康美膚燒傷膏的抗真菌作用研究

康美膚燒傷膏的抗真菌作用研究

燒傷傷口是燒灼感和燒傷感染中明顯而重要的病原體。燒傷后傷口和全身感染是患者死亡的主要原因?？刂聘腥臼菬齻委熤蟹浅Ｖ匾沫h(huán)節(jié)。局部用藥仍是燒、燙傷治療中控制感染的重要手段?？得滥w燒傷膏是根據(jù)閩南名醫(yī)黃金鋼驗(yàn)方,由福建地產(chǎn)藥材九龍?zhí)佟⒔鹁€蓮、冰片、蜂蠟、麻油等組成,臨床上主治各種Ⅱ度燒傷。本實(shí)驗(yàn)研究用體外抑菌試驗(yàn)和大鼠感染性Ⅱ度燙傷創(chuàng)面的動(dòng)物模型,觀察康美膚燒傷膏防治感染的功效。1材料和方法1.1材料表面1.1.1銅綠假單胞菌回復(fù)突變試驗(yàn)質(zhì)控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853。其它實(shí)驗(yàn)菌株從臨床分離所得,由福建醫(yī)科大學(xué)微生物教研室保存并提供。所有操作均按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)定》。1.1.2培養(yǎng)基肉湯瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基均經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30min備用,其中液體培養(yǎng)基不加瓊脂。1.1.3福建東南角SD大鼠,體重180~220g,50只,由福建醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供。合格證號:SGXK(閩2004-0002號),分籠飼養(yǎng),給予統(tǒng)一飼料。1.1.4試驗(yàn)藥物京萬紅燒傷膏由天津達(dá)仁堂藥廠生產(chǎn)(批號:203417);康美膚燒傷膏(自制,定容濃度為300g/L,放置4℃冰箱保存?zhèn)溆?。1.2方法1.2.1馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的制備最小抑菌濃度的測定采用試管兩倍稀釋法。取無菌試管10只,于每一試管中加入液體培養(yǎng)基3ml,再于第1管加入濃度為300g/L的康美膚燒傷膏3ml混合均勻后,取3ml加入第2管,依次類推,至第8管吸出3ml滴入營養(yǎng)瓊脂平皿上,供無菌檢查。8只試管中的藥物質(zhì)量濃度為250、125、62.5、31.25、15.625、7.80、3.90、1.90g/L,然后于1~8管加入稀釋好的菌液200μl;第9管為培養(yǎng)物對照,第10管為培養(yǎng)基對照。在37℃培養(yǎng)18~24h,當(dāng)對照物混濁,對照培養(yǎng)基不混濁,以不發(fā)生混濁變化的最小濃度為該藥的最小抑菌濃度。真菌培養(yǎng)基選用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基,方法同上,在25~28℃培養(yǎng)36h。相同過程重復(fù)3次。1.2.2不同方法所含細(xì)菌菌落數(shù)測定50只體重180~220g大鼠于實(shí)驗(yàn)前24h,用硫化鈉脫毛,面積約30cm2,用戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔麻醉,浸入100℃水浴槽孔(面積約30cm2)內(nèi)持續(xù)燙15s,造成約10%Ⅱ度燙傷創(chuàng)面。致傷后立即腹腔注射5%葡萄糖鹽水復(fù)蘇。傷后5min,用苦味酸劃出創(chuàng)面邊界,計(jì)算面積,并取經(jīng)培養(yǎng)制備濃度為1.5×107細(xì)菌/ml金黃色葡萄球菌0.4ml,均勻涂布于創(chuàng)面上。將50只大鼠隨機(jī)分為5組,即京萬紅燒傷膏組,康美膚燒傷膏0.436、0.872、1.744g/g(劑量均以生藥量計(jì))3種劑量組及賦形劑組。于動(dòng)物傷后10min分別對燙傷局部施以相應(yīng)外用藥并予以包扎。各治療組每日換藥一次,于感染后24、48h各采樣一次作創(chuàng)面菌落計(jì)數(shù)。采樣時(shí),用2只消毒無菌棉簽輕浸漬肉湯并擠干,先后由創(chuàng)面一側(cè)向另側(cè)滾動(dòng)均勻涂抹創(chuàng)面一次,并立即置入盛5ml無菌肉湯培養(yǎng)液中。將標(biāo)本充分振蕩80~100次,用無菌吸管吸取1ml至9ml1%蛋白胨水稀釋液中混勻,按此法連續(xù)稀釋至10-2、10-3、10-4、10-5倍,吸取每一稀釋液2ml分別注入到兩個(gè)滅菌平皿內(nèi),每皿1ml。將熔化并冷卻到45~50℃的營養(yǎng)瓊脂注入平皿,每皿15ml,以另一不加標(biāo)本的空白皿作為對照。轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使標(biāo)本與菌液充分混合均勻,待凝固后,翻轉(zhuǎn)平皿并于37℃孵育18~24h,觀察結(jié)果,計(jì)數(shù)菌落,以求得標(biāo)本中所含活菌數(shù)。并折算出單位創(chuàng)面面積所含細(xì)菌菌落數(shù)。以t檢驗(yàn)測定各治療組與賦形劑對照組組間的差異顯著性。同時(shí)進(jìn)行3個(gè)治療劑量組間等效性分析。2結(jié)果2.1其他常見菌株結(jié)果表明康美膚燒傷膏的無菌培養(yǎng)基及空白對照培養(yǎng)在37℃培養(yǎng)18h(真菌25~28℃,36h)條件下,未見細(xì)菌及真菌生長?？得滥w燒傷膏對金葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)、銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、甲鏈球菌(α-hemolyticstreptococcua)、乙鏈球菌(β-hemolyticstreptococcua)、糞鏈球菌(Staphylococcusfaecalis)、大腸埃希菌(Escherichiacoli)、克雷伯菌(Klebsiellapeneumoniae)、鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacterbaumanii)、陰溝腸桿菌(Enterbactercloacae)、白色念珠菌(Candidaalbicanspneumonia)、青霉菌(Penicilliumnotatum)、黃曲霉菌(Aspergillusflavus)等均有一定程度抑制作用,其中以金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌尤為敏感,銅綠假單胞菌、鮑曼不動(dòng)桿菌次之(見表1)。2.2抑菌活性測定見表2。與賦形劑對照組比較,不同濃度康美膚燒傷膏及京萬紅燒傷膏均有不同程度的抑菌活性,其創(chuàng)面24h和48h菌落計(jì)數(shù)顯著低于賦形劑對照組。3藥物敏感試驗(yàn)體外抑菌試驗(yàn)表明康美膚燒傷膏對細(xì)菌和真菌均有一定程度抑制作用,其中以金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌尤為敏感,銅綠假單胞菌、鮑曼不動(dòng)桿菌次之。試驗(yàn)過程發(fā)現(xiàn)對標(biāo)準(zhǔn)菌的MIC值較低,標(biāo)準(zhǔn)菌對藥物敏感;而各分離菌的MIC值較高,對藥物表達(dá)了一定的耐受性,這可能與分離菌采自臨床,而在臨床中均長期大量應(yīng)用了多種抗藥物防治疾病,致使病原菌產(chǎn)生耐藥性有關(guān)。采用大鼠Ⅱ度燙傷后創(chuàng)面接種金黃色葡萄球菌作為實(shí)