南水北調(diào)對(duì)釘螺生存繁殖力的影響

南水北調(diào)對(duì)釘螺生存繁殖力的影響

嚴(yán)重危及人類健康，阻礙社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的寄生蟲。全球有76個(gè)國(guó)家和地區(qū)流行血吸蟲病,流行區(qū)人口約6億,感染者約2億,患者約2千萬。中國(guó)主要流行日本血吸蟲病,目前流行區(qū)主要分布在長(zhǎng)江中下游沿岸5省的湖區(qū)和云南、四川2省的大山區(qū),血吸蟲病人671265例。釘螺是日本血吸蟲的惟一中間宿主,是構(gòu)成血吸蟲病傳播的不可缺失環(huán)節(jié)。中國(guó)大陸釘螺分布區(qū)位于北緯33°15′以南地區(qū)。流行病學(xué)研究證明,中國(guó)釘螺的地理分布區(qū)與血吸蟲病流行區(qū)呈高度的一致性,凡有血吸蟲病流行的地區(qū)必有釘螺孳生?？刂婆c消滅釘螺是控制與阻斷血吸蟲病傳播的主要措施之一。南水北調(diào)是我國(guó)優(yōu)化水資源配置,解決北方地區(qū)缺水的一項(xiàng)戰(zhàn)略性措施,關(guān)系到我國(guó)北方地區(qū)經(jīng)濟(jì)、社會(huì)和生態(tài)環(huán)境可持續(xù)發(fā)展的長(zhǎng)遠(yuǎn)利益。從長(zhǎng)江下游江蘇段引水北上的南水北調(diào)東線工程,因其引水口處在有日本血吸蟲中間宿主湖北釘螺孳生的江蘇省江都市,并且輸水干線途經(jīng)我國(guó)釘螺分布區(qū)并從分布區(qū)最北點(diǎn)的寶應(yīng)縣(北緯33°15′)境內(nèi)進(jìn)入非分布區(qū),因而,在工程建成并實(shí)現(xiàn)供水后,釘螺隨水流向北遷移擴(kuò)散可能性難以完全排除。為了研究因南水北調(diào)將釘螺帶到北緯33°15′以北地區(qū)后,釘螺能否生存與繁殖,并形成新的有螺區(qū),從而可能導(dǎo)致中國(guó)血吸蟲病流行區(qū)向北擴(kuò)展,本研究沿工程輸水干線現(xiàn)場(chǎng)設(shè)點(diǎn),采用螺籠放養(yǎng)釘螺的方法,對(duì)放養(yǎng)在北方地區(qū)的釘螺生存繁殖力進(jìn)行了為期8a的現(xiàn)場(chǎng)定量縱向觀察,并采用組織學(xué)、組織化學(xué)、酶組織化學(xué)和電鏡技術(shù)觀察北移釘螺的生殖腺變化,以期為南水北調(diào)工程安全運(yùn)行提供論證依據(jù)。1內(nèi)容和方法1.1實(shí)驗(yàn)觀察點(diǎn)位置沿著南水北調(diào)輸水干線分別選擇山東濟(jì)寧(北緯35°23′)和江蘇徐州(北緯34°21′)作為實(shí)驗(yàn)觀察點(diǎn),兩地均為血吸蟲病非流行區(qū),均無釘螺孳生;選擇江蘇鎮(zhèn)江(北緯32°10′)作為對(duì)照觀察點(diǎn),該地歷史上是血吸蟲病重度流行區(qū),沿江江灘至今仍有釘螺分布(圖1)。實(shí)驗(yàn)現(xiàn)場(chǎng)和對(duì)照現(xiàn)場(chǎng)均設(shè)在能長(zhǎng)年保持穩(wěn)定水位的自然水塘邊,周圍無排放污水的工廠,各點(diǎn)常年均有專人看護(hù)。1.2材料表面1.2.1血吸蟲感染陽(yáng)性釘螺的分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)用釘螺采自江蘇省南京市龍?zhí)督瓰?實(shí)驗(yàn)前以群體逸蚴法剔除血吸蟲感染陽(yáng)性釘螺,挑選爬動(dòng)活躍的幼螺(體長(zhǎng)<5mm),在體視顯微鏡下區(qū)分雌雄后分別飼養(yǎng),備用。