新藥肝、腎毒性動物試驗(yàn)中常檢測的蛋白質(zhì)指標(biāo)-蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類

蛋白質(zhì)的變性在某些理化因素作用下，蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)被破壞，引起蛋白質(zhì)理化性質(zhì)改變和生物活性喪失，這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的變性。一、何為蛋白質(zhì)的變性？二、致變因素

加熱紫外光攪拌強(qiáng)酸強(qiáng)堿1.高級結(jié)構(gòu)遭破壞,一級結(jié)構(gòu)和分子量不變。三、變性蛋白質(zhì)的特點(diǎn)

破壞不變變性2.生物功能喪失:蛋白質(zhì)的生物活性是指蛋白質(zhì)所具有的酶、激素、毒素、抗原與抗體、血紅蛋白的載氧能力等生物學(xué)功能。在變性時，這些生物功能喪失。三、變性蛋白質(zhì)的特點(diǎn)

3.易形成沉淀析出，結(jié)晶能力喪失。

4.分子形狀改變，肽鏈松散，易被酶消化。三、變性蛋白質(zhì)的特點(diǎn)

蛋白質(zhì)變性消毒疫苗血清等生物制品食物煮熟四、蛋白質(zhì)變性的應(yīng)用一：蛋白質(zhì)的兩性解離和等電點(diǎn)蛋白質(zhì)在小于等電點(diǎn)偏酸溶液中帶正電荷，在大于等電點(diǎn)偏堿溶液中帶負(fù)電荷，在等電點(diǎn)pH時為兩性離子。應(yīng)用：電泳：帶電顆粒在電場中移動的現(xiàn)象。分子大小不同、所帶凈電荷不同的蛋白質(zhì)遷移率不同，在電泳時可以分開。1、醋酸纖維薄膜電泳：基本知識點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類2、凝膠電泳：瓊脂糖凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳基本知識點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類3、等電聚焦電泳：利用蛋白質(zhì)在其等電點(diǎn)時，凈電荷為零，在電場中不移動的原理?；局R點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)：蛋白質(zhì)的分子量介于1-100nm之間，是膠體。蛋白質(zhì)形成穩(wěn)定的膠體溶液原因：

1）表面形成水膜（水化層）

2）帶相同電荷（電荷層）具有布郎運(yùn)動、丁道爾現(xiàn)象、電泳現(xiàn)象，不能透過半透膜，具有吸附能力。應(yīng)用：尿常規(guī)檢測?；局R點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類三：蛋白質(zhì)的變性1、概念：在某些理化因素作用下，蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)被破壞，引起蛋白質(zhì)理化性質(zhì)改變和生物活性喪失。這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的變性。2、變性的蛋白質(zhì)的特點(diǎn)：一級結(jié)構(gòu)和分子量不變，高級結(jié)構(gòu)遭破壞。生物功能喪失(疫苗失活)基本知識點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類易形成沉淀析出，結(jié)晶能力喪失，分子形狀改變，肽鏈松散，易被酶消化。3、引起變性的主要因素是熱、紫外光、激烈的攪拌以及強(qiáng)酸和強(qiáng)堿等。4、變性的應(yīng)用：消毒疫苗血清等生物制品食物煮熟基本知識點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類四、蛋白質(zhì)的沉淀：1、鹽析：加高濃度中性鹽（NH4)2SO4）使蛋白質(zhì)沉淀析出的現(xiàn)象。應(yīng)用：分離SOD。2、有機(jī)溶劑沉淀：乙醇、甲醇、丙酮等。應(yīng)用：乙醇消毒、濕巾3、重金屬鹽沉淀：銅、汞、鉛、銀等。應(yīng)用：重金屬中毒?；局R點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類4、生物堿沉淀：單寧酸、苦味酸、三氯乙酸能沉淀蛋白質(zhì)。應(yīng)用：發(fā)芽的土豆中毒。5、加熱沉淀：煮雞蛋五、蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)。1、雙縮脲反應(yīng)：在強(qiáng)堿性溶液中，蛋白質(zhì)和CuSO4反應(yīng)，生成紫紅色化合物，這個反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。在堿性條件下，生成的顏色深淺與蛋白質(zhì)的濃渡成正比，將樣品同標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)同時試驗(yàn)，并于540--560nm波長下側(cè)測吸光度值，通過公式可算出蛋白質(zhì)的濃度?；局R點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類2、米倫反應(yīng)：3、黃色反應(yīng)：4、坂口反應(yīng)：以α萘酚和次氯酸處理樣品后，精氨酸出現(xiàn)的紅色反應(yīng)：基本知識點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類含有酪氨酸的物質(zhì)或其他酚類化合物樣品與米倫試劑（硝酸汞和亞硝酸）一起加熱出現(xiàn)紅色反應(yīng)的現(xiàn)象。用于酪氨酸以及含有酪氨酸的蛋白質(zhì)定性測定。5、酚試劑反應(yīng)：堿性銅試劑與蛋白質(zhì)產(chǎn)生雙縮脲反應(yīng)，被作用的蛋白質(zhì)中的酚基（酪氨酸），在堿性條件下很易將磷鉬酸和磷鎢酸還原為藍(lán)色的鉬藍(lán)和鎢藍(lán)，所生成藍(lán)色的深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比，因此，在650nm或660nm波長下測定吸光值，即可測定蛋白質(zhì)含量。6、茚三酮反應(yīng):基本知識點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類根據(jù)蛋白質(zhì)分子外形的對稱程度可將其分為兩類。

