染鉛對(duì)大鼠脾臟nos活力和一氧化氮含量的影響及其與血鉛的關(guān)系

染鉛對(duì)大鼠脾臟nos活力和一氧化氮含量的影響及其與血鉛的關(guān)系

鉛是工業(yè)中接觸最多的化學(xué)毒性之一。由于鉛具有神經(jīng)毒性、造影劑毒性和腎毒性，因此已成為影響廣泛、嚴(yán)重的職業(yè)危害因素。據(jù)報(bào)道,職業(yè)性慢性中毒仍然以鉛為首位病因。Jaremin等研究發(fā)現(xiàn)職業(yè)性鉛暴露可引起外周血B淋巴細(xì)胞減少,免疫球蛋白水平降低,T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化受抑制,并影響某些細(xì)胞因子的產(chǎn)生。劉倩琦報(bào)道,亞急性低劑量鉛暴露可導(dǎo)致大鼠T淋巴細(xì)胞亞群分布異常,CD4明顯減少,CD4/CD8比例下降,TNF-α分泌異常;電鏡顯示,除最低劑量組外,其余鉛暴露組免疫細(xì)胞均發(fā)生不同程度的損傷,表現(xiàn)為線粒體腫脹,嵴斷裂,空泡化;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹,脫顆粒等不同程度的破壞。說明鉛暴露可損傷機(jī)體免疫功能和免疫器官。本研究以亞慢性鉛暴露動(dòng)物為模型,觀察鉛對(duì)大鼠脾臟組織中NOS、NO、SOD、MDA的影響,進(jìn)一步探討鉛脾臟毒性的可能機(jī)制。1材料和方法1.1紫外分光光度儀醋酸鉛為分析純(純度>99.5%)。Hepes為Sigma公司產(chǎn)品。勻漿器為江蘇寧波產(chǎn)電動(dòng)玻璃勻漿器(型號(hào)DY89-1);紫外分光光度儀為上海分析儀器總廠生產(chǎn)(型號(hào)UV-755B);電子天平為瑞典METTLERTOLEDO(型號(hào)AB104-S);低溫高速離心機(jī)為德國Hanau(型號(hào)D-37520)。石墨爐原子吸收分光光度儀為日本島津(型號(hào)6800-A)。NOS、NO、SOD、MDA試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。1.2分組、給藥及飲用水選用天津市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的2月齡Wistar大鼠90只,雌雄各半,體重(112.3±8.6)g。正式染毒前觀察1周。隨機(jī)分成5組,每組18只,分別為染毒7d組、14d組、30d組、60d組、90d組。再將每組大鼠隨機(jī)分成對(duì)照組、低劑量組、高劑量組,每組6只。用蒸餾水配制含醋酸鉛0,18.4,184.0mg/L(Pb2+含量為0、10和100mg/L)飲用水,分別供對(duì)照組、低劑量組、高劑量組自由飲用。染毒到指定天數(shù)后,處死動(dòng)物,測定全血鉛、脾臟NOS活力、NO含量、SOD活力、MDA含量。1.3指標(biāo)和方法的檢測1.3.1血液中的鉛測試染毒到指定天數(shù)后乙醚吸入麻醉,心臟取血。采用直接稀釋法,用日本島津6800-A型石墨爐原子吸收法測全血血鉛濃度。1.3.2組織勻漿的制備大鼠處死后,迅速剪開腹腔,剝離脾臟,稱重后按1∶9(W∶V)加入一定體積的4℃預(yù)冷的50mmol/LHepes(pH7.4)液,再用勻漿器在冰浴中勻漿,取以上10%的組織勻漿,在低溫高速離心機(jī)(4℃,10000g)離心30min,取上清液待測。1.3.3no濃度測定、sod活力測定NOS活力測定采用NOS催化L-Arg生成NO,NO與二價(jià)鐵配合物形成有色化合物法,在530nm波長處測定吸光度A。NO濃度測定采用硝酸還原酶法,在550nm波長處測定吸光度A。SOD活力采用亞硝酸鹽顯色法,在550nm波長測定吸光度。MDA含量測定采用硫代巴比妥(TBA)法,在532nm波長測定吸光度。1.4統(tǒng)計(jì)分析用SPSS8.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,經(jīng)方差分析、相關(guān)性分析及曲線擬合,結(jié)果以ˉx±s表示。2結(jié)果2.1不同劑量的鉛懸浮液在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血鉛濃度為相同數(shù)量染鉛組各時(shí)點(diǎn)血鉛濃度均顯著高于對(duì)照組(P<0.05),高劑量組血鉛水平所有時(shí)間點(diǎn)均顯著高于低劑量組(P<0.05),見表1。2.2各時(shí)間點(diǎn)及各劑量間的差異高劑量組大鼠脾臟NOS活力在7d時(shí)均較對(duì)照組和低劑量組低,差異有顯著性(P<0.05),90d時(shí)高劑量組較對(duì)照組和低劑量組高,差異有顯著性(P<0.05),低劑量組也較對(duì)照組高,差異有顯著性(P<0.05)。其余各時(shí)間點(diǎn)和各劑量之間差異無顯著性(P>0.05),見表2。