一例雞前列腺增生模型的治療

一例雞前列腺增生模型的治療

烏烏鳳丸是中醫(yī)經(jīng)典的婦科藥物，具有益氣健血、調(diào)經(jīng)止痛的功效。全方由烏雞、熟地黃、鹿角膠、鱉甲、牡蠣、人參、黃芪、當(dāng)歸、香附、川芎等20味中藥組成,集溫補(bǔ)、滋陰、澀斂、調(diào)和為一方,具有補(bǔ)而不滯,溫而不燥的特點(diǎn),為著名理血通經(jīng)藥,為扶正祛邪之劑。臨床常用于氣血兩虛、身體瘦弱、腰膝酸軟、月經(jīng)不調(diào)、崩漏帶下等癥的治療,療效確切?，F(xiàn)代藥理研究證明,烏雞白鳳丸具有補(bǔ)血、凝血、抗炎、鎮(zhèn)痛、保肝、增強(qiáng)免疫、性激素樣作用以及促皮質(zhì)激素樣作用等。前列腺增生是中老年男性常見(jiàn)病,在60歲以上男性中前列腺總體積增大的比例超過(guò)50%,而在85歲以上男性中,前列腺總體積增大高達(dá)90%,并逐漸趨于低齡化。目前前列腺增生治療方法頗為龐雜,不外藥物和手術(shù)兩種,手術(shù)療效較為可靠,但術(shù)后會(huì)產(chǎn)生許多并發(fā)癥和后遺癥,患者依從性不理想;藥物治療前列腺增生時(shí)間較長(zhǎng),需長(zhǎng)期用藥,西藥的不良反應(yīng)較多、療效不穩(wěn)、費(fèi)用高等,常受到很多限制。中醫(yī)藥防治前列腺增生癥具有療效確切、毒副作用小、從整體調(diào)節(jié)及改善病情等優(yōu)勢(shì)。筆者的前期研究表明,常用婦科用藥對(duì)前列腺增生有明確的療效,本文觀察烏雞白鳳丸對(duì)小鼠前列腺增生模型的影響。1材料表面1.1注射用激素鈉原酯類烏雞白鳳丸,江西半邊天藥業(yè)有限公司,批號(hào)081202;戊巴比妥鈉,中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司,批號(hào)F20030816;注射用青霉素鈉,華北制藥股份有限公司,批號(hào)C0812302;丙酸睪酮注射液,上海通用藥業(yè)股份有限公司,批號(hào)071001;癃閉舒膠囊,石家莊科迪藥業(yè)有限公司,批號(hào)080413;小鼠睪酮(T)ELISA檢測(cè)試劑盒,北京科美東雅生物技術(shù)有限公司,批號(hào)20090424;小鼠雌二醇(E2)ELISA檢測(cè)試劑盒,北京科美東雅生物技術(shù)有限公司,批號(hào)20090424。1.2動(dòng)物1.3高速冷凍離心液tgl-3gFA(N)/JA(N)系列電子天平,上海民橋精密儀器有限公司;TGL-16G高速冷凍離心機(jī),上海安亭科學(xué)儀器廠;電動(dòng)勻漿機(jī),寧波新芝生物科技股份有限公司;Sn-895B型智能放免γ測(cè)量?jī)x:上海原子核研究所四環(huán)儀器一廠。2方法2.1小鼠胰腺微核試驗(yàn)取體重20~23g雄性小鼠80只,隨機(jī)取10只作為空白對(duì)照組,做假手術(shù)處理;其余小鼠造前列腺增生模型,小鼠稱重后腹腔注射2%戊巴比妥鈉(30mg·kg-1)麻醉,常規(guī)消毒皮膚,于無(wú)菌條件下經(jīng)陰囊摘除雙側(cè)睪丸,殘端處結(jié)扎,縫合皮膚,肌內(nèi)注射青霉素20萬(wàn)u·kg-1;手術(shù)后第3天,取去勢(shì)成功、狀態(tài)良好的小鼠50只,隨機(jī)分為5組用于造前列腺增生模型;造模型5組均每日sc丙酸睪酮5mg·kg-1(溶于大豆油),連續(xù)3周,空白組注射等量溶媒;于造模型第1天,造模型5組分別ig烏雞白鳳丸高、中、低劑量混懸液(9,4.5,2.25g·kg-1),癃閉舒膠囊混懸液(0.45g·kg-1)及同體積的生理鹽水,給藥體積均為20mL·kg-1;空白對(duì)照組灌服同體積的生理鹽水;每日給藥1次,連續(xù)給藥3周。于末次給藥后2h(禁食不禁水12h),小鼠稱重后眼眶取血,離心,分離血清,測(cè)血清中T,E2水平;然后脫頸椎處死小鼠,迅速取前列腺和胸腺組織,稱前列腺濕質(zhì)量,計(jì)算前列腺指數(shù)(前列腺指數(shù)=前列腺濕質(zhì)量mg/小鼠體重g);將前列腺和胸腺于10%甲醛溶液中固定,石蠟包埋,切片,HE染色,光鏡下觀察各組前列腺和胸腺組織的形態(tài),胸腺皮質(zhì)厚度及淋巴細(xì)胞數(shù)的變化,對(duì)各組小鼠前列腺腺體進(jìn)行立體計(jì)量學(xué)測(cè)定,測(cè)定腺體的體密度(Vv)。