1.2.2細(xì)孔鐵絲網(wǎng)實(shí)驗(yàn)用螺籠系用8號(hào)鐵絲扎制成200mm×100mm×100mm的框架,周圍覆以粗孔鐵絲網(wǎng),內(nèi)襯14孔/25.4mm窗紗和120孔/25.4mm尼龍紗絹。籠底鋪有一層厚10cm、帶有完整植被的當(dāng)?shù)啬嗥ぁ?.3釘螺的生存和繁殖觀察1.3.1螺籠的采集于1991年9月初,在每只螺籠內(nèi)放置100只實(shí)驗(yàn)釘螺(雌雄各半),用細(xì)鐵絲封緊籠蓋后,將螺籠呈30°角傾斜放置在3個(gè)觀察現(xiàn)場(chǎng)的水塘邊,以使螺籠內(nèi)泥土1/3浸在水中,2/3在水線上(圖2)。而后每3個(gè)月分別從各現(xiàn)場(chǎng)提取2只螺籠,用20孔/25.4mm銅絲篩篩洗籠內(nèi)泥土,收集全部釘螺,用敲擊法鑒定釘螺死活,計(jì)算釘螺死亡率。1.3.2幼螺孵化和放養(yǎng)于1992年2月初,在3個(gè)現(xiàn)場(chǎng)分別篩取放養(yǎng)活螺100只(雌雄各半),重新設(shè)框,方法同上。3～6月間,每隔30d用120孔/25.4mm銅絲篩篩洗籠內(nèi)泥土1次,在解剖鏡下分離撿獲螺卵。篩出的釘螺重新放回新鋪泥土的螺籠內(nèi)繼續(xù)放養(yǎng)。觀察釘螺在當(dāng)?shù)禺a(chǎn)卵量。5月份從3個(gè)現(xiàn)場(chǎng)釘螺所產(chǎn)的同一批螺卵中,分別選取1000只泥皮完整的螺卵置于直徑9cm的培養(yǎng)皿中,加入當(dāng)?shù)厮了了?cm,置室溫(25℃)下孵化。每隔5d用吸管吸出幼螺,記錄孵出的幼螺數(shù),并補(bǔ)充培養(yǎng)皿內(nèi)的水,保持水深為2cm。共觀察30d,計(jì)算孵化率。取同批孵出的子代幼螺各500只,分別置螺籠內(nèi)放養(yǎng)于現(xiàn)場(chǎng)。5個(gè)月后以20孔/25.4mm銅絲篩篩洗籠內(nèi)泥土,收集全部釘螺,統(tǒng)計(jì)活成螺(體長(zhǎng)>5mm)數(shù)量。1991年9月,在3個(gè)現(xiàn)場(chǎng)分別設(shè)置2個(gè)螺籠,內(nèi)置200只釘螺(雌雄各半)放養(yǎng)在現(xiàn)場(chǎng),分別于1、2a后用20孔/25.4mm銅絲篩篩洗籠內(nèi)泥土,收集全部釘螺,以敲擊法鑒定釘螺死活,統(tǒng)計(jì)放養(yǎng)1、2a的釘螺增殖數(shù)。1.4螺、螺的放養(yǎng)放養(yǎng)3個(gè)月后(1991年11月),分別從3個(gè)現(xiàn)場(chǎng)篩取活雄螺,放養(yǎng)6個(gè)月后(1992年3月)篩取活雌螺。兩次采集的釘螺標(biāo)本均參照文獻(xiàn)方法破殼,解剖鏡下去殼,暴露釘螺軟體,分離睪丸或卵巢,挑選無機(jī)械損傷的生殖腺,分別作如下處理:(1)學(xué)習(xí)準(zhǔn)備置10%福爾馬林溶液中固定,常規(guī)石蠟包埋、切片,HE染色。(2)dna的純化置100%乙醇中固定6h,常規(guī)石蠟包埋、切片,參照文獻(xiàn)方法顯示糖原(PAS反應(yīng))。將切片放入60℃1mol·L-1的HCl溶液中60min,4℃1mol·L-1的HCl溶液中1min,Schiff試劑中60min,連二亞硫酸鈉水溶液及蒸餾水中沖洗。顯微鏡下可見DNA呈紅紫色。置4℃預(yù)冷的甲醛鈣溶液(4%甲醛溶液100ml中加氯化鈣4g)中固定24h后,常規(guī)石蠟包埋、切片。切片脫蠟后置100℃5%三氯醋酸水溶液中15min,再置于70%乙醇和水中漂洗,用22℃0.1%快綠(FastGreenFCF)染色30min,鏡下可見堿性蛋白(精氨酸和賴氨酸)呈亮綠色。