雞細胞免疫在雞艾美耳球蟲病中的作用

雞細胞免疫在雞艾美耳球蟲病中的作用

1材料和方法1.1試驗材料1.1.1民法醫(yī)學室---純e.tena卵囊（山西分離植物）由山西農業(yè)大學獸醫(yī)病理室提供。通過健康小公雞傳代,按常規(guī)分離、純化卵囊方法進行分離、純化,孢子化后置4℃?zhèn)溆谩?.1.2自然生物飼養(yǎng)海蘭白產蛋母雞和公雛雞,來自平遙龍海種雞場;公雛雞出殼后運回育雛室,給予連續(xù)的人工光照和標準日糧(不含抗球蟲藥),飼養(yǎng)至10日齡時用于本試驗。產蛋母雞在無球蟲環(huán)境中照常飼養(yǎng),待用。1.2免疫組化檢測igg生成細胞數E.tenella感染雞IgG生成細胞和血清IgG動態(tài)變化規(guī)律測定:將150只公雛雞于第10日齡時隨時分為T組和C組,每組50只雞,T組雞口服感染E.tenella成熟卵囊8×104個/只,在感染后第2、3、4、6、7、9、12、16、18、20、22天每次捕殺T組和C組雞各5只,取材,檢測各免疫器官及盲腸中的IgG生成細胞數的動態(tài)變化。于第2、3、4、6、7、8、10、12、16、18、20、22、25、27、30天T組和C組各取5只雞,心臟采血,檢測循環(huán)血液中特異性IgG含量的動態(tài)變化。2試驗結果2.1獨立測試結果2.1.1特異性試驗以滅菌生理鹽水分別代替卵囊抗原、被檢血清和酶標抗體,進行DOT-ELISA檢測,結果表明均為陰性。2.1.2關于可溶性卵囊抗體和酶標抗體的最佳工作條件的確定通過試驗比較兩者的最佳工作條件分別為1︰40和1︰6000。2.1.3阻斷試驗以1∶10、1∶40稀釋的正常雞血清均能完全阻斷,結果為陰性;1∶80、1∶160可部分阻斷,1∶320不能阻斷,結果為陽性。2.1.4特異性igg檢測雛雞初次感染E.tenella后,第6天血清中開始檢測出特異性IgG,隨后抗體水平逐漸升高,于第18天達到峰值,持續(xù)4天后,開始下降,第30天時降至感染后第7天的水平。2.2igg是由球蟲病雞產生的2.2.1酶標準承擔劑的最佳工作濃度的確定2.2.2igg生成細胞陽性細胞主要位于淋巴濾泡和彌散淋巴組織,特征為細胞核為淡藍色、細胞漿為棕黃色。T組IgG生成細胞從第3天開始增加,第12天達到峰值。第9、12、16、18、20天與C組相比差異極顯著(P<0.01),第22天與C組差異顯著(P<0.05)。2.2.3攻毒后兩組峰值胸腺中陽性細胞數量很少,主要分布于髓質。在攻毒后的整個過程中,有2個峰值,分別出現在感染后第4天和第18天,整體變化起伏不定,無明顯規(guī)律。2.2.4特異性試驗的結果以滅菌生理鹽水代替酶標抗體,染色結果為陰性。2.2.5igg生成細胞陽性細胞主要位于淋巴濾泡和彌散淋巴組織,特征為細胞核為淡藍色,細胞漿為棕黃色。T組IgG生成細胞從第3天開始增加,第12天達到峰值。第9、12、16、18、20天與C組相比差異極顯著(P<0.01),第22天與C組差異顯著(P<0.05)。2.2.6脾索內igg的生成脾臟中的陽性細胞主要分布于白髓的淋巴小結、動脈周圍淋巴鞘,紅髓中的脾索內也含有少量的陽性細胞。IgG生成細胞在感染后第3天開始增加,第12天達到峰值。從第4天開始直到第20天差異極顯著(P<0.01),第22天差異顯著(P<0.05)。2.2.7igg生成細胞的動態(tài)盲腸扁桃體中的陽性細胞主要集中于淋巴濾泡和彌散性淋巴組織。IgG生成細胞在攻毒后的第2天即有顯著增加,峰值在第9天,然后逐漸下降,于第18天降至對照組水平,在第4、6、7、9、12天差異極顯著(P<0.01)。2.2.8分布密度分布法氏囊中的陽性細胞無論皮質、髓質均分布較多,尤其以髓質部分分布密集。IgG生成細胞從感染后第3天開始即顯著增加,差異顯著(P<0.05),于第6天開始差異極顯著(P<0.01),并一直持續(xù)到第22天,峰值位于第16天。3雞體igg生成細胞的動態(tài)變化Dot-ELISA具有敏感性高、特異性強、被檢樣品用量少、不需特殊儀器、操作簡便易行、結果便于長期保存等特點。因此,該試驗方法自問世以來,不斷應用于抗原抗體的檢測。但在檢測雞球蟲感染雞血清中的特異性抗體和在卵黃中檢測抗球蟲特異性抗體方面,尚未見有報道。本試驗利用孢子化卵囊作為抗原,感染球蟲雞血清或卵黃抗體為一級抗體,酶標兔抗雞IgG為二級抗體,建立了Dot-ELISA,效果良好,適合于球蟲病雞血清和卵黃抗體水平的檢測。試驗研究結果表明:雛雞初次感染E.tenella后于第6天即可在循環(huán)血液中檢測出特異性IgG,隨后抗體水平逐漸上升,在第18天達到峰值,第30天時下降至感染后第7天的水平。這個結果與Mockett(1986)、Hasbullvh(1992)等的報道基本一致。揭示了雛雞感染E.tenella后,雞體IgG生成細胞的動態(tài)變化規(guī)律為:主要免疫器官胸腺、法氏囊、脾臟、盲腸扁桃體和盲腸局部的IgG生成細胞于第2天和第3天開始增殖,并分泌特異性IgG,此時,球蟲子孢子已穿過腸上皮細胞,進入腸腺上皮細胞內進行發(fā)育,并進入第一代裂殖生殖階段。此期,子孢子和第一代裂殖子均可刺激細胞產生和分泌IgG,IgG生成細胞數量于攻毒后第9天至第16天先后達到峰值,然后逐漸下降,盲腸扁桃體中的IgG生成細胞在第18天降至對照組水平,盲腸、脾臟和法氏囊中的IgG生成細胞數在第22天仍高于對照組,且差異顯著。成熟卵囊被雞吞食后,在肌胃中受機構作用囊壁破裂,釋放出4個孢子囊。孢子囊在十二指腸和小腸中部受膽汁和酶的作用,子孢子逸出,子孢子一逸出,就侵入宿主的腸絨毛部黏膜上皮細胞,然后經巨噬細胞和上皮淋巴細胞進行轉移,再進一步發(fā)育。在上述過程中,巨噬細胞和上皮間淋巴細胞給輔助性T細胞(TH)提供抗原信息,TH接受抗原信息后,通過釋放一些可溶性因子作用于B細胞,使處于休眠狀