2.2指標(biāo)測(cè)定2.2.1檢測(cè)抗體的制備用小鼠TELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定血清中T的含量:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),往預(yù)先包被T抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、對(duì)照品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的T呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(A),計(jì)算樣品濃度,即得到小鼠血清中T的含量。2.2.2選擇抗菌劑的制備用小鼠E2ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定血清中雌二醇的含量:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),往預(yù)先包被E2抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、對(duì)照品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的E2呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定A,計(jì)算樣品濃度,即得到小鼠血清中E2的含量。2.2.3前列腺腺體的體密度測(cè)量采用通用立體計(jì)量學(xué)測(cè)定方法,應(yīng)用測(cè)試格點(diǎn)分析法,計(jì)算腺體上的交叉點(diǎn)數(shù)與參照系中的交叉點(diǎn)數(shù)的百分比,為該組織中腺體的體密度。2.2.4皮質(zhì)厚度測(cè)量方法采用測(cè)微尺測(cè)量,測(cè)微尺測(cè)得胸腺皮質(zhì)最寬處和最窄處厚度,二者相加求算術(shù)均數(shù),即為所測(cè)胸腺皮質(zhì)厚度;胸腺淋巴細(xì)胞的計(jì)數(shù):采用測(cè)微尺的基線,計(jì)算壓在基線上的淋巴細(xì)胞的個(gè)數(shù)求均數(shù)。2.3統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。數(shù)據(jù)以表示,計(jì)量資料組間比較采用單因素方差分析。P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3結(jié)果3.1雞白鳳丸對(duì)小鼠血清中t、y水平的影響與空白對(duì)照組比,模型組小鼠血清中T水平顯著升高(P<0.01)。與模型組比,烏雞白鳳丸9g·kg-1劑量可顯著降低模型小鼠血清中T水平(P<0.01)、顯著升高血清中E2水平(P<0.01);癃閉舒組可明顯降低模型小鼠血清中T水平(P<0.05),以烏雞白鳳丸9g·kg-1劑量作用為優(yōu)。見(jiàn)表1。3.2小鼠登記成功組模型與空白對(duì)照組比,模型組小鼠前列腺濕質(zhì)量及前列腺指數(shù)均明顯增加(P<0.01),說(shuō)明造前列腺增生模型成功。與模型組比,烏雞白鳳丸9,4.5,2.25g·kg-1劑量和癃閉舒均可顯著降低前列腺增生模型小鼠前列腺濕重及前列腺指數(shù)(P<0.01)。有劑量效應(yīng)關(guān)系,以烏雞白鳳丸9g·kg-1劑量作用為優(yōu)。見(jiàn)表2。3.3對(duì)大鼠前列腺增生模型以及胸腺組織形式的影響3.3.1小鼠臟器正常組織病理學(xué)檢測(cè)空白對(duì)照組小鼠前列腺的腺上皮、腺腔及間質(zhì)均正常;模型組小鼠前列腺的腺上皮、間質(zhì)有大量纖維組織增生,間質(zhì)有炎細(xì)胞浸潤(rùn);癃閉舒組小鼠前列腺的腺上皮、間質(zhì)纖維組織消失;烏雞白鳳丸9g·kg-1劑量組小鼠前列腺的腺上皮、腺腔、間質(zhì)基本恢復(fù)正常;烏雞白鳳丸4.5g·kg-1劑量組小鼠前列腺的腺上皮、腺腔基本恢復(fù)正常,間質(zhì)有較少炎細(xì)胞浸潤(rùn);烏雞白鳳丸2.25g·kg-1劑量組小鼠前列腺的腺上皮、腺腔、間質(zhì)基本恢復(fù)正常,間質(zhì)有炎細(xì)胞浸潤(rùn)。