子，取出滅菌物品。干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌用牛皮紙包扎器皿壓力表放氣閥毛豆腐菌懸液菌種雜而多，因此分離純化的關(guān)鍵思路是？挑取菌絲篩選毛霉菌株的實(shí)驗(yàn)進(jìn)程：制備菌懸液分離純化？稀釋菌體以便形成單菌落接種方法流程三、分離純化菌種稀釋涂布平板法平板劃線法1.在第一次平板劃線之前要灼燒接種環(huán)

。2.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落3.每次劃線都要從上一次劃線的末端開始。4.轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再沾取菌液后進(jìn)行劃線。5.若進(jìn)行四區(qū)域劃線，只有第四區(qū)會(huì)出現(xiàn)單菌落。6.若進(jìn)行四區(qū)域劃線，一共需要灼燒接種環(huán)5次。√×√××√平板劃線法流程三、分離純化菌種c.辨一辨a.動(dòng)動(dòng)手b.找找茬劃線某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長(zhǎng)滿了菌，第二劃線區(qū)域的第一條線上無(wú)菌落，其它劃線上有菌落。造成劃線無(wú)菌落可能的操作失誤有①接種環(huán)灼燒后未冷卻；②劃線未從第一區(qū)域末端開始【典例二】梯度稀釋0.1mL

0.1mL

0.1mL

涂布稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法（1）濃度梯度稀釋具體操作：102110~用移液管從倍稀釋的試管中吸取1ml稀釋液，注入一空試管，在用移液管量取9ml無(wú)菌水一并注入，吹吸多次，使菌液和水充分混勻110（2）滴加到培養(yǎng)基表面的菌液一般不超過(guò)0.1毫升，為什么？避免培養(yǎng)基表面菌懸液出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果（3）涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，對(duì)嗎？√稀釋度104105106平板123123123菌落數(shù)原始菌懸液樣品中活菌數(shù)某同學(xué)在進(jìn)行毛霉分離純化實(shí)驗(yàn)時(shí)，采用了稀釋涂布平板法，發(fā)現(xiàn)在稀釋度為并沒(méi)有出現(xiàn)菌落，出現(xiàn)菌落情況如下110~10341238940794①各梯度分別涂布3個(gè)平板的目的？10298192226②應(yīng)選擇那個(gè)稀釋度計(jì)數(shù)？提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性30-300*③計(jì)算？個(gè)/ml（每個(gè)平板滴加0.1毫升菌液）④稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)比活菌實(shí)際值數(shù)據(jù)偏大還是偏?。浚?4+102+98）/3*10*10=9.8*1057小，當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落【典例三】⑤平板劃線法也可用于計(jì)數(shù)嗎？不可，另一方法是血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法培養(yǎng)基種類、日期、稀釋度等25—28℃實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：菌落的顏色、大小、隆起程度、形狀分離純化保藏及擴(kuò)大培養(yǎng)挑取菌絲制備菌懸液短期保藏長(zhǎng)期保藏?cái)U(kuò)大培養(yǎng)流程四、保藏菌種、擴(kuò)大培養(yǎng)生活中的毛霉微生物多方面應(yīng)用【微生物與現(xiàn)代科技】（2016屆蘇州零模）利用微生物轉(zhuǎn)化膽固醇在醫(yī)藥生產(chǎn)上有重要作用。實(shí)驗(yàn)人員從土壤中篩選膽固醇轉(zhuǎn)化菌株的過(guò)程如下圖。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題：（1）實(shí)驗(yàn)人員將土壤樣品接種到富集培養(yǎng)液①中培養(yǎng)時(shí)，需要將其置于搖床上不斷震蕩，其主要的作用有、。（2）培養(yǎng)一段時(shí)間后，從①中取適量培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移接種到選擇培養(yǎng)液②中培養(yǎng)36h后，再轉(zhuǎn)移到相同的選擇培養(yǎng)液③中培養(yǎng)。與培養(yǎng)液①不同，培養(yǎng)液②③成份的主要特點(diǎn)是

。在相同的培養(yǎng)液②③中轉(zhuǎn)移培養(yǎng)主要是為了避免原培養(yǎng)液中的

干擾，同時(shí)，又可以

。增加溶氧量使菌種與培養(yǎng)液充分接觸以膽固醇為唯一碳源碳源

篩選（純化）獲得可轉(zhuǎn)化膽固醇的菌種

【微生物與現(xiàn)代科技】增加溶氧量PCR溫度pH使菌種分散，以便獲得單菌落

5CD3．（2016屆蘇州零模）利用微生物轉(zhuǎn)化膽固醇在醫(yī)藥生產(chǎn)上有重要作用。實(shí)驗(yàn)人員從土壤中篩選膽固醇轉(zhuǎn)化菌株的過(guò)程如下圖。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題：（3）從③