動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體

2.2動(dòng)物細(xì)胞工程2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜合的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁雜種細(xì)胞脫分化再分化愈傷組織雜種植株溫故知新:植物體細(xì)胞雜交過(guò)程材料1:1970年，有兩位科學(xué)家做了一個(gè)人—鼠細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)，以證明細(xì)胞膜的流動(dòng)性。那么，如何實(shí)現(xiàn)人—鼠細(xì)胞的融合，動(dòng)物細(xì)胞融合后還有什么用途呢？人-鼠(想像圖)一、動(dòng)物細(xì)胞融合1.概念：動(dòng)物細(xì)胞融合（cellfusion）也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。融合和形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳物質(zhì)的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。2、原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性有些細(xì)胞的融合是正常的生命活動(dòng)。如精子與卵細(xì)胞的結(jié)合。

兩個(gè)細(xì)胞正在融合受精作用3.誘導(dǎo)方法：物理方法：化學(xué)法：生物法：滅活的病毒離心、振動(dòng)、電激等聚乙二醇（PEG)為什么滅活的病毒能作誘導(dǎo)劑？4.融合過(guò)程：為什么滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑？不滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑嗎？生物法：滅活的病毒喪失感染性（不感染細(xì)胞）保留融合活性仙臺(tái)病毒紫外線兩個(gè)核的融合是在雜種細(xì)胞第一次有絲分裂時(shí)進(jìn)行的4.意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。5.應(yīng)用：最重要的用途是制備單克隆抗體植物細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理融合前處理使用的酶誘導(dǎo)方法主要用途細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性纖維素酶、果膠酶胰蛋白酶物理方法（離心、振蕩、電激）化學(xué)方法（PEG）物理、化學(xué)方法滅活的病毒獲得雜種植株制備單克隆抗體去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合思考？1.抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？2.抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？與抗原作用的特點(diǎn)？主要分布在哪里？3.用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？(三)單克隆抗體思考？1.抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？2.抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？與抗原作用的特點(diǎn)？主要分布在哪里？3.用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？(三)單克隆抗體抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從血清中分離抗體該法制備抗體的特點(diǎn)：

產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。多種效應(yīng)B細(xì)胞動(dòng)物體內(nèi)多種抗體抗原１、單克隆抗體McAb（概念）

由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖（克隆），形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。

那么，如何大量獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？（即單克隆抗體）單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備利用效應(yīng)B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞設(shè)計(jì)方案：一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無(wú)限增殖雜種細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計(jì)方案：動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量繁殖單克隆抗體的制備1、過(guò)程注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體（選擇性培養(yǎng)基）選擇性培養(yǎng)基作用使親本細(xì)胞和具有同種核的雜交細(xì)胞不能存活而雜交瘤細(xì)胞可存活誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？瘤B瘤瘤BBB瘤B瘤B瘤抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性B瘤B瘤B瘤B瘤B瘤能產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞系（無(wú)限繁殖)第一次篩選第二次篩選單克隆抗體制備過(guò)程1、（只考慮兩兩融合）融合細(xì)胞幾種類型？2、本過(guò)程中進(jìn)行了兩次篩選，目的分別是什么？第1次篩選要淘汰哪些細(xì)胞？3、雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？4、本過(guò)程利用的哪些技術(shù)？3、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)特異性強(qiáng)、靈敏度高，產(chǎn)量大4、單克隆抗體的應(yīng)用（1）作為診斷試劑——最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速（2）運(yùn)載藥物和治療疾病生物導(dǎo)彈=單克隆抗體+藥物，治療腫瘤(“生物導(dǎo)彈”—單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭)思考：1、本過(guò)程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融