經(jīng)方差分析,與對(duì)照組比較,*P<0.05;高劑量組與低劑量組比較,△P<0.05經(jīng)方差分析,與對(duì)照組比較,*P<0.05;高劑量組與低劑量組比較,△P<0.052.3大鼠肝臟no含量的檢測在60d、90d,高劑量組和低劑量組大鼠脾臟NO含量均較對(duì)照組低,差異有顯著性(P<0.05)。其余各時(shí)點(diǎn)各劑量組間差異均無顯著性(P>0.05),見表3。2.4低劑量染鉛對(duì)大鼠肝臟sod活力的影響高劑量染鉛組,14d、30d、60d、90d大鼠脾臟SOD活力均較對(duì)照組低,差異有顯著性(P<0.05)。低劑量染鉛組,30d、90d大鼠脾臟SOD活力較對(duì)照組低,差異有顯著性(P<0.05)。其余各時(shí)點(diǎn)、各劑量組同對(duì)照組比較,差異無顯著性(P>0.05),但都有降低趨勢,見表4。經(jīng)方差分析,與對(duì)照組比較,*P<0.05經(jīng)方差分析,與對(duì)照組比較,*P<0.05;高劑量組與低劑量組比較,△P<0.052.5各組大鼠肝臟mda含量比較高劑量染鉛組14d、16d、90d大鼠脾臟MDA含量均較對(duì)照組高,差異有顯著性(P<0.05),7d高劑量染鉛組大鼠脾臟MDA含量同對(duì)照組、低劑量組比,差異無顯著性(P>0.05),但有升高趨勢,60d高劑量染鉛組大鼠脾臟MDA含量較低劑量組低,差異有顯著性(P<0.05),90d高劑量染鉛組大鼠脾臟MDA含量較對(duì)低劑量組高,差異有顯著性(P<0.05);低劑量染鉛組7d、14d、30d、60d、90d大鼠脾臟MDA含量同對(duì)照組比,差異無顯著性(P>0.05),但各時(shí)點(diǎn)有升高的傾向,見表5。經(jīng)方差分析,與對(duì)照組比較,*P<0.05;高劑量組與低劑量組比較,△P<0.052.6血鉛與脾臟no含量及抗氧化酶活性的關(guān)系經(jīng)血鉛與脾臟NOS、NO、SOD、MDA之間進(jìn)行曲線擬合,血鉛與脾臟NOS之間無相關(guān)(r=0.091,P>0.05)。血鉛與脾臟NO含量之間呈倒S型劑量-效應(yīng)曲線(R2=0.167,P<0.05),見圖1。血鉛與脾臟SOD活力之間呈倒拋物線型劑量-效應(yīng)曲線(R2=0.291,P<0.01),見圖2。血鉛與脾臟MDA含量之間呈正拋物線型劑量-效應(yīng)曲線(R2=0.153,P<0.01),見圖3。3對(duì)肝臟nos活性的影響鉛中毒引起體內(nèi)的氧應(yīng)激反應(yīng)為研究鉛誘導(dǎo)的免疫抑制展現(xiàn)了廣闊的前景。Ercol等采用Fisher344大鼠飲水接觸2000ppm鉛1周后,觀察到血清氧化性損傷產(chǎn)物MDA在血清和肝臟中含量顯著升高,并且干擾巰基抗氧化物,表明鉛中毒引起的氧應(yīng)激反應(yīng)可導(dǎo)致免疫抑制。McMurry等通過測定鉛暴露鼠脾細(xì)胞對(duì)多克隆致突變物的增生反應(yīng),來評(píng)價(jià)鉛對(duì)介導(dǎo)的特異和非特異性細(xì)胞免疫力的影響,結(jié)果證明鉛對(duì)免疫功能的影響與鉛對(duì)抑制培養(yǎng)脾細(xì)胞的增生反應(yīng)有關(guān),接受100ppm鉛處理,cotton鼠脾質(zhì)量減輕,同時(shí),總白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、總脾細(xì)胞、血紅蛋白等對(duì)鉛接觸敏感。劉倩琦、Jaremin等亦有相關(guān)類似報(bào)道。本研究結(jié)果顯示,高劑量染鉛組在14d、30d、60d、90d,大鼠脾臟SOD活力均顯著低于對(duì)照組(P<0.05),低劑量染鉛組脾臟SOD活力30d、90d顯著低于對(duì)照組(P<0.05);高劑量染鉛組14d、60d、90d大鼠脾臟MDA含量均顯著高于對(duì)照組(P<0.05),而且,血鉛與脾臟SOD活力之間呈倒拋物線型劑量-效應(yīng)關(guān)系,血鉛與脾臟MDA含量之間呈正拋物線型劑量-效應(yīng)關(guān)系,表明鉛暴露對(duì)脾臟存在氧自由基反應(yīng)和氧化性損傷。本研究結(jié)果顯示,高劑量組大鼠脾臟NOS活力在7d時(shí)顯著低于對(duì)照組和低劑量組(P<0.05),90d時(shí)顯著高于對(duì)照組和低劑量組(P<0.05),低劑量組90d也顯著高于對(duì)照組(P<0.05);60d、90d高劑量組和低劑量組大鼠脾臟NO含量均顯著低于對(duì)照組(P<0.05),且血鉛與脾臟NO含量之間呈倒S型劑量-效應(yīng)關(guān)系,說明鉛可通過影響脾臟NO含量對(duì)脾臟產(chǎn)生毒作用。而染鉛晚期NO含量降低,可能是由于體內(nèi)存在著NO自由基(NO·)和超氧自由基之間相互反應(yīng),O-·2可以通過使NO轉(zhuǎn)變?yōu)镺ONO而削弱其生物效應(yīng)。由于染鉛可導(dǎo)致脾臟SOD活力降低,而SOD是O-·2清除劑,故