EB病毒相關(guān)性傳染性單核細(xì)胞增多癥兒童T淋巴細(xì)胞亞群臨床意義分析

EB病毒相關(guān)性傳染性單核細(xì)胞增多癥兒童T淋巴細(xì)胞亞群臨床意義分析摘要目的：總結(jié)保定兒童醫(yī)院感染內(nèi)科EB病毒相關(guān)性傳染性單核細(xì)胞增多癥（infectiousmononucleosis,IM）住院兒童急性期T淋巴細(xì)胞亞群的變化，提高對(duì)傳單兒童TB淋巴細(xì)胞亞群的認(rèn)識(shí)，為臨床診斷IM提供輔助診斷依據(jù)。方法：選擇保定市兒童醫(yī)院感染內(nèi)科2018年4月—2018年6月住院的36例IM兒童急性期T淋巴細(xì)胞亞群資料，與40例對(duì)照組相比較，對(duì)比其T淋巴細(xì)胞亞群變化。并探討IM兒童流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群與手工制片顯微鏡觀察檢測(cè)異型淋巴細(xì)胞的靈敏度。結(jié)果：IM組較對(duì)照組患兒T淋巴細(xì)胞亞群CD8+比例明顯升高，CD4+、CD4+/CD8+比例明顯下降。IM組T淋巴細(xì)胞亞群的靈敏度明顯高于異型淋巴細(xì)胞（異淋）。結(jié)論：IM兒童可引起T細(xì)胞免疫功能異常，比末梢血異型淋巴細(xì)胞靈敏度高，可以協(xié)助兒科臨床醫(yī)生診斷IM。關(guān)鍵詞：T淋巴細(xì)胞亞群；異型淋巴細(xì)胞；EB病毒相關(guān)性傳染性單核細(xì)胞增多癥ClinicalsignificanceofTlymphocytesubsetsininfectiousmononucleosisinchildrenKeywords：Tlymphocytesubsets；atypicallymphocyte；infectiousmononucleosisEB病毒相關(guān)性傳染性單核細(xì)胞增多癥（infectiousmononucleosis,IM）是兒科常見病，多發(fā)病。典型表現(xiàn)為臨床“三聯(lián)癥”：發(fā)熱、咽峽炎、頸部淋巴結(jié)腫大?？沙霈F(xiàn)肝、脾、心肌、肺、腎、中樞神經(jīng)等多臟器多系統(tǒng)受累，病情變化多樣、輕重相差懸殊，尤其在中國不典型病例多、幼兒期病例多，給診斷造成一定困難。EB病毒（EBV）作為一種免疫啟動(dòng)因子，主要感染B細(xì)胞，繼之引起T細(xì)胞的免疫反應(yīng)[1]，故IM與細(xì)胞免疫功能密切相關(guān)。本研究回顧性分析保定市兒童醫(yī)院感染內(nèi)科2018年住院兒童共36例兒童的T淋巴細(xì)胞亞群的變化規(guī)律，并與異淋靈敏度相比較，目的以協(xié)助臨床診斷。材料與方法1資料與方法1.1研究對(duì)象對(duì)象來源：選自保定市兒童醫(yī)院感染內(nèi)科2018年4月—2018年6月住院的36例IM兒童T淋巴細(xì)胞亞群資料，并搜集患兒末梢血檢測(cè)異型淋巴細(xì)胞資料，對(duì)照組40例為健康體檢的正常兒童，患兒診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》第8版提出的IM的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。排除標(biāo)準(zhǔn)：篩選排除傳單診斷依據(jù)不充足的兒童，篩選排除并存細(xì)菌感染、支原體感染、噬血細(xì)胞綜合征、免疫缺陷的傳單兒童。1.2方法由醫(yī)護(hù)人員無菌操作下抽取急性期患兒靜脈血2ml（不許溶血/血凝），由專人立即送檢檢驗(yàn)科用流式細(xì)胞儀檢測(cè)TB淋巴細(xì)胞亞群。并同時(shí)采集末梢血，由專業(yè)檢驗(yàn)技師進(jìn)行涂片，手工分類計(jì)數(shù)異型淋巴細(xì)胞百分比。對(duì)照組同樣進(jìn)行上述處理。回顧性分析36例IM兒童急性期T淋巴細(xì)胞亞群的變化，與40例對(duì)照組相比較，對(duì)比T淋巴細(xì)胞亞群變化規(guī)律。并探討IM兒童，流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群與末梢血檢測(cè)異型淋巴細(xì)胞的靈敏度。1.3TB淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)應(yīng)用的TB淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)儀器為美國BECKMANCOULTER公司提供的CVTOMICSFS500型流式細(xì)胞儀。