(3)檢測(cè)大鼠糖原、代謝指標(biāo)、cco、ldh和sdh的表達(dá)新鮮標(biāo)本不經(jīng)固定,即刻置于LEICACM1850型冰凍切片機(jī)(德國(guó)產(chǎn))冷凍15min后作連續(xù)切片,參照文獻(xiàn)方法顯示細(xì)胞色素C氧化酶(cytochromeoxidase,CCO)和乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase,LDH);Wachstein法顯示5’-核苷酸酶(5’-Nucleotidase,5’-NT);改良Culling法顯示葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G-6-Pase);Nachlas法顯示琥珀酸脫氫酶(succinatedehydrogenase,SDH)。上述染色片經(jīng)雙蒸水漂洗,自然晾干,經(jīng)梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片,制成玻片標(biāo)本。進(jìn)行上述組織化學(xué)、酶組織化學(xué)反應(yīng)時(shí),分別采用唾液消化、沸水或化學(xué)劑破壞及免去作用液中的底物等作方法對(duì)照。同時(shí)分別選用小白鼠含相應(yīng)成分或酶活性高的組織切片與釘螺切片同缸孵育染色,作為陽(yáng)性對(duì)照。根據(jù)著色反應(yīng)深淺,在光鏡下分為5個(gè)等級(jí):陰性(-)、陽(yáng)性(+)、中等陽(yáng)性(++)、較強(qiáng)陽(yáng)性(+++)、強(qiáng)陽(yáng)性(++++),進(jìn)行定性觀察。3個(gè)觀察現(xiàn)場(chǎng)各隨機(jī)抽取一定數(shù)量切片,采用IBAS200圖像分析儀(德國(guó)產(chǎn))測(cè)定糖原、DNA、組蛋白、CCO、LDH和SDH等6項(xiàng)指標(biāo)的灰度值。每一指標(biāo)測(cè)20只釘螺標(biāo)本,每一標(biāo)本隨機(jī)測(cè)5個(gè)視野,取灰度值的平均值作定量比較。(4)透射電鏡cr觀察取3個(gè)現(xiàn)場(chǎng)活雄螺軟體,解剖鏡下分離睪丸組織,挑選無機(jī)械損傷的標(biāo)本迅速置于經(jīng)4℃預(yù)冷的2.5%戊二醛溶液中固定2h,經(jīng)固定、脫水、浸泡、聚合包埋后,用LKB超薄切片機(jī)(瑞典產(chǎn))連續(xù)切片,醋酸鈾和枸櫞酸鉛復(fù)染后,在OPTONEM10C/CR型透射電鏡(德國(guó)產(chǎn))下觀察,拍照。1.5螺籠提取、放養(yǎng)及存活率測(cè)定1995年9月,在2個(gè)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)場(chǎng)(江蘇徐州和山東濟(jì)寧)和對(duì)照現(xiàn)場(chǎng)分別設(shè)置螺籠,實(shí)驗(yàn)現(xiàn)場(chǎng)每只螺籠內(nèi)放置200只在江蘇徐州放養(yǎng)3a的第3代幼螺(雌雄各半);對(duì)照區(qū)(江蘇鎮(zhèn)江)螺籠內(nèi)放置經(jīng)當(dāng)?shù)胤硼B(yǎng)3年的第3代幼螺200只(雌雄各半),具體方法同上。觀察開始后,每12個(gè)月分別提取1螺籠,篩獲釘螺,鑒別釘螺死活,計(jì)算釘螺存活率。