1、球狀蛋白質(zhì)球狀蛋白質(zhì):溶解度較好，能結(jié)晶。大多數(shù)蛋白質(zhì)屬于球狀蛋白質(zhì)，如血紅蛋白、肌紅蛋白、酶、抗體等?；局R點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類2、纖維蛋白質(zhì)纖維蛋白質(zhì):類似于細(xì)棒狀或纖維狀，大多數(shù)不溶于水，如膠原蛋白、角蛋白等。有些則溶于水，如血纖維蛋白原等基本知識點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類二、根據(jù)化學(xué)組成分類根據(jù)化學(xué)組成可將蛋白質(zhì)分為兩類。（一）簡單蛋白質(zhì)簡單蛋白質(zhì):分子中只含有氨基酸，沒有其它成分。1、清蛋白

清蛋白又稱白蛋白，分子量較小，溶于水、中性鹽類、稀酸和稀堿，可被飽和硫酸銨沉淀。清蛋白在自然界分布廣泛，如小麥種子中的麥清蛋白、血液中的血清清蛋白和雞蛋中的卵清蛋白等都屬于清蛋白?；局R點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類2、球蛋白球蛋白:一般不溶于水而溶于稀鹽溶液、稀酸或稀堿溶液，可被半飽和的硫酸銨沉淀。大豆種子中的豆球蛋白、血液中的血清球蛋白、肌肉中的肌球蛋白以及免疫球蛋白都屬于這一類?；局R點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類3、組蛋白組蛋白:可溶于水或稀酸。組蛋白是染色體的結(jié)構(gòu)蛋白，含有豐富的精氨酸和賴氨酸，所以是一類堿性蛋白質(zhì)。預(yù)測前列腺癌和生物鐘的調(diào)控.基本知識點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類4、(魚)精蛋白:把魚的精子的頭部分破碎離出來的一種堿性蛋白，具有一定生物活性。從技術(shù)方面來講，只能從魚的精子中提取，不能化學(xué)合成，就限制了產(chǎn)量。具有抗凝血作用。自2011年7月底開始，南京、武漢、南通等地魚精蛋白紛紛告急，很多心臟病手術(shù)被迫停止。廣州、上海等大城市的主要醫(yī)院，暫時還可供應(yīng)現(xiàn)有的心外科手術(shù)用量?；局R點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類5、醇溶蛋白醇溶蛋白:不溶于水和鹽溶液，溶于70%～80%的乙醇，多存在于禾本科作物的種子中，如玉米醇溶蛋白、小麥醇溶蛋白。6、谷蛋白類谷蛋白:不溶于水、稀鹽溶液，溶于稀酸和稀堿。谷蛋白存在于植物種子中，如水稻種子中的稻谷蛋白和小麥種子中的麥谷蛋白等?；局R點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類7、硬蛋白類硬蛋白（scleroproteins）不溶于水、鹽溶液、稀酸、稀堿，主要存在于皮膚、毛發(fā)、指甲中，起支持和保護(hù)作用，如角蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白、絲蛋白等。基本知識點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類（二）結(jié)合蛋白質(zhì)（conjugatedproteins）結(jié)合蛋白質(zhì)（conjugatedproteins）是由蛋白質(zhì)部分和非蛋白質(zhì)部分結(jié)合而成。主要的結(jié)合蛋白有六種：1、核蛋白非蛋白部分為核酸稱核蛋白（nucleoprotein）。核蛋白分布廣泛，存在于所有生物細(xì)胞中。基本知識點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類2、糖蛋白非蛋白部分為糖類稱糖蛋白（glycoprotein）。糖蛋白廣泛存在于動物、植物、真菌、細(xì)菌及病毒中。基本知識點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類3、脂蛋白蛋白質(zhì)和脂類結(jié)合構(gòu)成脂蛋白（lipoprotein）。在脂蛋白中，脂類和蛋白質(zhì)之間以非共價鍵結(jié)合。脂蛋白廣泛分布于細(xì)胞和血液中。血漿脂蛋白分為高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、極低密度脂蛋白（VLDL）及乳糜微粒（CM）。脂蛋白是血脂在血液中存在、轉(zhuǎn)運(yùn)及代謝的形式，檢查脂蛋白不僅可以了解血脂的質(zhì)與量，也能對其生物功能進(jìn)行分析。基本知識點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類1.乳糜微粒（CM）是最大的脂蛋白，主要功能是運(yùn)輸外源性甘油三酯。正?？崭?2h后不應(yīng)該有CM?；局R點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類2.高密度脂蛋白（HDL）是血清中顆粒密度最大的一組脂蛋白。主要作用是將肝臟以外組織中的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行分解代謝。HDL被認(rèn)為是抗動脈粥樣硬化因子。，是冠心病的保護(hù)因子。俗稱“血管清道夫”。參考值1.03-2.07mmol/L3.低密度脂蛋白（LDL）是富含膽固醇的脂蛋白，主要作用是將膽固醇運(yùn)送到外周血液。是動脈粥樣硬化的危險因素之一，被認(rèn)為是致動脈粥樣硬化的因子。參考值≤3.12mmol/L基本知識點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類4、極低密度脂蛋白VLDL是運(yùn)輸內(nèi)源性甘油三酯的主要形式。極低密度脂蛋白增高主要原因是甘油三酯增高，常伴有高密度脂蛋白—膽固醇降低和糖耐量降低，血尿酸過多等;還可見于酗酒、胰腺炎、肥胖、糖尿病、低甲狀腺素癥、腎病綜合癥、尿毒癥及禁食、妊娠等?；局R點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類4、色蛋白蛋白質(zhì)和某些色素物質(zhì)結(jié)合形成色蛋白。非蛋白質(zhì)部分多為血紅素，所以又稱為血紅素蛋白?；局R點(diǎn)三：蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分類5、金屬