TB淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)8個(gè)項(xiàng)目：淋巴細(xì)胞占有核細(xì)胞（CD45+）12.5(%)，T淋巴細(xì)胞(CD3+)%，輔助/誘導(dǎo)性T細(xì)胞(CD3+CD4+)%，抑制/細(xì)胞毒T細(xì)胞(CD3+CD8+)%，CD4+/CD8+，CD3+CD4-CD8-，B淋巴細(xì)胞(CD3-CD19+)%，NK細(xì)胞(CD3-CD16+CD56+)%；其中T細(xì)胞亞群的3個(gè)項(xiàng)目變化最明顯，以此T細(xì)胞亞群的3個(gè)項(xiàng)目為研究項(xiàng)目：輔助/誘導(dǎo)性T細(xì)胞(CD3+CD4+)%（CD4+）；抑制/細(xì)胞毒T細(xì)胞(CD3+CD8+)%（CD8+）；CD4+/CD8+比值。1.4末梢血異型淋巴細(xì)胞檢測(cè)：專業(yè)檢驗(yàn)技師進(jìn)行涂片，手工制片、染色、顯微鏡觀察檢測(cè)異型淋巴細(xì)胞百分比，以>10%為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和構(gòu)成比表示，組間差異比較采用2檢驗(yàn)；計(jì)量資料符合正態(tài)分布數(shù)據(jù)檢測(cè)結(jié)果求出均值±標(biāo)準(zhǔn)差，組間比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)量資料不符合正態(tài)分布數(shù)據(jù)檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果用中位數(shù)表示，組間比較采用Mann-WhitneyY檢驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果P<0.05為差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05無差異性,不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1結(jié)果1.1發(fā)病年齡與性別IM組兒童共36例，其中男27例，女9例，男女比為3：1，年齡從1歲3月～9歲不等，中位年齡4.0歲。對(duì)照組40例，其中男25例，女15例，男女比為1.67：1，中位數(shù)年齡3.0歲；從46天～11歲不等。兩組性別經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。具有可比性。（2=1.37，P=0.242，P>0.05）兩組年齡經(jīng)正態(tài)檢驗(yàn)不符合正態(tài)分布，故經(jīng)Mann-WhitneyY檢驗(yàn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-1.315，P=0.188，P>0.05），具有可比性。1.2IM組與對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群水平比較：對(duì)急性期IM組與對(duì)照組兩組CD4+水平比較，符合正態(tài)分布，急性期IM組CD4+水平（17.97±7.69）%明顯低于對(duì)照組（35.61±8.09）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（T=-9.717，P=0.000，P<0.05）。對(duì)急性期IM組與對(duì)照組兩組CD8+水平比較，不符合正態(tài)分布，故經(jīng)Mann-WhitneyY檢驗(yàn)（Z=-7.314，P=0.000，P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)急性期IM組與對(duì)照組兩組CD4+/CD8+比值水平比較，不符合正態(tài)分布，故經(jīng)Mann-WhitneyY檢驗(yàn)（Z=-7.237，P=0.000，P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。