hplc法測(cè)定西南不同主產(chǎn)地生姜中6-姜酚的含量

hplc法測(cè)定西南不同主產(chǎn)地生姜中6-姜酚的含量

中國(guó)西南部有許多山區(qū)，氣候濕潤(rùn)，全年高，地理環(huán)境適宜。對(duì)生姜有害，有利于生長(zhǎng)，品質(zhì)優(yōu)良。主要成分是姜酚。在醫(yī)學(xué)上,生姜是重要的中藥材,它是衛(wèi)生部首批公布的藥食兼用資源之一。姜酚是姜中辣味成分的主要組分之一,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí),姜酚具有很強(qiáng)的生物活性和藥理作用,其具有抗氧化、抗腫瘤、抗菌、消炎、強(qiáng)心、降壓、防治心血管疾病、健胃與抗胃潰瘍、保肝利膽、防腐殺蟲(chóng)等廣泛的生物活性。6-姜酚為姜酚中最主要的活性成分,其可以治療皮膚癌,抑制惡性細(xì)胞增生。研究表明生姜的保健特性和藥食兼用特性大部分都與6-姜酚有直接或間接的關(guān)系,通過(guò)建立HPLC方法來(lái)準(zhǔn)確測(cè)定西南各主要產(chǎn)地生姜中6-姜酚含量,為生姜在醫(yī)藥保健方面的應(yīng)用提供依據(jù)。1主要設(shè)備和材料1.1超聲、儀器和干燥配方測(cè)量d分離器dq-25d高效液相,型號(hào):Aglient1260型,VWD檢測(cè)器;超聲,型號(hào):KQ-250DB,昆山市超聲儀器有限公司;真空干燥,型號(hào):BZF50型,Boxun;電子天平,型號(hào):METTLERTOLEDO。1.2-姜酚對(duì)照品生姜:在西南地區(qū)云、貴、川三省相關(guān)產(chǎn)地購(gòu)買(mǎi);6-姜酚對(duì)照品:購(gòu)買(mǎi)自天津中新藥業(yè),純度98%(HPLC);水:二次蒸餾水;其余試劑均為分析純。2實(shí)驗(yàn)部分2.16-姜酚含量測(cè)定2.1.1水、溫度和塔板數(shù)色譜柱:DiamonsilC18(5μm,4.6×250mm);流動(dòng)相:乙腈∶水=66∶34;柱溫:30℃;流速:1.0mL/min;波長(zhǎng):280nm;進(jìn)樣量:10μL。理論塔板數(shù)以6-姜酚計(jì),大于35000。結(jié)果如圖1所示,對(duì)照品(A)及樣品(B)基線平直,峰形對(duì)稱尖銳,無(wú)拖尾,顯示在此條件下樣品組分分離效果良好。2.1.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取6-姜酚對(duì)照品15.44mg至25mL容量瓶中,甲醇超聲溶解,定容后作為對(duì)照儲(chǔ)備液。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,用甲醇稀釋成5個(gè)不同濃度水平的系列對(duì)照品溶液,置于4℃冰箱避光保存。分別精密稱取粗姜酚7.94mg、8.01mg、15.02mg、17.21mg和26.00mg至10mL容量瓶中,甲醇超聲溶解,定容后置于4℃冰箱避光保存。2.1.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制將6個(gè)不同濃度水平6-姜酚對(duì)照品溶液依次連續(xù)進(jìn)樣3次取平均值,濃度為橫坐標(biāo)X,峰面積值為縱坐標(biāo)Y,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2,計(jì)算回歸方程,R值。標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=6246.5X+4.4,R=0.999962。6-姜酚濃度在0.06176-0.37056mg/mL范圍內(nèi),6-姜酚濃度與峰面積的線性關(guān)系良好。2.1.4進(jìn)樣和進(jìn)樣次數(shù)配制低、中、高三種濃度分別是0.067、0.154、0.344mg/mL的6-姜酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液,在一天之內(nèi)分別連續(xù)進(jìn)樣5次,以及連續(xù)5天分別進(jìn)樣1次,檢測(cè)6-姜酚的峰面積,日內(nèi)、日間RSD值分別是0.11%、0.19%。2.1.5進(jìn)樣和日內(nèi)、持續(xù)時(shí)間進(jìn)樣6-姜酚含量精密吸取濃度為0.801mg/mL的供試品溶液,分別間隔0、1、2、4、8、16、24小時(shí)進(jìn)樣1次測(cè)定6-姜酚含量,以及分別間隔1、3、6、10、15、30天進(jìn)樣1次測(cè)定6-姜酚含量,日內(nèi)、日間RSD值分別是0.48%、1.00%。2.1.6重復(fù)精密吸取5份不同濃度水平供試品溶液,測(cè)定6-姜酚的含量,RSD值為0.87%。2.1.7最低濃度ms空白溶劑甲醇峰高0.12mAu,0.067mg/mL6-姜酚標(biāo)準(zhǔn)品的峰高52.5mAu。信噪比3∶1,6-姜酚能被檢測(cè)出的最低濃度為4.59×10-4mg/mL?？瞻兹軇┘状挤甯?.12mAu,0.067mg/mL6-姜酚標(biāo)準(zhǔn)品的峰高52.5mAu。信噪比10∶1,6-姜酚能被檢測(cè)出的最低濃度為1.53×10-3mg/mL。2.1.8加樣回收率試驗(yàn)取6-姜酚含量為41.13%的粗姜酚不同質(zhì)量5份,精密稱定,分別加入6-姜酚標(biāo)準(zhǔn)品0.344mg,配制待測(cè)樣品溶液,測(cè)定6-姜酚含量,計(jì)算加樣回收率,RSD值為1.21%。2.1.9-姜酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的計(jì)算樣品溶液進(jìn)樣10μL,按“2.1.1”色譜條件進(jìn)行HPLC測(cè)定6-姜酚含量,按以下公式計(jì)算。c為進(jìn)樣時(shí)樣品濃度,mg/mL;A為樣品中6-姜酚所對(duì)應(yīng)的的峰面積,mAu·s;W6-姜酚為樣品中6-姜酚的質(zhì)量分?jǐn)?shù);x為稀釋倍數(shù);v為進(jìn)樣溶液總體積,mL;m為樣品質(zhì)量,mg。2.2生姜是中國(guó)西南部的主要藥物2.2.1小麥粉的制備將不同品種的生姜分別洗凈切片,恒溫烘干,粉碎至粉末狀,過(guò)40目篩,密封陰涼處保存。分別取干姜粉末約0.5g,精確稱量,置于50mL容量瓶,加入30mL甲醇,振蕩搖勻浸泡24h。恒溫50℃,超聲40min,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,置于冰水浴中冷卻15min,取出后用有機(jī)濾膜(0.45μm)迅速過(guò)濾,放至室溫,得待測(cè)濾液。2.2.26-姜酚含量測(cè)定3不同部位生姜的6-姜酚含量建立了生姜中主要藥用有效成分6-姜酚的HPLC檢測(cè)方法,并對(duì)來(lái)自西南地區(qū)貴州水城、興義、安順、長(zhǎng)順,云南羅平,四川鍵為(黃口、白口)和貴州