溫脾湯先煎后下條件的探討

溫脾湯先煎后下條件的探討

溫脾湯的配方來自于齊千點(diǎn)的關(guān)鍵食譜。食譜包括大黃9克、附子9克、黨參6克、干姜6克和甘草3克。溫脾湯功能溫補(bǔ)脾陽,攻下冷積。方中附子含有烏頭堿類毒性成分,為了降低其毒性,需進(jìn)行先煎,而大黃含有蒽醌類成分,對(duì)熱不穩(wěn)定,宜后下。本實(shí)驗(yàn)采用了毛細(xì)管電泳色譜法測(cè)定了溫脾湯中烏頭堿及大黃4種游離蒽醌的含量,探討了附子先煎對(duì)溫脾湯中烏頭堿含量的影響及大黃后下對(duì)溫脾湯中4種游離蒽醌含量的影響。1小樣本中對(duì)黃油酸對(duì)照品HPCE-3D高效毛細(xì)管電泳儀(美國(guó)惠普公司),二級(jí)管陣列檢測(cè)器;烏頭堿、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、大黃酸對(duì)照品均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;磷酸為色譜純,水為重蒸餾水,其余試劑均為分析純。試驗(yàn)藥材購自湖南省藥材公司,并由本院生藥室溫俊達(dá)副研究員鑒定,附子為毛茛科植物烏頭AconitumcarmichaeliDebx.子根的炮制加工器(白附片),大黃為蓼科植物掌葉大黃RheumpalmatumL.的干燥根莖。2首先，對(duì)附子的研究2.1制備工藝及提取液取2倍于湯劑處方量的藥材,加10倍量水進(jìn)行煎煮,附子分別先煎0,15,30,45,60min后,再與余藥混煎30min,過濾,藥液分別濃縮、定容至100mL,依次編為1#～5#;另取附子單味藥材18g,加水煎煮30min,過濾,藥液濃縮、定容至100mL,編為6#。精密吸取藥液30mL,加濃氨水調(diào)至堿性,用乙醚萃取3次(30,30,20mL),揮干乙醚,殘?jiān)勇确?0mL溶解,用5%鹽酸溶液提取2次(30,20mL),棄去氯仿液,酸液層加濃氨水調(diào)至pH9～10,用氯仿提取3次(30,20,20mL),棄去氨液,氯仿液蒸干,殘?jiān)訜o水乙醇溶解并定容至2mL。揮干有機(jī)溶劑后,加入0.1mol/mL鹽酸溶液2mL溶解,用0.45μm微孔濾膜過濾,即得。2.2測(cè)定條件23緩沖液:0.3mol/L磷酸緩沖液(pH=6.8);毛細(xì)管柱:內(nèi)徑50μm,有效長(zhǎng)度56cm;檢測(cè)波長(zhǎng):230nm;溫度:25℃;電壓:20kV;進(jìn)樣量:100mbar·s。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取烏頭堿對(duì)照品,加無水乙醇配成58μg/mL的對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液1,2,3,4,5μL進(jìn)樣,以峰面積為縱坐標(biāo),烏頭堿濃度為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:Y=1.00551X-2.26619,r=0.9998。烏頭堿濃度在58～290μg/mL呈良好的線性關(guān)系。2.4饅頭堿的最大限測(cè)定結(jié)果見表1和圖1。結(jié)果表明,隨著煎煮時(shí)間的增加,烏頭堿含量也隨之降低,經(jīng)換算,湯劑中烏頭堿含量明顯低于《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版一部烏頭堿限量規(guī)定(以1#樣品為例:157÷18=8.72μg/g<167μg/g,即小于0.016%)。由于目前各醫(yī)院調(diào)配處方所用附子一般均為炮制后的附片,毒性已較生品大為降低,經(jīng)先煎15～60min,再經(jīng)復(fù)方煎煮,烏頭堿含量已遠(yuǎn)低于安全限量,綜合考慮,認(rèn)為附子入湯劑以先煎30min為宜。3大黃研究3.1濃縮、定容液制備稱取溫脾湯2倍處方量的藥材,附子先煎30min后,再與其他藥味煎煮30min,大黃浸泡30min,分別于湯劑煎好前5,10,15,20,25min后下,藥液分別濃縮、定容至200mL,樣品編號(hào)為1#～5#。精密吸取30mL藥液分別加入濃鹽酸5mL,置水浴上加熱30min,立即冷卻,用乙醚萃取3次(30,30,20mL),乙醚液水浴蒸干,殘?jiān)勇确氯芙?定容至5mL,以0.45μm的微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液作為供試品溶液。3.2磷酸二氫鈉檢測(cè)緩沖液:0.05mol/L十二烷基硫酸鈉-0.03mol/L磷酸二氫鈉溶液(pH=10);檢測(cè)波長(zhǎng):254nm,溫度:25℃;進(jìn)樣量:40mbar·s。3.3對(duì)照品溶液的配制分別精密稱取大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、大黃酸對(duì)照品,配制成不同濃度的對(duì)照品溶液。按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定,以峰面積為縱坐標(biāo),對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程,結(jié)果見表2。3.4修正因子的測(cè)量以1mg/mL的對(duì)氨基苯磺酸溶液為內(nèi)標(biāo),與對(duì)照品溶液按1∶9比例混合,進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見表3。3.5結(jié)果測(cè)定結(jié)果見表4和圖2。可見,大黃后下以煎煮10min為宜,此時(shí)4種大黃游離蒽醌的含量均較高。4病料的制備及后下試驗(yàn)結(jié)果4.1附子屬烏頭類中藥,現(xiàn)代藥理研究證明,烏頭類中藥具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、強(qiáng)心、抗炎、抗腫瘤等作用,由于其主要活性成分烏頭堿為劇毒的雙酯型生物堿,而且治療量與中毒量接近,臨床上為保證用藥安全,常采用炮制、久煎等方法以降低其毒性,但隨著毒性降低,其療效也隨之減弱。4.2試驗(yàn)結(jié)果表明,附子先煎15～60min后,再經(jīng)復(fù)方煎煮,其烏頭堿含量已遠(yuǎn)低于《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版一部烏頭堿限量規(guī)定,日服湯劑中烏頭堿的總量也低于口服烏頭堿的中毒限量。綜合考慮,認(rèn)為附子以先煎30min為宜,能保證臨床用藥的安全有效。4.5內(nèi)標(biāo)物選擇對(duì)氨基苯磺酸,是由于其在水中的溶解度較大,且在254nm處有較大吸收,對(duì)各待測(cè)成分峰不產(chǎn)生干擾,重現(xiàn)性好。4.3比較了附子單煎與混煎對(duì)烏頭堿含量的影響,結(jié)果表明混煎液中烏頭堿含量明顯低于單煎液,說明在復(fù)方煎煮過程中有可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng),導(dǎo)致烏頭堿含量降低,從而為附子與干姜、甘草共煎可降低其毒性的理論提供了試驗(yàn)依