同時(shí),在3個(gè)觀察現(xiàn)場(chǎng)分別放置螺籠各1只,內(nèi)置經(jīng)江蘇徐州或鎮(zhèn)江放養(yǎng)3a的第3代幼螺各300只,現(xiàn)場(chǎng)放養(yǎng)3個(gè)月后以20孔/25.4mm銅絲篩篩洗籠內(nèi)泥土,收集全部釘螺,統(tǒng)計(jì)活成螺數(shù)量,計(jì)算幼螺成活率。1.6北移傳代螺釘對(duì)血液吸蟲的敏感性1.6.1釘螺放養(yǎng)后的被養(yǎng)實(shí)驗(yàn)釘螺系江蘇南京龍?zhí)夺斅菀浦列熘莘硼B(yǎng)3a后的第3代釘螺,對(duì)照釘螺系龍?zhí)夺斅菀浦伶?zhèn)江放養(yǎng)3年后的第3代釘螺。挑選活力強(qiáng)的當(dāng)年新產(chǎn)幼螺用于本觀察。1.6.2血吸蟲卵及血吸蟲卵感染兔從安徽貴池血吸蟲病流行區(qū)江灘采集感染性釘螺,在室內(nèi)逸出尾蚴感染家兔,45d解剖感染兔,取肝臟勻漿后篩洗、沉淀,分離出血吸蟲卵,蟲卵置于三角燒瓶中加脫氯自來水孵化出毛蚴。1.6.3釘螺感染血吸蟲感染途徑分別取實(shí)驗(yàn)釘螺和對(duì)照釘螺各100只,置于直徑15cm的培養(yǎng)皿中,覆以尼龍紗網(wǎng)以防止釘螺爬出。按每螺4ml比例在皿內(nèi)加入江蘇徐州現(xiàn)場(chǎng)水塘水,室溫(25℃)白熾燈光照條件下,按釘螺與毛蚴數(shù)量1∶5、1∶20、1∶40的比例投放新孵出的日本血吸蟲毛蚴,感染4h后,撿出釘螺置實(shí)驗(yàn)室常溫下分盤飼養(yǎng)。8周后解剖觀察釘螺感染情況,計(jì)算釘螺感染率。2結(jié)果2.1釘蝸牛的生存和繁殖2.1.1江蘇徐州現(xiàn)場(chǎng)釘螺死亡率經(jīng)過3、6、9、12、15、18、21、24個(gè)月放養(yǎng)后,山東濟(jì)寧現(xiàn)場(chǎng)釘螺死亡率分別為14.29%、35.33%、83.33%、95.18%、98.84%、100%、100%和100%,江蘇徐州現(xiàn)場(chǎng)釘螺死亡率分別為14.51%、16.23%、44.68%、79.57%、85.75%、86.24%、90.58%和76.73%。與對(duì)照區(qū)江蘇鎮(zhèn)江現(xiàn)場(chǎng)釘螺死亡率比較,除放養(yǎng)在江蘇徐州6個(gè)月釘螺死亡率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P>0.05),其他各個(gè)時(shí)間差異均具有非常顯著性(P均<0.01)(表1)。2.1.2山東層螺放養(yǎng)山東濟(jì)寧和江蘇徐州現(xiàn)場(chǎng)3～6月間每對(duì)釘螺平均產(chǎn)卵量分別為15.93只和50.24只,而江蘇鎮(zhèn)江為69.16只,差異均具有非常顯著性(P均<0.01)。山東濟(jì)寧螺卵孵化率為32.50%,江蘇徐州為71.00%,對(duì)照區(qū)江蘇鎮(zhèn)江為89.00%,差異亦具有非常顯著性(P均<0.01)。山東濟(jì)寧和江蘇徐州幼螺成活率分別為0和43.60%,對(duì)照區(qū)江蘇鎮(zhèn)江為85.20%,差異均具有顯著性(P均<0.01)(表2)。200只釘螺放養(yǎng)1a后,山東濟(jì)寧僅存8只活螺,江蘇徐州為467只,對(duì)照區(qū)江蘇鎮(zhèn)江為848只;第2年山東濟(jì)寧已無活螺,徐州為543只,鎮(zhèn)江為1248只,實(shí)驗(yàn)區(qū)和對(duì)照區(qū)差異顯著(P均<0.01)。2.2北移植生殖腺組織、組織化學(xué)、酶組織化學(xué)和超微結(jié)構(gòu)2.2.1花物卵細(xì)胞組織細(xì)胞江蘇鎮(zhèn)江釘螺睪丸小葉分支粗大豐滿,內(nèi)部充滿大量發(fā)育成熟精子;卵巢呈長(zhǎng)葉狀,分支多而豐滿,內(nèi)部充滿各個(gè)不同發(fā)育階段的卵細(xì)胞。