由此上述內(nèi)容可見，CD4+、CD4+/CD8+比值明顯低于對(duì)照組（P均<0.05），CD8+明顯高于對(duì)照組（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表1IM組CD4+與對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果（%）組別NCD4+IM組3617.97±7.69對(duì)照組4035.61±8.09t值-9.717P值<0.05注：CD4+兩組比較顯示：T=-9.717，P=0.000，P<0.05，兩組數(shù)據(jù)有差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表2IM組CD8+、CD4+/CD8+與對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果（%）指標(biāo)組別N秩均值秩和ZPCD8+IM組3658.032089.00-7.3140.000對(duì)照組4020.93837.00CD4+/CD8+IM組3619.25693.00-7.2370.000對(duì)照組4055.832233.00注：CD8+兩組比較顯示：T=-7.314，P=0.000，P<0.05，兩組數(shù)據(jù)有差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CD4+/CD8+兩組比較顯示：T=-7.237，P=0.000，P<0.05，兩組數(shù)據(jù)有差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1.3IM兒童的T淋巴細(xì)胞亞群變化與末梢血異型淋巴細(xì)胞的陽性率。36例IM患兒中T淋巴細(xì)胞亞群存在圖1所述變化規(guī)律者33例占91.67%。末梢血異型淋巴細(xì)胞>10%者21例占58.33%，對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)異型淋巴細(xì)胞>10%者。將上述IM組T細(xì)胞亞群與末梢血異型淋巴細(xì)胞靈敏度（組內(nèi)自身比較）進(jìn)行卡方檢驗(yàn)顯示：2=10.667，P=0.001<0.05，IM病人在T淋巴細(xì)胞亞群和末梢血異型淋巴細(xì)胞之間靈敏度有差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。討論IM主要與皰疹病毒群的EB病毒（EBV）原發(fā)感染有關(guān)，我國是EBV感染高流行國家[2]，無癥狀排毒者為感染源。EB病毒很不穩(wěn)定，外界環(huán)境中從未發(fā)現(xiàn)該病毒存在[3]。唾液傳播為主要途徑，在兒科感染中具有普遍性，感染后終生潛伏于體內(nèi)，不能被機(jī)體免疫系統(tǒng)徹底清除，所以被稱為“無處不在的成功病毒”。兒童對(duì)EBV易感，可出現(xiàn)多臟器多系統(tǒng)受累，并與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，如兒童急性淋巴細(xì)胞性白血病、淋巴瘤等。嚴(yán)重威脅兒童健康。從發(fā)病機(jī)制上講，EBV多種并發(fā)癥的發(fā)生與人體細(xì)胞免疫異常有著非常密切關(guān)系。本研究以符合IM診斷標(biāo)準(zhǔn)者36例為研究對(duì)象，分析IM的T淋巴細(xì)胞亞群的變化規(guī)律，并與末梢血涂片的異型淋巴細(xì)胞進(jìn)行比較分析。以協(xié)助臨床早期診斷，早期治療。減少并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。國外資料顯示，IM的發(fā)病年齡多數(shù)在青少年及年輕成人，而我國與之不同，發(fā)病高峰年齡為4-6歲[4]，本研究對(duì)象：36例IM病人中位數(shù)年齡為4.0歲，位于我國發(fā)病年齡特點(diǎn)正常低值。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)病年齡低于國外原因是此年齡段兒童免疫功能相對(duì)較低有關(guān)。另外，4-6歲年齡兒童常居于幼托機(jī)構(gòu)及家庭，經(jīng)唾液傳播發(fā)病可能性大[5，6]。經(jīng)過對(duì)IM組和對(duì)照組的T淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CD4+、CD4+/CD8+較對(duì)照組下降，CD8+上升，T淋巴細(xì)胞亞群是反應(yīng)T淋巴細(xì)胞免疫功能的一組指標(biāo)。CD4+、CD8+的改變及其比值降低說明IM患兒存在T細(xì)胞免疫功能過度抑制。探究其原因，病毒入侵口咽部上皮細(xì)胞，再入血刺激B淋巴細(xì)胞增殖，表達(dá)病毒特異性抗原[7]，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答反應(yīng)，所以臨床抽血檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)EB病毒抗體陽性、EB病毒載量增高。