對(duì)各組小鼠前列腺腺體進(jìn)行立體計(jì)量學(xué)測(cè)定,測(cè)定腺體的體密度(Vv),與空白對(duì)照組比,模型組前列腺腺體體密度顯著升高(P<0.01),說(shuō)明造前列腺增生模型成功。與模型組比,烏雞白鳳丸9,4.5,2.25g·kg-1劑量和癃閉舒均可顯著降低前列腺增生模型小鼠前列腺腺體的體密度(P<0.01)。見(jiàn)表3。3.3.2小鼠胸徑及細(xì)胞厚度的變化空白對(duì)照組小鼠胸腺小葉分界清楚,皮質(zhì)和髓質(zhì)均正常;模型組小鼠胸腺小葉分界清楚,皮質(zhì)明顯萎縮,淋巴細(xì)胞稀疏;癃閉舒組小鼠胸腺小葉分界清楚,皮質(zhì)萎縮,淋巴細(xì)胞密集;烏雞白鳳丸2.25g·kg-1劑量組小鼠胸腺小葉分界清楚,皮質(zhì)萎縮,淋巴細(xì)胞較致密;烏雞白鳳丸4.5g·kg-1劑量組小鼠胸腺小葉分界清楚,皮質(zhì)增厚,淋巴細(xì)胞密集;烏雞白鳳丸9g·kg-1劑量組小鼠胸腺小葉分界清楚,皮質(zhì)增厚,淋巴細(xì)胞密集。與空白對(duì)照組比,模型組胸腺皮質(zhì)厚度顯著變薄(P<0.01)、淋巴細(xì)胞數(shù)顯著減少(P<0.01);與模型組比,烏雞白鳳丸2.25,4.5,9g·kg-1劑量和癃閉舒均可顯著增加前列腺增生模型小鼠胸腺的厚度(P<0.01)、增加淋巴細(xì)胞數(shù)(P<0.01)。以烏雞白鳳丸9g·kg-1劑量作用為優(yōu)。見(jiàn)表4。4雞白鳳丸對(duì)胰腺毒性的影響本實(shí)驗(yàn)采用小鼠去勢(shì)后皮下注射丙酸睪酮成功建立前列腺增生模型,小鼠去勢(shì)后,前列腺迅速萎縮,再給予外源性雄激素,可造成動(dòng)物體內(nèi)性激素水平紊亂,使前列腺發(fā)生增生。睪酮(T)是人體內(nèi)主要的雄激素,在5α-還原酶作用下變?yōu)殡p氫睪酮(DHT),前列腺內(nèi)的DHT濃度增加可導(dǎo)致腺體增生。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)通過(guò)DHT的作用增加釋放,促前列腺間質(zhì)增生,刺激前列腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(EGF)與血漿中雄激素的含量呈正相關(guān),導(dǎo)致前列腺的增生,造成前列腺增生模型。雌雄激素比例的變化是前列腺增生的關(guān)鍵誘因,血清中睪酮、雌二醇水平對(duì)反應(yīng)前列腺增生狀況有重要意義。前列腺濕重及前列腺指數(shù)是反映前列腺增生程度最客觀的指標(biāo)之一,前列腺組織形態(tài)是確定是否增生的關(guān)鍵;前列腺增生是慢性病,長(zhǎng)期的病理變化可能會(huì)累及相關(guān)臟器。前列腺增生可能會(huì)累及機(jī)體免疫功能,胸腺的組織形態(tài)學(xué)變化及其淋巴細(xì)胞的個(gè)數(shù)可有效反應(yīng)前列腺增生的狀況。本實(shí)驗(yàn)表明,烏雞白鳳丸可顯著降低前列腺增生模型小鼠血清睪酮水平、顯著升高血清雌二醇水平,顯著降低模型小鼠前列腺指數(shù),顯著減輕造模所致的前列腺病理變化,使前列腺增生時(shí)伴發(fā)的胸腺萎縮顯著減輕,顯著增加胸腺皮質(zhì)厚度和淋巴細(xì)胞數(shù)。前列腺腺體體密度是前列腺病理變化的定量描述,可反映前列腺的病理改變。烏雞白鳳丸對(duì)丙酸睪酮所致的去勢(shì)小鼠前列腺增生模型有好的治療作用。有報(bào)道烏雞白鳳丸有一定的雌激素樣作用,與己烯雌酚具有相似的作用效果,均可顯著升高去勢(shì)大鼠血清中雌二醇含量;并具有一定的雄激素樣作用;另有報(bào)道烏雞白鳳丸,具有促進(jìn)子宮發(fā)育和增重的雌性激素樣作用,且具有雄性激素樣作用和蛋白同化作用;臨床治療前列腺炎有一定療效。這些作用可能與烏雞白鳳丸