而山東濟(jì)寧和江蘇徐州釘螺的睪丸和卵巢則呈不同程度的萎縮狀態(tài),腺體被空泡樣結(jié)構(gòu)取代,各級(jí)生殖細(xì)胞減少,尤以山東濟(jì)寧釘螺更為明顯(圖3～圖8)。2.2.2免疫、ldh、g-6-pase活性(1)定性江蘇鎮(zhèn)江釘螺睪丸內(nèi)糖原、DNA豐富,CCO、5’-NT、LDH活性高,SDH活性較低;山東濟(jì)寧和江蘇徐州釘螺睪丸內(nèi)糖原、DNA含量及CCO、5’-NT、LDH酶活性均較鎮(zhèn)江釘螺降低,但SDH酶活性升高,這些變化均尤以山東濟(jì)寧釘螺更為顯著。江蘇鎮(zhèn)江釘螺卵巢內(nèi)糖原、組蛋白豐富,CCO、5’-NT、LDH、G-6-Pase活性均高;山東濟(jì)寧和江蘇徐州釘螺卵巢內(nèi)糖原、組蛋白含量和酶活性均有下降(表3)。(2)定量除睪丸SDH外,江蘇鎮(zhèn)江釘螺睪丸和卵巢PAS反應(yīng)、組蛋白、DNA、CCO、SDH、LDH的灰度值均高于山東濟(jì)寧和江蘇徐州釘螺(P均<0.01),而山東濟(jì)寧和江蘇徐州釘螺睪丸SDH的灰度值高于江蘇鎮(zhèn)江釘螺(P均<0.01)(表4)。2.2.3螺旋狀的染色體江蘇鎮(zhèn)江釘螺睪丸內(nèi)含精子豐富,成熟精子分頭、體兩部分,頭部含一電子密度極高的呈螺旋狀的染色體,嵴棱角分明;體較疏松(圖9)。北移山東濟(jì)寧和江蘇徐州釘螺睪丸內(nèi)精細(xì)胞減少,成熟精子頭、體部呈不同程度的腫脹,電子密度下降、破潰,甚至呈崩解狀,尤以山東濟(jì)寧釘螺更為明顯(圖10、圖11)。2.3江蘇省不同區(qū)江蘇釘螺存活率比較江蘇南京龍?zhí)夺斅菀浦列熘莘硼B(yǎng)3a后的第3代子螺,在山東濟(jì)寧放養(yǎng)1a后的存活率即為0;在江蘇徐州4～8a的釘螺存活率分別為34.76%、16.93%、6.17%、0.74%和0;而對(duì)照區(qū)江蘇鎮(zhèn)江釘螺存活率分別為71.67%、68.38%、60.54%、58.42%和56.72%。江蘇徐州與對(duì)照區(qū)鎮(zhèn)江釘螺存活率比較,差異具有非常顯著性(P均<0.01)(表5)。2.4州子代釘螺感染情況釘螺與毛蚴分別以1∶5、1∶20、1∶40比例感染時(shí),江蘇徐州子代釘螺感染率分別為14.89%、65.96%和62.22%,對(duì)照江蘇鎮(zhèn)江子代釘螺感染率分別為16.84%、56.25%和69.41%,差異均無顯著性(P均>0.05)(表6)。3功能影響與釘螺繁殖的關(guān)系國(guó)外因興建大型水利工程導(dǎo)致曼氏或埃及血吸蟲病流行區(qū)擴(kuò)大或流行程度加重不乏其例。如在非洲大陸的埃及、加納、尼日爾、尼日利亞、坦桑尼亞、喀麥隆、蘇丹、塞內(nèi)加爾等國(guó)的埃及或曼氏血吸蟲病流行被認(rèn)為均與大型水庫(kù)建設(shè)有關(guān)[15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25]。其原因是,流行于非洲大陸的為曼氏和埃及血吸蟲病,曼氏和埃及血吸蟲的中間宿主雙臍螺和小泡螺均系完全生活在水體中的水生螺類,可隨水四處擴(kuò)散。因而,水利工程建設(shè)是導(dǎo)致曼氏和埃及血吸蟲病流行的主要因素。而在中國(guó)大陸流行的為日本血吸蟲病,日本血吸蟲中間宿主為釘螺。釘螺系狹溫性水陸兩棲軟體動(dòng)物,其生存和繁殖均需一定的自然環(huán)境條件,如氣溫、濕度、植被及土壤等,因而我國(guó)大陸釘螺的分布區(qū)域局限在北緯33°15′以南地區(qū)。