繼而活化T細(xì)胞和NK細(xì)胞。T細(xì)胞活化后出現(xiàn)輔助性T淋巴細(xì)胞（CD4+）被消耗、抑制性/殺傷性T淋巴細(xì)胞（CD8+）大量增殖以抑制B細(xì)胞增殖直至清除B細(xì)胞。所以臨床流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)CD4+、CD4+/CD8+下降，CD8+上升表現(xiàn)。CD8+強(qiáng)大的細(xì)胞毒作用同時(shí)釋放過量細(xì)胞因子導(dǎo)致IM患兒出現(xiàn)淋巴結(jié)腫大、肝脾腫大等單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)急性增生性臨床表現(xiàn)[8]。如果T細(xì)胞功能低下甚至缺陷時(shí)，受EB病毒感染的B細(xì)胞不能被清除，故而會(huì)轉(zhuǎn)成慢性活動(dòng)性EB病毒感染甚至出現(xiàn)巨噬細(xì)胞過度活化轉(zhuǎn)化為噬血細(xì)胞、B細(xì)胞轉(zhuǎn)化為惡性腫瘤細(xì)胞。所以T細(xì)胞亞群在IM發(fā)病過程中起到重要作用，對(duì)于IM疾病演變及轉(zhuǎn)歸都有臨床意義。IM組：T淋巴細(xì)胞亞群變化與末梢血涂片查找異型淋巴細(xì)胞結(jié)果相比較，經(jīng)卡方檢驗(yàn)，T淋巴細(xì)胞亞群變化比末梢血異型淋巴細(xì)胞變化有意義。有研究認(rèn)為，末梢血異型淋巴細(xì)胞多數(shù)是細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CD8+）[9，10]，CD8+是T細(xì)胞表面的一種標(biāo)記物，是T細(xì)胞的免疫表型。研究它的變化規(guī)律可以彌補(bǔ)末梢血靈敏度低和形態(tài)學(xué)上的不足，彌補(bǔ)檢驗(yàn)員對(duì)異型淋巴細(xì)胞識(shí)別的熟練度的主觀差異，使得對(duì)異型淋巴細(xì)胞的識(shí)別變得標(biāo)準(zhǔn)化。所以在中國發(fā)病年齡段偏小、臨床非特異性表現(xiàn)為主、臨檢證據(jù)不足時(shí)，行T細(xì)胞亞群檢測(cè)可協(xié)助IM診斷。綜上所述，EB病毒相關(guān)性傳染性單核細(xì)胞增多癥兒童TB淋巴細(xì)胞亞群的變化是有規(guī)律的，在我院檢測(cè)的T淋巴細(xì)胞亞群的3個(gè)項(xiàng)目中，與具有相關(guān)性，即CD4+下降，CD8+上升，CD4+/CD8+降低。T淋巴細(xì)胞亞群比末梢血查異型淋巴細(xì)胞靈敏度高，可作為診斷IM的依據(jù)，但特異性低，需要結(jié)合臨床、EBV抗體和PCR病毒載量檢測(cè)綜合指標(biāo)進(jìn)行診斷。本組數(shù)據(jù)樣本量較小，今后可進(jìn)行大樣本多中心結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)更有意義。參考文獻(xiàn)江載芳,申坤玲,沈穎等《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2015,916.高立偉.兒童EB病毒相關(guān)性傳染性單核細(xì)胞增多癥[J].國際兒科學(xué)雜志,2010,37(5):481-484.申昆玲.兒內(nèi)科疾病臨床診療思維[M].人民衛(wèi)生出版社,2009.155.CengizAB,Cultu-KantarogluO,SecmeerG,etal.InfectiousmonlnucleosisinTurkishchildren[J].TurkJPediatr,2010,52(3):245-254.GaoLW,XieZD,LiuYY,etal.EpidemiologicandclinicalcharacteristicsofinfectionsmononucleosisassociatedwithEpstain-BarrnirusinfectioninchildreninBeijing,黃穗，陳福雄，陳德輝，等，兒童EB病毒感染及傳染性單核細(xì)胞增多癥臨床特點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)室檢查分析[J].中國實(shí)用兒科雜志，2013,28(3):200-203.徐斌,周劍峰.EB病毒相關(guān)淋巴增殖性疾病的發(fā)病機(jī)制與診斷治療[J].臨床血液學(xué)雜志,2014(6):936-940.Hadino