釘螺生態(tài)習(xí)性與水生螺完全不同,釘螺的幼螺在水體中生長(zhǎng)發(fā)育,可隨水?dāng)U散;但成螺主要棲息在半干半濕的土表,或“冬陸夏水”的江湖洲灘上,擴(kuò)散形式主要是附著在漂浮物上隨水流擴(kuò)散。有關(guān)水利工程建設(shè)造成釘螺擴(kuò)散蔓延也有報(bào)道,但通常與灌溉模式密切相關(guān)[27,28,29,27,28,29]。南水北調(diào)東線工程從長(zhǎng)江引水的取水口位于有釘螺分布的江蘇省江都市,并且主要輸水干線需要穿越江蘇省歷史有螺區(qū)進(jìn)入北緯33°15′以北地區(qū)。因而,在南水北調(diào)工程實(shí)施并運(yùn)行后,會(huì)否隨著調(diào)水導(dǎo)致釘螺擴(kuò)散,使得江蘇省歷史有螺區(qū)重新有釘螺孳生,并進(jìn)而沿著輸水干線向北擴(kuò)散,在北方形成新的釘螺分布區(qū),從而導(dǎo)致血吸蟲病流行區(qū)向北擴(kuò)展引起了廣泛關(guān)注[30,31,32,33,34,30,31,32,33,34]。南水北調(diào)對(duì)血吸蟲病流行的影響,關(guān)鍵在于釘螺能否隨調(diào)水?dāng)U散,以及如果一旦有釘螺擴(kuò)散到非分布區(qū)后,能否生存和繁殖,并形成新的釘螺分布區(qū)。釘螺在自然狀態(tài)下隨水?dāng)U散形式主要是吸附在漂浮物載體上的成螺和營(yíng)水生活的幼螺,隨水流動(dòng)由上游向下游擴(kuò)散。已有研究資料證明,南水北調(diào)工程采用了13級(jí)泵站逐級(jí)抽提由地勢(shì)低的南方向地勢(shì)高的北方調(diào)水。在其逐級(jí)提水過程中,由于水泵的作用可使釘螺成螺與載體分離,脫落的釘螺掉入深水區(qū)后不能存活;同時(shí),由于在輸水線沿途所修建的水閘、攔污欄、消力池等水工建筑物均具有阻攔、沉淀釘螺作用,因而在調(diào)水過程中,釘螺成螺通過輸水干線擴(kuò)散的危險(xiǎn)性較小。但由于長(zhǎng)江中下游是血吸蟲病重度流行區(qū),南水北調(diào)進(jìn)水口周圍的江灘上就有釘螺孳生;輸水干線穿越江蘇省血吸蟲病流行區(qū)進(jìn)入北緯33°15′以北地區(qū)的釘螺非分布區(qū)。營(yíng)水生活的釘螺幼螺隨水流漂浮擴(kuò)散的可能性依然難以排除。為探討一旦有釘螺隨調(diào)水?dāng)U散到33°15′以北地區(qū)后能否生存并繁殖,本研究沿著南水北調(diào)東線工程輸水干線,在釘螺非分布區(qū)現(xiàn)場(chǎng)布置觀察點(diǎn),采用人工北移幼螺籠養(yǎng)法定量觀察幼螺在北緯33°15′以北地區(qū)的生存和繁殖。結(jié)果,經(jīng)過18個(gè)月后,山東濟(jì)寧觀察點(diǎn)釘螺死亡率達(dá)100%,子代幼螺成活率亦為0,證明釘螺在北緯35°23′以北地區(qū)難以生存。在江蘇徐州,釘螺經(jīng)過9～24個(gè)月后,死亡率顯著增高(P均<0.01),產(chǎn)卵量、螺卵孵化率、子代幼螺成活率及年增殖數(shù)均顯著下降(P均<0.01)。釘螺生殖腺的組織學(xué)、組織化學(xué)、酶組織化學(xué)和超微結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn),釘螺北移徐州3～6個(gè)月后,雌、雄螺生殖腺萎縮,生殖細(xì)胞減少;精子出現(xiàn)不同程度變形;參與形成生殖細(xì)胞的有關(guān)組化成分減少;與生殖細(xì)胞發(fā)育、成熟有關(guān)的酶活性發(fā)生異常變化?，F(xiàn)場(chǎng)生態(tài)學(xué)觀察及實(shí)驗(yàn)